细胞碱性磷酸酶染色

实验概要细胞碱性磷酸酶染色实验原理胚胎干细胞中碱性磷酸酶的活性比较高, 5-溴-4-氯-3吲哚-磷酸盐(BCIP)能被碱性磷酸酶水解,形成一个中间体,这个中间体能与氯化硝基四氮唑蓝,也称氮蓝四唑(NBT)反应生成白色的中间二聚体和NBT-蓝紫色结晶物。通过染色结果可以相对得知碱性磷酸酶的活性,进而从侧面来证明实验细胞是否具有多能性,90%的克隆显色视为阳性。主要试剂DPBS、4% PFA、碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP)染色试剂盒主要设备倒置显微镜实验步骤(1)将贴壁培养的细胞用DPBS 洗3遍。(2)加入4% PFA,固定细胞30 min。!注意:多聚甲醛有毒,易挥发,对眼睛有刺激作用,在通风橱内操作,做好防护。(3)吸弃4% PFA,然后用DPBS冲洗贴壁细胞3次。(4)按照如下比例加入各溶液,混匀后配成BCIP/NBT染色工作液,确保能充分覆盖样品:碱性磷酸酯酶显色缓冲液3 mL10 mL......阅读全文

碱性磷酸酶(AKP、ALP)的正常参考值

  ① 速率法  女性:  1~12岁:<500 U/L  15岁以上:40~150 U/L  男性:  1~12岁:<500 U/L  12~15岁:<750 U/L  25岁以上:40~150 U/L  ② 比色法:  健康成年人:3-13 金氏单位  儿童:5-28 金氏单位

AKP20系列瑞士bieri柱塞泵机械原理及检修

瑞士BIERI AKP微型轴向柱塞泵是非常紧凑的轴向单元,即使在不利条件下也具有高容积效率,宽速度范围和更高的可靠性,接下来由威斯特(上海)传感器仪表有限公司为您详细介绍AKP20系列瑞士bieri柱塞泵机械原理及检修。AKP20系列瑞士bieri柱塞泵机械原理如下: 柱塞泵柱塞往复运动总行程L是不

细胞生长检测7:碱性磷酸酶检测法(AKP法)

碱性磷酸酶检测法(AKP法)1.按MTT法用细胞因子处理靶细胞适当时间,用PBS洗去死亡细胞,洗两次。2.向96孔细胞培养板各孔中加0.2ml新鲜配制的底物液(0.2mol/L 硼酸,1mmol/L MgCl2,1.2mmol/L甲伞基磷酸)。在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养3小

细胞生长检测方法:碱性磷酸酶检测法(AKP法)

1、按MTT法用细胞因子处理靶细胞适当时间,用PBS洗去死亡细胞,洗两次。2、向96孔细胞培养板各孔中加0.2ml新鲜配制的底物液(0.2mol/L 硼酸,1mmol/L MgCl2 ,1.2mmol/L甲伞基磷酸)。在37℃ 5% CO2 的饱和水汽CO2 培养箱中培养3小时。3、在荧光计数仪上测

细菌生长检测之碱性磷酸酶检测法(AKP法)

碱性磷酸酶检测法(AKP法):1、按MTT法用细胞因子处理靶细胞适当时间,用PBS洗去死亡细胞,洗两次。2、向96孔细胞培养板各孔中加0.2ml新鲜配制的底物液(0.2mol/L 硼酸,1mmol/L MgCl2,1.2mmol/L甲伞基磷酸)。在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养3

碱性磷酸酶(AKP、ALP)的测定及医学意义是什么

  1.正常参考值:  ① 速率法  女性:  1~12岁:<500 U/L  15岁以上:40~150 U/L  男性:  1~12岁:<500 U/L  12~15岁:<750 U/L  25岁以上:40~150 U/L  ② 比色法:  健康成年人:3-13 金氏单位  儿童:5-28 金氏单

免疫碱性磷酸酶组织化学实验——间接免疫碱性磷酸酶法

免疫碱性磷酸酶组织化学技术是以碱性磷酸酶(AKP 或 AP)取代 HRP 来显示结果的免疫酶组织化学技术。最早出现的是间接免疫碱性磷酸酶法(IAP),1983 年 Mason 及 Moir 等建立了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)复合物法。随后,人们建立了更为敏感的生物素-亲和素-碱性磷酸酶复合

毛细胞白血病实验诊断的实验室检查介绍

  1.血象  (1)大多数患者有全血细胞减少,也可仅表现为两系或一系细胞减少,单核细胞减少是其特征之一,可出现中性粒细胞缺乏或白细胞计数明显增高。外周血中可见毛细胞。  (2)患者还可见血清碱性磷酸酶(AKP)水平升高,多数患者的白细胞AKP积分升高。  2.骨髓象  多数患者有骨髓浸润,根据毛细

免疫碱性磷酸酶组织化学实验——APAAP-法

实验方法原理APAAP 法的原理与 PAP 法类似,都属于未标记抗体桥联法,所不同的是用 AKP 取代了 HRP。该方法较 IAP 法敏感性髙,特别是用于标记固定过的组织。APAAP 法的主要优点是非特异性背景染色较浅,因为其不受内源性过氧化物酶的干扰,APAAP 复合物所用的 AKP 是从小牛肠组

免疫碱性磷酸酶组织化学实验

实验方法原理 此方法的基本原理与 HRP-抗体间接法类似,所不同的是用 AKP 代替 HRP 标记第二抗体,将其制备成酶标记抗体。实验材料 石蜡切片动物血清试剂、试剂盒 蛋白酶特异性一抗核固红二甲苯乙醇树胶PBSAKP 标记的二抗TBS(含左旋咪唑、MgCl2)仪器、耗材 滴管玻片湿盒实验步骤 1.

糖类染色实验——糖原染色

实验方法原理糖原由多糖衍化而来,是单纯的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反应(PAS)染色法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒高碘酸蒸馏水碱性复红盐酸焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)双重蒸馏水

人类染色体姊妹染色单体差别染色

     姊妹染色单体区分染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是70年代中期发展起来的染色体处理技术。Latt(1973)在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),当用Hoechst33258 荧光染料染色时,发现了姊妹染色单体的色差反映和它们

关于碱性磷酸酶的简介

  碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同工酶 。目前已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与

碱性磷酸酶的简介

  碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与A

关于碱性磷酸酶的基本信息介绍

  碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同工酶 [1] 。已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP

姐妹染色单体分化染色实验

实验方法原理 细胞被培养在含有 5-溴脱氧尿苷(5-Bromodeoxyuridine:BUdR)的培养基中,当细胞在DNA 合成时,BUdR 能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶核苷(Thymidine:TdR)被掺入到新合成的DNA中。在第一个细胞周期时,由于半保留复制的机制,中期染色体的每条染色单体

姐妹染色单体分化染色实验

实验方法原理细胞被培养在含有 5-溴脱氧尿苷(5-Bromodeoxyuridine:BUdR)的培养基中,当细胞在DNA 合成时,BUdR 能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶核苷(Thymidine:TdR)被掺入到新合成的DNA中。在第一个细胞周期时,由于半保留复制的机制,中期染色体的每条染色单体D

姐妹染色单体分化染色实验

实验概要本文介绍了姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)的实验原理、操作步骤及注意事项等。实验原理姐妹染色单体分化染色法(Sister  chromatid  differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处

姐妹染色单体分化染色方法

姐妹染色单体差别染色可使中期染色体显示深浅不同的两条单体,能借以观察姐妹染色单体互换(SCE)现象。SCE是两条染色单体在DNA合成中核苷酸序列发生互换而表现出来一种现象。即是细胞分裂是DNA同源重组的结果。SCE既是一种无害的变化(有生理波动),也可受射线、致突和致癌物三因素等作用而升高。SCE一

革兰氏染色液染色法

  1.葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。    2.结晶紫染色液。    3.革兰氏碘液。    4.95%酒精。    5.番红染液。    6.载玻片。方   法     一、涂片标本的制备(见实验一)    二、革兰氏染色法     1.初染:在上述已固定的涂片上,滴加结晶紫染液,染色1分钟,水洗

间接染色步骤(细胞表面染色)

实验概要间接标记需要两个孵育步骤,先与一抗再与合适的第二抗体孵育,二抗(不是一抗)结合了荧光染料(FITC、PE、Cy5 等)。请注意这是一个普遍的程序,您可以根据自己的使用情况进行调整。实验步骤1. 收集并洗涤细胞,然后确定细胞总数。细胞通常在聚苯乙烯的圆底 12 x 75 mm2 Falcon

糖类染色实验——黏液物质染色

实验方法原理在人体和动物体中能够分泌黏液物质,依其物质中含有的酸基不同,所以分为中性黏液、酸性黏液和混合性黏液,也可被称为中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖,常用 Mowry 阿尔辛蓝高碘酸 Shiff 反应(ABPAS)染色方法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒阿尔辛蓝 8 GS冰醋酸蒸馏水麝香

染色质染色体和染色单体的区别

  (1)、染色质和染色体的主要成分都是DNA和蛋白质,它们之间的不同,不过是同一物质在细胞分裂间期和分裂期的不同形态表现而已。  染色质出现于间期,呈丝状。它们在核内的螺旋程度不一,螺旋紧密的部分,染色较深,有的螺旋松疏染色较浅,染色质在光镜下呈现颗粒状,不均匀地分布于细胞核中。细胞分裂时染色质细

乳品中碱性磷酸酶检测标准NY/T-37992020

碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同工酶。已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与AKP6六

鞭毛染色配制及染色方法实验

实验步骤 改良Ryui法一、实验试剂:A液:5%石炭酸:     10ml鞣酸:            2g饱和硫酸铝钾液:10mlB液:结晶紫酒精饱和液应用液:A液10份,B液1份,混合,室温存放。二、染色方法:1. 玻片的处理:要求用新的载玻片,用前须在95%酒精中浸泡24小时以上,用时从酒精中

细菌的简单染色和革兰氏染色

(一)实验目的:学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法。 (二)实验原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或

细菌的简单染色和革兰氏染色

(一)实验目的:学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法。(二)实验原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔

姐妹染色单体分化染色法

1. 实验原理 姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处理技术。1973年Latt在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromode Oxyurdine,BrdU),用Hoechst 3

细菌的简单染色和革兰氏染色

(一)实验目的:学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法。(二)实验原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔

抗酸染色配置以及染色方法实验

实验方法原理抗酸染色直接用于痰标本时,可以适当曾加标本涂片的厚度,以提高检出率。染厚涂片时,须掌握复染色时间,如果背景过深,影响镜检。实验步骤碱性复红染色法:(萋纳Ziehl-Neelsen法)一、实验试剂:1. 萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液:10ml5%石炭酸溶液:       90m