蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

蛋白质凝胶电泳通常用于(1)分析分子生物学、遗传学和生物化学(2)制备技术(3)采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。实验方法原理将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及硫基乙醇一起加热,使蛋白质变性,多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原,肽链被打开。打开的肽链考疏水作用与SDS结合而带负电荷,电泳时在电场作用下,肽链在凝胶中向正极迁移。不同的肽链由于在迁移时受到的阻力不同,在迁移过程中逐渐分开,其相对迁移率与分子量的对数间成线性关系。实验材料丙烯酰胺试剂、试剂盒去离子水SDS浓盐酸Tris过硫酸胺TEMED甘氨酸仪器、耗材电泳槽电泳仪加样器吸头实验步骤1. 根据垂直电泳槽说明书安装玻璃板,确定需配制分离胶的浓度和体积,按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液”所列成分(见书末附录)配制所需分离胶;2.&nb......阅读全文

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

蛋白质凝胶电泳通常用于(1)分析分子生物学、遗传学和生物化学(2)制备技术(3)采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。实验方法原理将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及硫基乙醇一起加热,使蛋白质变性,多肽链内部

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

【材料与试剂】(1)30%的丙烯酰胺:分别称取29g 丙烯酰胺,1g N,N -亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml,加热至37℃溶解,补加水至终体积为100ml,过滤,即配成30%(w/v)丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸,这一脱氨基反应是光催化或

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

            实验方法原理 将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及硫基乙醇一起加热,使蛋白质变性,多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原,肽链被打开。打开的肽链考疏水作用与SDS结合而带负电荷,电泳时在电场作用下,肽链在凝胶中向正极迁移。不同

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

【材料与试剂】(1)30%的丙烯酰胺:分别称取29g 丙烯酰胺,1g N,N -亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml,加热至37℃溶解,补加水至终体积为100ml,过滤,即配成30%(w/v)丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸,这一脱氨基反应是光催

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备方法

【材料与试剂】(1)30%的丙烯酰胺:分别称取29g 丙烯酰胺,1g N,N -亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml,加热至37℃溶解,补加水至终体积为100ml,过滤,即配成30%(w/v)丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸,这一脱氨基反应是光催化或碱催

SDSPAGE凝胶电泳凝胶的制备方法

SDS-PAGE电泳可用于分离蛋白质和核苷酸 ,这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。一. 实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子 量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——Laemmli凝胶电泳法

电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物,研究蛋白质的亚基组成以及证实蛋白质的均一性等,还能纯化出蛋白质用于后续的研究工作。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的孔径,蛋白质的电荷、大小、性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris·ClSDS仪器、耗材电泳仪离心机真空泵实验步骤1.

琼脂糖凝胶电泳仪凝胶的制备

琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳,广泛用于核酸的研究,为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。 琼脂糖凝胶是从琼脂中精制出来的白色胶状多糖,是由1,3连接的β-D吡喃半乳糖和1,4连接的3,6脱水β-D吡喃半乳糖交替而成的中性物质。琼脂糖由于氢键和其它力的

琼脂糖凝胶电泳仪凝胶的制备

琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳,广泛用于核酸的研究,为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。琼脂糖凝胶是从琼脂中精制出来的白色胶状多糖,是由1,3连接的β-D吡喃半乳糖和1,4连接的3,6脱水β-D吡喃半乳糖交替而成的中性物质。琼脂糖由于氢键和其它力的作用使

琼脂糖凝胶电泳仪凝胶的制备

琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳,广泛用于核酸的研究,为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。琼脂糖凝胶是从琼脂中精制出来的白色胶状多糖,是由1,3连接的β-D吡喃半乳糖和1,4连接的3,6脱水β-D吡喃半乳糖交替而成的中性物质。琼脂糖由于氢键和其它力的作用使

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——制备多块梯度胶

实验材料蛋白质试剂、试剂盒TEMED丙烯酰胺仪器、耗材离心管电泳仪实验步骤1.  如灌制均一浓度凝胶一样在多板凝胶灌制装置中组装好微型胶夹层。 2.  如图一、安装好30 ml 梯度发生器、磁力搅拌器、蠕动泵(可选用)和聚乙烯Tygon管,梯度发生器的输出端连接于制胶室下方的输入口。图一3.  配制

sdspage凝胶电泳怎么制备

SDS-PAGE电泳可用于分离蛋白质和核苷酸,这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。一.实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——均一浓度的微型凝胶电泳

实验材料蛋白质试剂、试剂盒电泳缓冲液仪器、耗材电泳仪梳子注射器夹子实验步骤1.  按顺序安装带凹口的小玻璃平板或小矩形玻璃平板、0.75 mm 垫片、大矩形玻璃平板叠放在一起组装成夹层,并确保夹层放入多胶灌制装置后,垫片能安放妥当,两头均与玻璃平板的上下边缘对齐。 2.  将凝胶夹层紧密地安放在多板

蛋白质的(PAGE)聚丙烯酰胺凝胶电泳制备方法

一.试剂制备:    1.分离胶缓冲液(pH8.9):36.6gTris,48ml1mol/l的HCl,或先加水至80ml,用浓HCl调pH,再定容至100ml.    2.浓缩胶缓冲液(pH6.7):5.98gTris,48ml1mol/l的HCl, 或先加水至80ml,用浓HCl调pH,再定容至

双向凝胶电泳试验样品制备的相关介绍

  双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。  双向电泳成功的关键在于建立一套有效的、可重复的样品制备方法。样品制备的影响

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验

Laemmli凝胶电泳法 无尿素条件下用Tris缓冲液分离多肽 连续SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 超薄凝胶的灌制和电泳 均一浓度的微型凝胶电泳 制备多块梯度胶      

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 Tris·ClSDS仪器、耗材 电泳仪离心机真空泵实验步骤 1.  按厂商的使用指南用两块干净的玻璃平板和0.75 mm 垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层,并固定在灌胶支架上2.  配置分离胶液体并脱气,然后加10%的过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌混匀。3.  用一根巴

琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测

一. 实验目的1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。二. 实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,沸水中溶解,45℃开始形成多孔性刚性滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性环境中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——超薄凝胶的灌制和电泳

实验材料蛋白质试剂、试剂盒乙醇仪器、耗材电泳仪垫片样品梳实验步骤1.  用水性实验室去污剂彻底洗擦制胶用玻璃平板,接着用热水、去离子水、95%乙酵依次冲洗,晾干。 2.  用粘胶棒在玻璃平板的底部边缘擦上一道粘痕,快速地将Gel Bond 胶片以疏水面向下放在平板上,隔着kimswipe纸巾用力压,

凝胶电泳

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,大

脉冲场凝胶电泳制备DNA(酵母完整DNA的分离)

实验方法原理 制备用于电泳的酵母 DNA,先用酶破坏酵母细胞胞壁,然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬,制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液,以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进,它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母

脉冲场凝胶电泳制备DNA(酵母完整DNA的分离)

            实验方法原理 制备用于电泳的酵母 DNA,先用酶破坏酵母细胞胞壁,然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬,制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液,以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的

脉冲场凝胶电泳制备DNA(酵母完整DNA的分离)

制备用于电泳的酵母 DNA,先用酶破坏酵母细胞胞壁,然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬,制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液,以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进,它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母染色体和酵母人工染色体(Y

蛋白质组的双向凝胶电泳技术介绍

  双向凝胶电泳技术与质谱技术是目前应用最为广泛的研究蛋白质组学的方法。双向凝胶电泳技术利用蛋白质的等电点和分子量差别将各种蛋白质区分开来。虽然二维凝胶电泳难以辨别低丰度蛋白,对操作要求也较高,但其通量高、分辨率和重复性好以及可与质谱联用的特点,使其成为目前最流行、可靠的蛋白质组研究手段。双向凝胶电

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验             试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺 尿素

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇(2-丁醇)二乙醚NaOAcMgCl2乙醇TBE甲酰胺加样缓冲液TE仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵(10%;w/v)N,N,N'

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵 NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇(2-丁醇)二乙醚 NaOAcMgCl2 乙醇TBE 甲酰胺加样缓冲液 TE仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤 材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵(10%;w/v)N,

用制备性凝胶电泳纯化寡核苷酸

试剂、试剂盒40% (m V) 19:1丙烯酰胺 双丙烯酰胺16%聚丙烯酰胺凝胶10×TBE缓冲液尿素10% (m V)过硫酸铵TEMED甲酰胺加样缓冲液仲丁醇(2-丁醇)二乙醚1 mol L MgCl2仪器、耗材Saran保鲜膜或其他可透紫外光的塑料膜增感屏(如 Lightning PlusDuP

凝胶电泳中凝胶的意义

凝胶电泳仪需要使用形成为平板的凝胶,该凝胶通常由纯化后的海藻琼脂糖琼脂糖制成。琼脂糖凝胶制成多孔基质,各种大小的带电分子可以通过多孔基质以不同的速度传播。在将凝胶倒入模具之前,将一种称为溴化乙锭(EtBr)的化学物质添加到凝胶溶液中。如果要分离的DNA或蛋白质分子很小,则可能需要使用聚丙烯酰胺凝胶代

蛋白质单向SDS凝胶电泳实验——连续SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物,研究蛋白质的亚基组成以及证实蛋白质的均一性等,还能纯化出蛋白质用于后续的研究工作。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的孔径,蛋白质的电荷、大小、性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS磷酸仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1.  按“Laemm