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结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

结核病是严重危及全球的公共卫生问题之一,自1985年以来结核病疫情在全球范围内急剧上升,据世界卫生组织报道,目前全球有近1/3的人感染了结核杆菌,即20亿人口感染了结核杆菌,其中活动性肺结核病人约2 000万,每年新增结核病人约800~1 000万,每年约有300万人死于结核病[1~3]。结核病已成为导致全世界成人因传染病而死亡的主要疾病之一。我国是全球22个结核病高发国家之一,活动性肺结核病人数居世界第二位。据2000年全国结核病流行病学抽样调查估计,全国现有活动性肺结核病人450万,其中传染性肺结核病人150万[4]。结核病防治是我国乃至全球疾病防治的重要课题。目前,出入境人员体检诊断传染性肺结核的主要方法是通过胸部X片检查,加上痰涂片抗酸染色镜检和PPD试验联合检测。由于胸部X片是根据临床症状进行诊断,缺乏病原学依据,加上肺结核与其他肺部疾病在胸片上有相似的地方,容易出现误诊和漏诊;痰涂片抗酸染色的阳性率低,采样不合格标本......阅读全文

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【摘要】目的 建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光 PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法 根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针,并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本,应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。 结果 荧

实时荧光定量PCR技术在分子生物学和医学研究等领域的...

  定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied biosystems公司推出,它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【摘要】  目的 建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光 PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法 根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针,并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本,应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆

微生物学检验基本技术(2)

第六节 自动化技术在微生物检验中的应用  微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。数码分类技术集数学、计算机、信息及自动化分析为一体,采用商品化和标准化的配套鉴定和抗菌药物敏感试验卡或条板,可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统已在世界

微生物学检验基本技术(2)

第六节 自动化技术在微生物检验中的应用   微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。数码分类技术集数学、计算机、信息及自动化分析为一体,采用商品化和标准化的配套鉴定和抗菌药物敏感试验卡或条板,可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统已

结核分枝杆菌鉴定方法

1.1 萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查 目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为 普遍的方法,其操作简单快捷,特异性高,设备要求低,但是灵敏度较低,不能及时发现病人。1.2 发光二极管荧光显微镜(LED荧光显微镜)发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源,延长了显

生物芯片北京国家工程研究中心:十年磨砺 用“芯”创造

  2010年5月6日,中共中央总书记、国家主席胡锦涛陪同朝鲜劳动党总书记、国防委员会委员长金正日参观博奥生物有限公司。新华社供图  2008年12月27日,中共中央政治局常委、国务院总理温家宝来到北京中关村科技园区,看望广大科技工作者,就园区的创新发展问题进行专题调研。这

MALDI-TOF MS技术在临床微生物实验室中的应用前景

质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景引言自20世纪80年代起, 质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用, 其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注, 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption

临床微生物实验室:质谱应用的广阔前景

  质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景  【引言】自20世纪80年代起, 质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用, 其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注, 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser deso

感染性疾病基因诊断进展

感染性疾病有病原微生物引起,致病的病原微生物主要有病毒、细菌、衣原体、支原体和螺旋体等。这些病原体的传统检测方法通常采用形态学检查,体外培养和免疫学试验。但对某些难以培养的病原体,抗原抗体检测不能判断体内病原体 DNA 或 RNAde 复制情况,或存在检测灵敏度低等问题。自聚合酶链反应( PCR )

记上海国际旅行卫生保健中心国家结核病检测重点实验室

   与“白色瘟疫”的这场持久战,就像与林火作战,绝不能漏掉一点火星,有一个病例没被发现,就会导致瘟疫蔓延,这是上海国际旅行卫生保健中心“检疫尖兵们”共同坚守的工作信念,也是该中心结核病重点实验室的鲜明底色。   肺结核被称为“白色瘟疫”。近年来,随着流动人口大量增加,国境口岸出入境人员结核病尤其是

基因检测:NGS在病原微生物检测中的应用

文章导读  感染性疾病是当今世界严重威胁人类健康的重大疾病。目前,全球感染性疾病的发病率有所上升,病原体呈现多样化和复杂化的发展趋势。近年来快速发展的NGS技术因其不依赖于已知核酸序列,无需特殊探针设计,可直接对未知病原微生物进行检测,打破了传统微生物检验的局限性,在临床微生物领域展现了广阔的前景。

焦磷酸测序(Pyrosequencing)原理

  焦磷酸测序  技术(pyrosequencing)是一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成本、适

PCR技术应用十二:结核杆菌诊断

  结核杆菌可以导致全身性疾病,特别是在发展中国家,其发病率较高,危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大,对抗痨药物的耐药性增加,从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断,但对某些病人亦可造成误诊或漏诊;动物接种虽特异性较高,但因时间较长

乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

嗜酸乳杆菌是重要的益生菌,被大量应用在食品中。研究表明嗜酸乳杆菌能在乳制品中产生乳酸,并能通过氨基酸代谢增加风味。嗜酸乳杆菌主要作用有降低pH值、产生抗菌素(如嗜酸菌素和乳酸杀菌素等),在一定程度上抑制肠道中有害微生物的有害作用。有研究发现嗜酸乳杆菌对大肠杆菌、腹泻致病菌等均有抑制作用;大量的嗜酸乳

微生物学检验基本技术(1)

随着现代医学及相关科学技术的发展,各学科相互交叉和渗透,医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平,许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术,准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物,并对引起感染的微生物进行耐药性监测,为临床对感

微生物学检验基本技术(1)

第一节 微生物形态学检查   细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一,它是细菌分类和鉴定的基础,可根据其形态、结构和染色反应性等,为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查   由于细菌个体微小,肉眼不能看到,必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察,其内部的超微结构则需用电

呼吸道感染快速床旁诊断的进展和前景

2014   年   11月,Lancet Infect Dis上发表了“新出现的呼吸道感染”系列文章,共5   篇,其中第4篇主要描述了现有的呼吸道感染病毒和细菌病原体的诊断试验,以及有望提高床旁快速诊断质量、速度和可操作性的技术发展。现

2014年中国十大生物芯片企业排名

生物芯片,又称蛋白芯片或基因芯片,它们起源于DNA杂交探针技术与半导体工业技术相结合的结晶。生物芯片技术是近几年才发展起来的高通量检测技术,它利用微电子、微机械、物理化学技术、计算机技术在固体芯片表面构建的微流体分析单元和系统,将生命科学研究中不连续的分析过程(如样品制备、化学反应和分析检测)连续化

生物芯片开辟个性化诊治前景

    盲区一:不知道乙肝病毒的局部点突变。临床上同样是乙肝,却可以有不同的病毒点突变,找到不同的突变从而选择不同的治疗是生物芯片——乙肝病毒基因突变检测体系的优势所在。乙肝病毒DNA有四个开放读码框,分别称为S区、C区、X区和P区,不同区域的突变直接影响着治疗方式的选

现代检测技术在食品安全检测中的应用

  摘要:指出了随着人们生活水平的提高,食品安全越来越受到大家的重视。论述了目前食品安全检测中常用的几种现代检测技术,主要有实时荧光定量PCR技术、核酸探针技术、酶联免疫吸附技术(ELISA)和高效液相色谱-质谱连用技术(HPLC-MS)和近红外光谱技术在食品安全检测的应用及研究进展。  

荧光定量PCR:简介,原理,应用

荧光定量PCR简介 荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间,而其应用一直都没广泛展开,究其原因,无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期,尤其是08年以来,仪器和试剂是遍地开花,这也使科研人员均跃跃欲试,都想借此技术使自己的研究能突飞猛进,发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据

荧光定量PCR:简介、原理、应用

荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 转基因动植物基因拷贝数的检测,RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理

细菌学诊断新技术

 随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法

液相芯片技术的原理与应用

液相芯片,也称为微球体悬浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible MultiAnalyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台,它是在不同荧光编码的微球上进行抗原抗体、酶底物、配体

液相芯片技术的原理与应用进展

   液相芯片,也称为微球体悬浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible Multi Analyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台,它是在不同荧光编码的微球上进行抗原 抗体、酶 底物、配体 受体的结合

2012国家自然科学基金评审结果名单之复旦大学(生物类)

  来自国家自然科学基金委员会的消息,国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录

什么是PCR阴性?

举乙肝的例子来说:通过酶免的方法查乙肝两对半和通过荧光定量PCR的方法学查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身体不舒服或者正常体检(比如入职体检),他去看医生,临床医生怀疑他得了肝炎(肝炎有很多种比如病毒性肝炎,也就是病毒倾入他体内后由于人体的三道防线没能把病毒消灭掉,导致病毒在

荧光定量PCR技术及其应用(二)

3 应用由于FQ-PCR具有高灵敏性,高特异性和高精确性的特点,目前,该项技术已被应用于病原体测定、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变及其多态性的研究等多个领域。3.1 病原体测定由于PCR技术的问世,使得病原体检测能够快速而方便的进行。但由于其高灵敏性,实验操作很容易受到污染而出现假阳性。只要

时荧光定量PCR试剂盒应用领域

优博生物技术有限公司技术人员在大量的实验基础上,对SYBR实时荧光定量PCR技术进行了大量实验和对比分析,公司所开发的SYBR实时荧光定量PCR试剂盒误差小、稳定性强,可以广泛应用于核酸定量分析、基因表达差异分析 、SNP检测 、甲基化检测、医学研究等众多领域,解决科研和生产领域中技术难题。 1