基因传递到肌肉实验

实验材料 新生的小鼠试剂、试剂盒 乙醇PBS胶原蛋白酶 分散酶 氯化钙溶液F-10肌肉原代细胞培养基分化培养基仪器、耗材 用于断头术的器具或者是用于二氧化碳吸人的装置锋利的弯手术剪(灭菌) 组织培养板灭菌的剃刀刀片尼龙网桌面离心机胶原包被的组织培养板带相位光轴的倒置显微镜实验步骤 1.用断头术或者二氧化碳吸入法处死 1~5 只新生小鼠。2.用 70% 的乙醇冲洗四肢,并用锋利的弯手术剪切下来。在立体解剖显微镜下工作,用钳状骨针将肌肉从皮肤和骨头上切下来。如果四肢都成功地切下来,将肌肉组织存放在一个的组织培养板中,滴上灭菌 PBS,确保这些累计的组织的无菌性。3.加足够量的 PBS 保持组织湿润然后用剌刀在培养板中将其切碎成肉泥。然后加胶原蛋白酶/分散酶/氯化钙溶液,按每克 2 ml 的量加人(对于 1~5pups 的量加 0.5 ml), 继续切割几分钟。以上操作和接下来的步骤都在灭菌的组织培养罩上进行。4.将切碎的组织转移到一......阅读全文

单细胞基因组测序如何实现:从实验到分析,步步解析

  随着生命科学研究的微观化,基于细胞群体的研究方法已不适用于某些研究领域(如肿瘤异质性、早期胚胎发育等)。单细胞基因组测序通过在单个细胞水平上进行测序,解决了用组织样本无法获得不同细胞间的异质性信息或样本量太少无法进行常规测序的难题,为科学家研究单个细胞的行为、机制等提供了新的方向。  【应用概览

微流控芯片技术助力免疫治疗,将CRISPR传递到人类T细胞

 CRISPR/Cas9是最新出现的一种基因进行编辑的技术,给揭示疾病发生机理以及靶向基因疗法治愈遗传疾病带来了希望。基于CRISPR的T细胞编辑为免疫靶向癌症、艾滋病以及先天性免疫缺陷等方向提供了新的治疗方案,然而高效的编辑和改造T细胞一直以来是该领域一个巨大挑战。据悉,美国康奈尔大学Housto

肌肉肌球蛋白和肌动蛋白纯化实验_DEAE纯化肌肉肌球蛋白

实验材料肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒焦磷酸钠柱平衡缓冲液柱缓冲液高盐缓冲液肌球蛋白-DEAE 透析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤一、准备 DEAE 柱和材料1. 准备贮存液和材料200 mmol/L 焦磷酸钠(NaPPi ),pH 7.0用 HCl 和 H3PO4 调 NaPPi 溶液的 pH

单精子分型实验——--基于单体型传递的分离偏斜实验

实验步骤单精子细胞分析非常适用于对单体型父系传递的研究,尤其是在致病单体型相对于正常单体型可能存在优势传递的情形下。Spermseg(http://gakon.uchicago.edu/mepeek/software/spermseg) 就是专门为分析单精子细胞单体型分离而开发的计算机程序。在这些病

警惕!抗生素抗性基因在土里传递

  如今,抗生素耐药性的扩散已经严重威胁全球人类健康。科研人员正在不同领域从不同角度研究这一问题。  日前,中科院城市环境研究所(以下简称城环所)朱永官院士团队在《环境科学与技术》发表文章称,根据其对土壤食物网中动物抗生素抗性基因(ARGs)变化规律的研究,ARGs会通过土壤食物网进行传递,并且土地

抗衰老研究:从基因到药物

 自古以来,人类就追求青春常在,生命不老,历史上曾出现过许多寻找“长生不老”秘方以及炼制“仙丹灵药”的活动。时至今日,人们 已认识到“长生不老”只是一个美梦,但是延缓衰老却是可能实现的,寻找抗衰老药物的脚步一直没有停息。随着科学技术的进步,科研的触角已经深入到了基因水平,进而发现了更多药物的抗衰老作

细菌的耐药性变异——-R因子传递实验

实验方法原理 应用具有链霉素R 因子的大肠杆菌作为供体菌,对链霉素敏感的痢疾杆菌作为受体菌。经共同孵育后,由于供体菌与受体菌间的接合,供体菌的链霉素R 因子转移给受体菌,而使痢疾杆菌获得耐链霉素的特性,因此能在含链霉素的S-S平板上生长。由于痢疾杆菌不分解乳糖而呈无色半透明菌落。大肠杆菌能分

PLoS-ONE:AMPK基因突变导致肌肉糖原增加

可能用于II型糖尿病治疗  一个由Mary-Ellen Harper、Robert Dent和Ruth McPherson博士领导的渥太华研究组联合来自美国加州伯克力的研究人员对AMPK(腺苷单磷酸活化蛋白激酶)基因进行了深入研究。这种酶控制着我们细胞中的能量数量。在两个没有亲缘关系的家族中的成员细

纯化非肌肉肌球蛋白实验——细胞匀浆

实验材料细胞试剂、试剂盒缓冲盐溶液二异丙基氟瞬酸匀浆缓冲液仪器、耗材相差显微镜实验步骤1. 准备下面的贮液和材料。等渗的缓冲盐溶液(例如 PBS,150 mmol/L NaCl;10 mmol/L NaPO4,pH 7.2)二异丙基氟瞬酸(DIFP)1 mol/L 咪唑-HCl,pH 7.00.5

强制对流型实验室烘箱实验室应用热量传递方式

强制对流型实验室烘箱实验室应用热量传递方式    强制对流型实验室烘箱对流是流体各部分之间发生相对位移,依靠冷热流体互相掺混和移动所引起的热量传递方式。流体受热后会迅速膨胀并伴随着上升趋势,较冷的流体即下沉取代其位置,从而建立对流。然后,对于强制对流的设备,流体流动则是依靠外力驱动而引发(如泵、风机

美实验室培育出可收缩肌肉

  美国杜克大学的一组研究人员宣布培育出具有机能的肌肉组织,当受到电流或化学刺激时,它们能够收缩。Gizmag网站报道指出,通过将肌细胞祖细胞添加到一个3D硅胶支架中,该研究小组能够利用每50毫克供体组织培育出5克肌肉组织。而研究人员表示,这种实验室制备的组织将能充当药物实验和临床试验平台,从此不需

成年大鼠心室肌肉细胞的分离和培养实验

分离ARVM细胞             实验材料 鼠 试剂、试剂盒

成年大鼠心室肌肉细胞的分离和培养实验

分离ARVM细胞             实验材料 鼠 试剂、试剂盒

实验室内培育出可自愈人工肌肉

        科学家制造出不仅功能像真正肌肉还可自行治疗的活骨骼肌。照片显示,长长的颜色艳丽的改造后肌肉纤维已被着色,目的是让科学家可以观察将其植入一只老鼠体内后的生长情况。  照片展示了置于一种蛇毒毒素中的改造后肌肉纤维的损伤和恢复。科学家首次证明了改造后肌肉植入一只活动物后可以自行修复。照片中

肌肉组织染色实验——横纹肌组织染色

肌肉组织由肌细胞和肌纤维组成,可分为骨骼肌、心肌和平滑肌。骨骼肌含有横纹,肌纤维被结缔组织连接与包围,纤维成束排列,而每条肌纤维周围含有网状纤维和少贵的结缔组织。心肌纤维也含有横纹,纤维之间相互连接成网状结构。平滑肌纤维的外表面含有网状纤维和胶原纤维成分。根据需要通过不同的特殊染色和组织化学方法,能

肌肉组织染色实验——早期心肌组织病变染色

实验方法原理早期心肌组织病变染色,是 Lie 和 Nagar-Olsen 利用缺氧心肌对酸性复红的亲和力,称为嗜酸性复红染色法;利用其对碱性复红的亲和力,称为亲碱性复红染色法。能够较好地显示心肌缺氧的变化情况。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒苏木精硫酸铝铵黄色氧化汞甘油冰醋酸蒸馏水碱性复红苦味酸纯丙

肌肉组织活检的实验室方法介绍

  (1)制片技术:肌肉的组织化学染色主要是测定肌肉中各种酶的含量,由于石蜡切片的处理过程中常将肌肉中的酶破坏,故已被淘汰。主要用液氮快速冷冻法。  首先将肌肉标本纵向垂直种植在一小软木片上,放置时应注意肌纤维的方向,周围用黄耆胶固定,露出肌肉上端。然后将盛有异戊烷的烧杯放入液氮容器(保温瓶)中,当

利用脂质纳米颗粒多次递送CRISPRCas9到多种肌肉组织中

  许多难治的疾病是基因突变的结果。基因组编辑技术有望校正该突变,从而为患者提供新的治疗。然而,将该技术用于需要校正的细胞仍然是一个重大挑战。在一项新的研究中,来自日本京都大学等研究机构的研究人员报告了脂质纳米颗粒如何为治疗杜兴氏肌肉营养不良症(DMD)小鼠模型提供有效的递送手段。相关研究结果于20

固定化酶到聚酯的实验

基本方案             实验方法原理 聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,Terylene,Trevira,Diolen)是通过

固定化酶到聚酯的实验

实验方法原理聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,Terylene,Trevira,Diolen)是通过对苯二酸盐和乙烯乙二醇的缩聚形成的,在这两步过程中三氯化锑作为催化剂(图 1)。用过量的乙烯乙二醇,最初形成一个低分子质量的具有末端竣基的聚合物再通过乙烯

固定化酶到聚酯的实验

实验方法原理 聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,Terylene,Trevira,Diolen)是通过对苯二酸盐和乙烯乙二醇的缩聚形成的,在这两步过程中三氯化锑作为催化剂(图 1)。用过量的乙烯乙二醇,最初形成一个低分子质量的具有末端竣基的聚合物再通

美国发布《从数据到发现:基因组到健康》白皮书

  2014年3月,美国国家数据科学联盟(NCDS)发布了《从数据到发现:基因组到健康》白皮书,以便于解决基因组学面临的重大挑战。该白皮书是通过聚集数据科学领域与基因组学领域的领袖人物,共同探讨当前基因组学的挑战,并集思广益,就最为恰当且技术先进的建议达成的共识。   基因组学能够为数据科学相关研

转录体分析找到调控神经退化的基因和讯息传递路径

  神经元大规模消失是正常神经系统发育中的一个重要过程,然而,神经退化性病变也有相同的特征,例如阿兹海默症,帕金森氏症,亨丁顿氏症和肌萎缩性侧索硬化症等。虽然在不同的神经退化性疾病中,触发这些神经死亡的分子机制是不同的,但这些疾病以及发育性调节神经元死亡所引起的下游神经细胞凋亡过程是共通的。为了理解

细菌的耐药性变异——-R-因子传递实验——划线法

有些细菌携带接合性R 质粒,并能通过接合将耐药性传递给原来敏感的细菌,使其迅速转为耐药菌。耐药性质粒除了在同种细菌中作水平传递外,还可以在异种细菌之间传递,因而使对抗生素的耐药菌株不断增多,造成防治上很大的困难。实验方法原理应用具有链霉素R 因子的大肠杆菌作为供体菌,对链霉素敏感的痢疾杆菌作为受体菌

基因编辑技术成功治愈遗传性肌肉营养不良

  如今十分热的基因组编辑工具-CRISPR又取得了一项新的成就:研究者们利用这工具治愈小小鼠的多种肌肉营养障碍症。三个研究组最近发表在《science》杂志上的文章表明,他们利用CRISPR技术敲除了患有Duchenne muscular dystrophy症状的小鼠基因组中的一个有缺陷的基因,使

Nat-Commun:突破!科学家首次鉴别出“肌肉力量”基因

  近日,一项刊登在国际杂志Nature Communications上的研究报告中,来自剑桥大学的研究人员通过研究首次在人类机体中鉴别出了能够影响肌肉力量的常见遗传因子;文章中,研究人员利用来自英国生物样本库中超过14万参与者的双手握力数据进行分析,同时结合英国、荷兰、丹麦和澳大利亚5万名参与者的

肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验

肌球蛋白的纯化 DEAE纯化肌肉肌球蛋白             实验材料 冷冻肌肉 试

肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验

肌球蛋白的纯化DEAE纯化肌肉肌球蛋白实验材料冷冻肌肉                                                          试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液                                                  

肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验

实验材料 冷冻肌肉试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 玻璃器皿实验步骤 1. 准备下面的贮存液(都冷却到 4℃)。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl,0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水(dH2O)4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol

如何将基因转染到肝星状细胞

基因转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中,核酸包括DNA(质粒和线性双链DNA),反义寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究。