WB注意这些问题，新手也能做出满意结果！
Western blot（WB）是检测蛋白质及蛋白质翻译后修饰的经典方法，可在简单或复杂的生物样品中提供有关靶蛋白的半定量或定量数据。WB 步骤复杂，通常包括：蛋白样本制备→电泳→转膜→封闭→孵育一抗→孵育二抗→显影→分析。WB 任何过程出现 Bug 均可影响结果的重复性与灵敏度，因此必须注意将 WB 的每个步骤标准化。今天给大家分享 WB 各个过程中需要注意的细节！样品制备有效的样品制备是影响 WB 可重复性的非常重要的因素。需考虑以下问题：1、靶蛋白是可溶/不可溶蛋白，细胞质/膜蛋白？2、溶解的蛋白或其翻译后修饰的维持是否需要添加额外的缓冲成分 (例如洗涤剂、酶抑制剂)？3、蛋白质定量的方法是什么，缓冲成分会干扰蛋白定量吗？BCA 蛋白定量检测法是总蛋白质定量的常用方法，其蛋白间差异较考马斯染料法的更小，但与还原剂、螯合剂不兼容（兼容去垢剂）。电泳1、最合适的凝胶浓度是什么？不同分子量的蛋白分离胶浓度对应表：2、哪种电泳缓冲......阅读全文
WB操作规程
一、设备和试剂1．设备① 电泳电源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 电泳仪及附件Mini-PRO
WB实验小问答
WB又称免疫印记法.是将生物大分子物质通过不同途径转移到固相载体的过程。其灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。今天给大家分析的是western blot实验中那些常见的问题，这份干货内容，请收好啦！ western blot 常见问题有那些？ 1.为什
WB显影要多久
每个显影试剂盒都不一样，建议看说明书。实际情况视荧光强度而定，你看显出一点儿样子了，就赶紧捞出来，不然片子就太黑了。在加荧光剂后，反应大概一到四分钟。小心把膜放到暗盒里，放好后再也不要移动膜，否则荧光会消失。膜上覆盖一张保鲜膜，小心，铺展。将准备好的胶片放在膜上，放上去后也不要再移动了。然后压片。可
WB实验问题总结
答：原因有很多：a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。答：a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长；b) 也不排
WB显影要多久
每个显影试剂盒都不一样，建议看说明书。实际情况视荧光强度而定，你看显出一点儿样子了，就赶紧捞出来，不然片子就太黑了。在加荧光剂后，反应大概一到四分钟。小心把膜放到暗盒里，放好后再也不要移动膜，否则荧光会消失。膜上覆盖一张保鲜膜，小心，铺展。将准备好的胶片放在膜上，放上去后也不要再移动了。然后压片。可
wb二抗怎么融化
wb 二抗融化，wb 抗体用5%的脱脂奶粉或者1%的BSA （千分之一的TBST的溶液 )配置，可以先让抗体和奶粉或者BSA 蛋白非特异结合，这样就不会与PVDF 膜上的蛋白结合了。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
WB实战之抗体孵育
由于抗原和抗体特异性结合的效率是非特异性结合的数百万--数十亿倍，所以当特异性抗体与非特异性'抗体'（不好描述，指添加在抗体稀释液中的封闭蛋白，我们可以把它们看成非特异性的一抗）竞争时，尽管抗体稀释液中封闭蛋白的浓度是一抗浓度20K：1以上，在碰撞几率相同的条件下，由于时间的积累
WB实验的那些事儿
1.二抗需和一抗宿主的物种相同（如一抗来自兔，二抗为抗兔抗体）。原因： 一抗和二抗不匹配。2.参照说明书，设置阳性对照。原因：一抗不识别检测物种蛋白。3.每泳道蛋白上样量不低于20~30μg，设置阳性对照。原因：抗原量不足。4.使用可逆染色剂如丽春红S检测转膜效果，检测转膜操作是否正确。PVDF膜预
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
WB新时代开启－GE医疗发布Amersham－WB蛋白免疫印迹系统
2014年9月24日，2014慕尼黑上海分析生化展在上海新国际博览中心隆重拉开帷幕。GE医疗生命科学亮相2014慕尼黑上海分析生化展，举办新品发布会全球同步发布Western
wb膜甲醇活化时间
不超过15秒。根据该物质简介可知，该物质的活化时间不超过15秒。pvdf膜在使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。pvdf膜具有较高的机械强度。
免疫印迹（Wb)的原理
(1)是一种蛋白质测定的技术,集合凝胶电泳的高分辨率,固定免疫测定的敏感及特异性和不需要对靶蛋白进行放射性核素标记,在固相膜上保持的时间很长等优点。(2)可以在样本中检测到微量到微量的抗原,以及在多克隆抗体中检测到单克隆抗体,还可以对已经转移到固相膜上面的蛋白质进行连续的分析。
wb膜甲醇活化时间
不超过15秒。根据该物质简介可知，该物质的活化时间不超过15秒。pvdf膜在使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。pvdf膜具有较高的机械强度。
WB一抗用什么稀释
建议起始浓度1:200开始（当然你也可以1:100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1:100-1:1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下，可以溶解
wb二抗室温几小时
二抗一般室温就行,没要求要37度,一个小时差不多就够了。
WB－抗体能用什么稀释
wb抗体用5%的脱脂奶粉（1‰TBST溶液）或者1%的BSA（1‰TBST溶液）配置，可以先让抗体与奶粉或BSA蛋白非特异结合，就不会与PVDF膜上的蛋白结合了。
WB一抗用什么稀释
建议起始浓度1:200开始（当然你也可以1:100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1:100-1:1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下，可以溶解
wb二抗室温几小时
二抗一般室温就行,没要求要37度,一个小时差不多就够了。蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或
WB条带是白色怎么补救
WB条带是白色无法补救。WB做出来是白色的条带，一抗、二抗均已稀释也不管用。二抗浓度或者目的条带丰富过高，很快消耗了底物，所以形成了白色条带。WB在做的时候需要稀释二抗浓度就可以了。
wb显影液显影原理
相纸、胶卷表面保护基下,是溴化银涂层(还有其他的从略),溴化银见光分解,显影液与其发生化学反应,分解析出。 拍照好的底片,图像在上面明暗不同,分解程度也就不一样了。冲洗出来就是底片。
WB上样量应为多少
>这要根据你做的蛋白表达量多少，一般是用DAB显色要50-100μg，用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用组织作过western，蛋白浓度的确很高。通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，
wb条带怎么分析粗细深浅
根据蛋白质表达量分析。wb就是艾滋病抗体确证试验，主要是监测env的条带，只要出现两个env条带，就可以判定是阳性，所以主要是检测env条带。wb条带粗细深浅表示蛋白质表达量，所以粗细深浅根据蛋白质表达量分析。蛋白质表达量是包含蛋白质的聚集体形态、单体形态和含有fc的片段的加和值。
WB条带是白色怎么补救
WB条带是白色无法补救。WB做出来是白色的条带，一抗、二抗均已稀释也不管用。二抗浓度或者目的条带丰富过高，很快消耗了底物，所以形成了白色条带。WB在做的时候需要稀释二抗浓度就可以了。
wb条带周边发黑中间白
wb条带周边发黑中间白的原因是过高的蛋白上样量或一抗和二抗浓度过高都会促使底物过快的消耗，导致我们在做化学发光检测时，发光底物已经消耗殆尽而形成空斑。要解决条带中出现整条白色空斑，需要减少蛋白上样量、稀释一抗和二抗的浓度。如果条带中出现白圈的话，是转膜时候，膜与胶之间有气泡，需要在制作“三明治”时，
wb条带放三天显影
显影。wb条带放三天看到明显的荧光条带，先压三十秒。显影时，把胶片完全浸入显影液，用透明的或者白色的盒子，看到显影，看到胶片上有黑色条带。wb就是艾滋病抗体确证试验，监测env的条带，出现两个env条带，判定是阳性检测env条带。
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。