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基因传递到肌肉实验

实验材料 新生的小鼠试剂、试剂盒 乙醇PBS胶原蛋白酶 分散酶 氯化钙溶液F-10肌肉原代细胞培养基分化培养基仪器、耗材 用于断头术的器具或者是用于二氧化碳吸人的装置锋利的弯手术剪(灭菌) 组织培养板灭菌的剃刀刀片尼龙网桌面离心机胶原包被的组织培养板带相位光轴的倒置显微镜实验步骤 1.用断头术或者二氧化碳吸入法处死 1~5 只新生小鼠。2.用 70% 的乙醇冲洗四肢,并用锋利的弯手术剪切下来。在立体解剖显微镜下工作,用钳状骨针将肌肉从皮肤和骨头上切下来。如果四肢都成功地切下来,将肌肉组织存放在一个的组织培养板中,滴上灭菌 PBS,确保这些累计的组织的无菌性。3.加足够量的 PBS 保持组织湿润然后用剌刀在培养板中将其切碎成肉泥。然后加胶原蛋白酶/分散酶/氯化钙溶液,按每克 2 ml 的量加人(对于 1~5pups 的量加 0.5 ml), 继续切割几分钟。以上操作和接下来的步骤都在灭菌的组织培养罩上进行。4.将切碎的组织转移到一......阅读全文

常用的分子生物学基本技术2

IS PCR的技术特点 (1)既具有PCR的特异性与高灵敏性,又具有原位杂交的定位准确性;(2)测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列,甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA;(3)有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析;(4)可用于正常或恶性细胞,感染或非感染细胞的鉴定

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

基因疗法进入临床试验,CRISPR基因编辑是在劫难逃吗?

  任何近期观看过哥伦比亚广播公司(CBS)网站上关于引发生物学医学研究变革的CRISPR基因编辑工具的 60分钟视频片段[1]的人都会得出结论:这种基因编辑技术正处于开发出一连串治愈方法的边缘。但是最近的一项研究[2]揭示出在部署这种著名的“分子剪刀”之后,一大堆染色体片段会发生缺失和重排。  C

聚焦基因疗法研究新进展

  本文中,小编整理了多篇重要研究成果,共同聚焦科学家们在基因疗法研究领域取得的新进展,分享给大家!  图片来源:mainnews.net  【1】两种基因疗法或有望治愈罕见遗传病  doi:10.1172/jci.insight.130260 doi:10.1073/pnas.1906182116

基因疗法准备就绪

  15年前,基因疗法遭遇了一系列悲剧性挫折,使得科学家开始对其进行严格的重新评估;15年后,基因疗法已经做好准备,即将进入临床。  里基·刘易斯是一名拥有遗传学博士学位的科学作家。她参与过多本教材的编写,在许多杂志上发表过文章,她还是《永恒的治愈:基因疗法和拯救它的男孩》(The Forever

致终将到来的基因治疗

基因治疗的前景是十分可观的。在过去的一年时间内,有许多企业对生物医药进行了合并与收购,其中最大的一场交易当属诺华公司斥资87亿美元购买下AveXis,根据其去年11月在新英格兰医药杂志上发表的1期实验数据,将推进候选药物AVXS-101到后续关键实验。相关资料显示,729例基因治疗方案已经诞生,其中

2019年8月CRISPR/Cas最新研究进展

  基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一,受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称,Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的,是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。图片

哈佛遗传学大神George Church谈基因技术:人类增强还是人类异化?

  George Church:分子技术专家,DNA研究领域的领军人物,哈佛大学遗传学教授,哈佛医学院基因组研究中心主任。他于1985年参与到人类基因组计划,也是这个计划的负责人。他发明的新方法开创了个人基因组研究的时代。基于他发明的直接基因组测序的方法,自动测序软件被成功开发,并在1994年第一次

艾滋病基因疗法动物试验获得成功

  据美国物理学家组织网12月1日(北京时间)报道,加州理工大学的诺贝尔奖得主戴维·巴尔的摩领导的研究小组研发出一种以腺病毒(AAV)为载体的基因疗法,能使小鼠肌肉细胞产生多种强效中和性艾滋病病毒(HIV)抗体,保护它们免受感染。相关论文发表在11月30日的在线《自然》杂志上。  研究人员将一种腺病

一文带你了解近期基因疗法研究领域重要成果!

  本文中,小编整理了多篇研究成果,共同解读科学家们在基因疗法研究领域取得的新成果,分享给大家!图片来源:www.pixabay.com  【1】JCI:新技术提高基因疗法治疗视力的效果  doi:10.1172/JCI129085  在以大鼠,猪和猴子为模型的实验中,约翰霍普金斯大学医学院的研究人

Cell子刊:胞外体,膜蛋白的转运仓

  麻省大学UMass医学院的一项新研究显示,胞外体(exosome)能够在关键的信号传导过程中,将蛋白从神经元运送到肌肉细胞,文章发表在Cell旗下的Neuron杂志上。研究显示,胞外体可以转运膜蛋白,在神经系统的细胞间通讯中具有重要作用。此外,这项激动人心的发现意味着,胞外体可以用来装载治疗药物

成体细胞还原为胚胎干细胞的探索之路

  不用创建一个胚胎,而将成体细胞还原为胚胎状态是一件棘手的事情。科学家们现已能重置一个成熟体细胞中的DNA,使该细胞能成长为人体内的任何细胞类型,如心脏肌肉细胞、神经细胞和膀胱细胞等。   一个病人到医院诊断病情,医生告知其诊断结果不太好,必须进行手术治疗。   于是,医生从病人的头上拔出一根

基因疗法与接种疫苗结合 鼻腔注射有望打败流感

一种名为F16的抗体能够保护动物免遭一系列流感病毒的侵袭。图片来源: D. Corti和A. Lanzavecchia现在,研究人员提出了一个替代性方案,作为当流感病毒浮出水面时,可以采取的一个更快的策略:该方案只须将带有保护性抗体的基因注射到人们的鼻子里。研究显示,这个方法——借助于基因

动植物的基因编辑,在争议中前行

  早在公元前12000年,人们就开始种植农作物。他们逐渐开始懂得挑选最好的那一株,这标志着农作物改良的开始。农作物改良,从来都是一个漫长而繁琐的过程,而如今,科学家能够快速轻松地实现。  这多亏了一种被誉为“基因剪刀”的CRISPR技术。它是一种灵活高效的基因组编辑工具,能够对几乎任何物种的基因组

Nature子刊: Scripps开发转基因系统用于调节基因疗法剂量

  Scripps研究所的科学家开发了一种特殊的分子开关,该开关可以嵌入基因疗法中,使医生能够控制剂量。免疫学教授Michael Farzan博士与团队。图片来源:Scripps研究所  《Nature Biotechnology》报道了这一壮举,它为基因疗法设计人员提供了可能是第一种调整其治疗基因

如何选择BTX转基因仪(电转仪)?(二)

植物细胞转化         (系统:ECM630/830)      对植物原生质(玉米、烟草等)及完整植物的电穿孔可以用于产生对农业/园艺有用的转基因作物。植物细胞转化的一个主要目的是对植物细胞进行稳定转化以产生具有优良品

临床前研究:让老鼠物尽其用

       在失败的转化实验中,老鼠作为最令人不安的因素之一承担了过错。即便动物实验证明一种疗法是安全和有效的,但当用于人类时,仍有超过80%的潜在疗法失败。动物模型通常被谴责为检验一种实验药物能否成为有效疗法的欠佳预测变量。然而,真正的

全面回顾:2014年全球生物医学突破进展

  美 国  遗传研究更深入掌控基因;细胞学攻克检测与治疗多项难题;脑科学研究记忆刺激技术帮助恢复记忆,发现大脑存在“意识开关”和“信息交换台”。  遗传学方面,杜克大学绘制出综合酵母菌基因脆弱位点图,而脆弱位点所在区域正是DNA复制机变慢或停顿的地方,揭示了许多固体肿瘤中基因异常的源头;冷泉港实验

2014年世界生物医学科技发展回顾

  生物 医学  美 国  遗传研究更深入掌控基因;细胞学攻克检测与治疗多项难题;脑科学研究记忆刺激技术帮助恢复记忆,发现大脑存在“意识开关”和“信息交换台”。  田学科(本报驻美国记者)遗传学方面,杜克大学绘制出综合酵母菌基因脆弱位点图,而脆弱位点所在区域正是DNA复制机变慢或停顿的地方

神经生物学领域最新研究进展

  本期为大家带来的是神经生物学领域最近的研究进展,希望读者朋友们能够喜欢。  1. Nature:新研究首次揭示抑制年龄相关的神经活动增加竟可延长寿命  doi:10.1038/s41586-019-1647-8.  在一项针对线虫、小鼠和人类的研究中,来自美国哈佛医学院的研究人员发现在整个动物界

腺病毒载体综述

腺病毒的一般特性    腺病毒的形态是特征性的二十面体病毒壳体(Stewart et al., 1993)。其病毒壳体含有三种主要的蛋白:六邻体(II),五邻体基底(III)和纤突(IV),还有多种其他的辅助蛋白VI,VIII,IX,IIIa和Iva2(Fig. 1)。

PNAS:药物改变母代小鼠基因可预防子代小鼠亨廷顿氏病

  饥饿、药物滥用甚至应激都有可能“沉默”某些基因,导致几代人出现健康问题。现在,科学家们正在猜测:是否改变父母基因表达的疗法可以帮助他们的孩子保持健康?  近日,斯克里普斯研究所(TSRI)科学家完成的一项新的研究表明,这是可能的。该研究显示,用药物处理小鼠后,小鼠后代亨廷顿氏病推迟发作,亨廷顿氏

权威学者:基因组编辑带来医学新纪元

  基因组编辑是精确修饰基因组核苷酸序列的过程。它提供了一种强有力的方法来研究各种问题,随着一系列新工具的发展,现在我们有可能实现的基因组编辑频率足够高,可产生有用的医疗价值。正在开发的基因组编辑,不仅可用于治疗单基因疾病,也可用于治疗传染病和有遗传和环境成分的疾病。  12月22日,国际著名学术期

清华大学团队发文揭示代谢分子肌酸的免疫调节功能

  2019年8月6日,清华大学医学院胡小玉课题组联合药学院陈立功课题组在《细胞》(Cell)子刊《免疫》(Immunity)杂志在线发表了题为 《Slc6a8介导的肌酸转运和积累通过调控细胞因子应答来重编程巨噬细胞的极化》(Slc6a8-mediated creatine uptake and a

GEN:基因编辑之下,罕见病治疗触目可及

图片来源:Pixabay  除了制药、生物技术和医疗器械公司,针对罕见病进行的基因治疗也得到政府的支持。  例如,美国国立卫生研究院(NIH)共同基金为NIH未诊断的疾病网络分配了约2亿美元,以加速对罕见和未知疾病的诊断及致病机理的揭示等工作。  此外,NIH已经启动了罕见和被忽视疾病的治疗方案(T

Nature Biotechnology:哈佛华裔发布基因组编辑新技术

   作为潜在的新一代治疗和研究工具,几乎没有什么生命科学技术比基因组编辑蛋白质更具发展前景——研究人员可通过编程这些分子来改变特定基因,以治疗或甚至治愈一些遗传性疾病。  可是,要将这些基因组编辑蛋白导入到细胞中,尤其是活体动物或人类患者体内,对于研究人员而言却仍是一个巨大的挑战。  通常,研究人

10大研究中心联合启动新基因疗法临床试验

美国俄勒冈卫生科学大学进行的一项新临床实验正在检测一类搭乘“无害病毒快车” 到达神经细胞的治疗性基因是否能够缓解帕金森症的症状。 俄亥俄和其他另外9个地点进行的为期一年的试验步骤包括将一种叫做AAV2的失活病毒与一个能使神经细胞制造neurturin的基因配对。Neurturin是一种可能改善产多

造血干细胞研究进展

  造血干细胞(hemapoietic stem cell, HSC)是存在于造血组织中的一群原始造血细胞,它不是组织固定细胞,可存在于造血组织及血液中。造血干细胞在人胚胎2周时可出现于卵黄囊,妊娠5个月后,骨髓开始造血,出生后骨髓成为干细胞的主要来源。在造血组织中,所占比例甚少。现代医学中,造血干

年终盘点:2016年国内不容错过的重磅生物研究

  时间总是过得很快,2016年马上就要过去了,迎接我们的将是崭新的2017年,2016年,我国有很多优秀科研机构的科学家们都做出了意义重大、影响深远的研究成果,发表在国际顶级期刊上。本文中小编盘点了2016年我国科学家发表的一些重磅级研究,以饕读者。   --结构生物学 --  1.清华大学 施一

恐惧感如何产生?又该如何应对?

  提到恐惧,可能很多人都经历过,比如社交恐惧症、一些恐惧害怕的记忆等等,那么恐惧感到底从何而来,又该如何克服恐惧症呢?看看下面的研究或许能够帮到你!  【1】恐惧不可怕,抹除就好  DOI:10.1016/j.neuron.2017.08.004  加利福利亚大学的研究者发现了一种新方法——减弱参