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实验室WesternBlot荧光实验干货分享

听说隔壁实验室买了一台新成像,可以做Western Blot荧光扫描式Azure Sapphire成像,效果很好,操作也简单,小师妹一脸羡慕,问了句,我从来没做过荧光实验,现在期刊杂志要求也在升级,也建议使用荧光的方法,之前因为没有合适的仪器,所以不能尝试,现在可以准备我的实验了,那从化学到荧光Western Blot实验,有哪些注意事项,或者哪些不同呢?Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统实验室大师兄这时候走过来,听听师兄给你的建议,以后要多看书,知道吗?一、增加浓度与化学发光Western Blot相比,所需的一抗和二抗的浓度可能会增加,这也取决于您使用的成像仪系统。在激光成像器中,这种影响可能不太明显。二、首先进行单色实验测试首先单独测试您的抗体非常有意义。这样,您可以确定最佳浓度,在简单的环境中可以把背景或非特异性的因素考虑进去,而不是一次性分析3种不同的一抗和二抗。三、使用吸附性二抗虽然听起来很......阅读全文

为什么要从化学发光转换到荧光检测?

Western blot成像方法取决于二抗的标记物,常用的方法有基于酶促反应的化学发光法,基于荧光染料的可见荧光方法和红外荧光方法,那么我们应该如何选择呢?*合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息,也就是取决于您的实验目的,小编比较了现有方法的优缺点,并分享了自己的心得,希望

为什么要从化学发光检测转换到荧光检测?

Western blot成像方法取决于二抗的标记物,常用的方法有基于酶促反应的化学发光法,基于荧光染料的可见荧光方法和红外荧光方法,那么我们应该如何选择呢?最合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息,也就是取决于您的实验目的,小编比较了现有方法的优缺点,并分享了自己的心得,希望

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

分子克隆介绍

各位小伙伴,大家还记得当初进实验室的时候接触到的一个实验技能是什么呢?没错,是 PCR 扩增。小编曾经也是,看着自己亲自配比 PCR 克隆扩增的每个组分,亲眼看着琼脂糖凝胶在紫外透光台上发出的幽绿色的荧光,也是深深被迷住。但总不可能成天就对着这个邪魅的荧光发呆,对吧?看久了,她会爱上你的眼

WB新时代开启 GE医疗发布Amersham WB蛋白免疫印迹系统

  2014年9月24日,2014慕尼黑上海分析生化展在上海新国际博览中心隆重拉开帷幕。GE医疗生命科学亮相2014慕尼黑上海分析生化展,举办新品发布会全球同步发布Western

美《科学家》杂志评选出2016年生命科学领域十大创新产品

  美国著名科普杂志《科学家》(The Scientist)是一份在生命科学方面被广大读者认可,并受业界尊敬的月刊杂志。该杂志一直致力于研究生命科学,为科研人员提供最新的研究动态,科研成果发布等多方面的报道。每年年底,该杂志都会颁发生命科学相关的十大创新产品奖项。  近日,《科学家》公布了其评选的2

Western blotting蛋白印迹市场概况和主要品牌及产品

近日,MarketsandMarkets咨询公司发布了全球western blotting市场的分析报告。据MarketsandMarkets预测,全球western blotting的市场规模将从2016年的5.75亿美元增长到2021年的7.31亿美元,复合年均增长率达4.9%。另一家Futur

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B

蛋白标准品(Marker)知识汇总

相关专题 蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着

western blot激光近红外荧光检测的特点

Western blot方法是生物实验室常用的蛋白检测方法之一,自从1979提出至今已有数十年的历史。常用的检测方法有化学发光法和荧光方法。NIR近红外荧光检测方法,印迹膜自发荧光较低,信噪比高。NIR荧光检测能获得高信噪比和高质量图片主要依赖于激发强度大,精密的激光光源和专业的光学元件。我

如何选择Alpha凝胶成像?

如何选择Alpha凝胶成像,Alpha公司是一家专注于凝胶成像的研发,特别是高端产品的开发和生产的公司。其化学发光成像、多色荧光凝胶成像产品在高端凝胶成像市场一直深的用户青睐。目前是美国ProteinSimple公司的一部分,但产品与品牌仍保持一定的独立性,被收购后在高端产品部分又陆续推出几款很好的

实验室准则:抗体质量的金标

  几乎所有实验室都会用到抗体,抗体不仅是生命科学研究的重要工具,在免疫学诊断领域也是不可或缺的。市面上的抗体种类繁多同时也良莠不齐,由于缺乏评估抗体质量的标准方法,人们过去只能依赖于生产厂家的信用。   做过免疫荧光、免疫沉淀(IP)或者Western blot实验的人都知道,抗体优劣对实验结果有

WB注意这些问题,新手也能做出满意结果!

Western blot(WB)是检测蛋白质及蛋白质翻译后修饰的经典方法,可在简单或复杂的生物样品中提供有关靶蛋白的半定量或定量数据。WB 步骤复杂,通常包括:蛋白样本制备→电泳→转膜→封闭→孵育一抗→孵育二抗→显影→分析。WB 任何过程出现 Bug 均可影响结果的重复性与灵敏度,因此必须注意将 W

原位杂交组织化学概述

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

原位杂交组织化学技术的基本方法

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

Western Blot实验(一)

大家都知道Western Blot时间周期较长,大致可以分为忙碌的第一天,和心痛的第二天,像极了爱情。人生若只如初见,何事秋风悲画扇。经历转瞬即逝的新手曙光后,便进入漫长的黑夜。第一天,从最一步的配胶,到最后一步的孵育膜都极细心像极了爱情的萌芽期,需要精心的呵护。第二天经过繁琐的洗膜,孵二抗,洗膜,

Nature: 抗体正在误导科学界

  1994年到2011年间,《比较神经学》(Comparative Neurology)期刊的主编Clifford Saper经常看到一大堆利用抗体标记神经递质及其受体位置的论文。2000年前后,基因敲除小鼠在生物领域大受欢迎,但结果令人不安。这提醒了Clifford Saper一个事实:抗体正在

Western Blot实验操作进阶技巧(一)

  除非是Western blot实验方面的高手,要不就像在我看来,Western blot发展至今好像与其1979年刚被发明出来的时候一样一样,同样也是根据蛋白不同的大小(或电荷)进行电泳分离,然后转膜,利用抗体筛选出目标蛋白。  多年来这种技术已经成为了蛋白研究方面的一种主要技术,研究人员可以利

蛋白质印迹法速成知识ABC

  蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。  蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔

中国检科院公开招标3704万元实验室仪器设备

  分析测试百科网讯 近日,中国检验检疫科学研究院发布2017年实验室仪器设备采购项目招标的公告,此次发布的公告涉及气相色谱仪、全自动蒸馏仪、超高灵敏度二噁英分析仪等57台仪器,总预算3704万元。  采购项目的名称、数量、简要规格描述或项目基本概况介绍:  项目名称:中国检科院2017年实验室仪器

小小转印海绵垫对Western Blot结果的重要性

您上一次何时更换的转印海绵垫?答案可能是“从不”。因为如果转印有效,为什么要更换?只有当海绵变成灰色和块状时,才会想起来更换。但是具有多年Western Blot经验的Azure技术专家对定期更换转印海绵垫给出了必要性的解释,我们来具体看一看:为什么更换海绵垫很重要?转印问题的常见根源是三明治结构的

Nature年度技术:定向蛋白质组学

  时近岁末,各大杂志接连进行了年终盘点,此前出版的《Nature》杂志也对2012年进行了回顾,评点了2012年的科技进展,科技政策以及重要人物,中国科学家王俊入选了人物篇。同时《Nature Methods》也盘点了今年与明年的技术热点,选出了2012年度技术成果:定向蛋白质组学(targe

张辰宇:“食物miRNAs跨胎盘操控胎儿基因表达”前世今生

  上个月一篇题为《南京大学惊人发现:食物miRNAs跨胎盘操控胎儿基因表达》的报道引来了部分读者的质疑,因为这一研究成果涉及一个十分重要的问题——如果我们从饮食中摄取的miRNAs真的能传递到胎儿体内,并调控胎儿基因表达,那将再一次改写我们对小分子非编码RNA的认识!这不仅更加强调了孕妇饮食的重要

使用胶做western blot的方法

在经典的Western Blot的世界里,蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣,构成WB完整过程,就象砌积木一样,少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友,告诉我,你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时,有没有设想过能省略掉其中的某个费时的非必需步骤,更直接更快得

对于方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

  韩春雨团队和他们的NgAgo-gDNA技术自第一次被报道,就一直倍受关注,近日,方舟子公开发文质疑韩春雨"诺奖级"实验成果的可重复性问题,(推荐阅读:方舟子发文质疑韩春雨“诺奖级”实验成果,你怎么看?)而对于方舟子和部分网友的质疑,韩春雨也于7月2日在百度贴吧上做出了回应。  早前,韩春雨一经报

分子互作仪选择宝典

在现代生物学、医学及转化医学、药物学等研究中,随着功能基因组研究的深入,生物大小分子的生物学功能研究占具着非常重要的地位;生物大小分子的相互作用分析成为目前分子功能学研究中不可缺少的重要手段,因此一个好的分子互作研究工具,无疑将对我们的科研起到极大的促进作用。目前研究分子互作的检测技术层出不穷,从传

RNAi常见问题及问答(FAQs)

有关Stealth™ RNAi的问题什么是Stealth™ RNAi?Stealth™ RNAi是RNAi化学的新一代产品。Stealth™ RNAi分子是经过专利化学修饰的、钝末端、双链25聚体(25mer)。这些化学修饰专门用来消除诱导的细胞应激反应。它也使Stealth™ RNAi比标准的si

如何获得精准的Western Blot实验结果

蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们,实验做

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