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感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。实验材料限制性内切核酸酶大肠杆菌培养物试剂、试剂盒碱裂解液乙醇酚氯仿TE仪器、耗材琼脂糖凝胶实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液碱裂解液Ⅰ碱裂解液Ⅱ碱性裂解液Ⅲ乙醇酚：氯仿（1:1，V/V）含 20 μg/ml Rnase......阅读全文
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵 寡核苷酸杂交溶液 寡核苷酸预杂交
本方案主要描述了筛选噬菌体 M13 重组克隆，而一种选择方案是筛选含噬菌粒的细菌克隆。最后也介绍了用 PCR 检测突变体的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理试剂、试剂盒甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核苷酸激酶限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 顶层琼脂和 2xYT 琼脂平皿仪器、耗材 钝端镊子皮下注射用针头（18 号）和印度墨水孵箱硝酸纤维素膜或尼龙膜真空烤箱68°C 水浴What
实验方法原理 在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。
试剂、试剂盒 乙酸铵 ATP 乙醇 甘油 蒸馏水 IPTG Mg
下面的方案描述了鸟枪法测序的起始步骤，从靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌体载体构建 DNA 片段文库，也包括断裂靶 DNA 的两种方法--超声法和喷雾法，以及用 DNA 聚合酶修复片段末端的技术要点。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。试剂、
本章描述了改进融合蛋白在 M13 噬菌体颗粒表面展示水平的一个方法。向 M13 衣壳锚定蛋白引入突变后，蛋白质展示水平约能增加两个数量级。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 乙醇 氯化钠 苯酚 醋酸钠 TE 琼
这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA，因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体，以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA，如当一个特定的重组体被多次用于制备反射性标记探针或构建大量定点突变体时。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理这个方案主
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液乙醇氯化钠苯酚醋酸钠TE琼脂糖凝胶原始的重组 M13 噬菌体单链 DNAYT 培养基仪器、耗材 Corex 离心机管巴斯德滴管柱层析树脂大肠杆菌菌株 CJ236大肠杆菌菌株 TG1JM109 或相当的菌株实验步骤 材料缓冲液和溶液各种贮存液，缓冲液和试剂成分请参阅附录 1。
M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用实验实验材料 羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒 生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-T 缓冲液PBS-T-BSA 缓冲液仪器、耗材 2YT 培养基SOC 培养基实验步骤 下述方法描述了 P8 库的设计（见 12.3.1)、构建（见
经典的 Kunfcel 寡核苷酸指导的诱变方法利用大肠杆菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特异地筛除去含尿嘧啶碱基的 DNA 的选择性作用（请参考寡核苷酸诱变信息栏）。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓
实验方法原理 在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。实验材料 重组 M13 噬菌体单链 DNAM13 噬菌体重组噬菌斑M13 噬菌体非重组载体噬菌斑大肠杆菌 F' 菌株试剂
1、在噬菌体展示技术的应用中，M13噬菌体与其他噬菌体比有什么优点？ M13噬菌体和与其密切相关的丝状噬菌体fd和f1均为非裂解性噬菌体，它们在增殖期间均不裂解宿主菌。这就极大地简化了每轮淘选过程之间的中间噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法就足以将噬菌体与其他所有污染的细胞蛋白分开
实验方法原理 这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA，因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体，以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA，如当一个特
实验方法原理 这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA，因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体，以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA，如当一个特定的重组体被多次用于制备反射性标记探针或构建大量定点突变体时。实验材料 大肠杆菌 F' 菌株M13 噬菌体原液
DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获
实验方法原理 M13 噬菌体单链 DNA 是从感染细胞分泌至周围培养液中的病毒颗粒中制备的，首先在高盐存在下，丝状病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀浓缩，然后用酚抽提释放单链 DNA，最
实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌 试剂、试剂盒
实验方法原理 M13 噬菌体单链 DNA 是从感染细胞分泌至周围培养液中的病毒颗粒中制备的，首先在高盐存在下，丝状病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀浓缩，然后用酚抽提释放单链 DNA，最后乙醇沉淀收集单链 DNA。实验材料 M13 单链噬菌体载体感染 M13 噬菌体的大肠杆菌培养物未感染的大肠杆菌的培养
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌试剂、试剂盒 ATPPE1缓冲液PE2 缓冲液噬菌体 T4 DNA 连接酶噬菌体 T4 多核苷酸激酶大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌体通用测序引物含 4 种 dNTP 的 dNTP 溶液诱变的 M
在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌
分子克隆常用载体 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
⑷基因组成 lDNA至少包括61个基因，大多基因按功能相似性成簇排列，其中一部分为噬菌体生命活动的必须基因，另一部分约1／3为非必须区段。 3. l噬菌体载体的类型 插入型 （Insertion vectors ）
虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制，但实际上是有限的：长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌体的 DNA 片段不要大于 1000 碱基。而且，当用“正向”或“反向”通用测序引物进行 DNA 测序时，大片段的中心区域可
本文介绍了由 Zoller 和 Smith 的双引物技术（1984,1987) 结合 Kunkel 的诱变体产量富集方法（1985) 构成的经典方案。本方案中使用的单链 DNA 模板含有较高的尿嘧啶残基，因为它们是从生长于 dut 和 ung 基因突变大肠菌中的 M13 噬菌体中制备的（见方案 1)