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检测细胞凋亡的实验方法比较2

二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面(细胞膜)的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围,又可分为细胞群休和单个细胞测定两种,以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标,凋亡细胞在进入最终溶解阶段前,胞膜通透性无明显改变,相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料(如PI)不能时入凋亡细胞内,而相对分子质量小的荧光染料(如Hoechest 3342或33258等)仍能被细胞摄取。应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞,细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。检测方法:获取11×106细胞/ml的细胞悬液,先用PI染色,再行Hoechest3342染色,进行流式细胞仪分析或荧光显微镜观察。PI及Hoechest3342均使用340nm紫外线激......阅读全文

六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡

作者:杨连君,司晓辉,王文亮,王文勇,赵一岭,方正清[摘  要] 目的:探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法,并对其进行比较。方法:首先用6%的乙醇作用6 h诱导人肝细胞癌细胞系HCC9204细胞凋亡,然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色,

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展(一)

摘  要:当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡。开展对细胞凋亡的研究,首先要解决是方法学问题。作者从凋亡细胞的特征性核DNA片段检测着手,阐述了多种凋亡细胞核DNA片段检测方法以及近年来的一些新进展。细胞凋亡(apoptosis)又称细胞凋谢或称程序性细胞死亡(Programmed

细胞凋亡实验

细胞凋亡(Apoptosis) 又称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death,PCD)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。即是在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自主结束生命的死亡方式。凋亡一词最早是由年澳大利亚组织病理学家John Kerr通过研究大鼠肝左叶细胞死亡时,

定量分析晚期细胞凋亡中DNA片段的直接方法

多细胞生物是由高度组织化的细胞群落组成的,为了这个细胞群落的茁壮成长,重要的是1.通过复杂的细胞过程,如细胞增殖和凋亡,2.建立稳态。这两个过程中任何一个过程的不适当转变都会导致疾病。例如,神经元凋亡活性的增加是各种神经退行性疾病如阿尔茨海默氏症和帕金森氏症的根源。相反,凋亡机制的丧失会导致细胞过度

细胞活力检测方法

细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测方法有很多种,如台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、、ATP含量测定法、荧光染色法、比色法(MTT法)等。一、ATP含量测定法---生物发光检测有研究表明内源性三磷酸腺苷 (AT

如何利用酶标仪进行细胞增殖与活力测定

  酶标仪在细胞生物学与药物筛选方面有着非常高的使用频率,而在各种细胞检测实验中,细胞增殖能力的检测是最为常见也是最基础的检测之一。   ●为什么要检测细胞状态呢?    细胞状态是直接反应细胞生理状态的重要指标,通过监测细胞在各种化合物刺激作用下的反应状态,从而确定测试分子是否对细胞增殖有影

高内涵成像技术在网络集成式细胞内特征的......(二)

               图3 单细胞耗氧率动态代谢检测及分析 一步染色法检测细胞对药物的敏感性 应用ImageXpress®

微核实验在染色体水平检测DN A损伤实验

实验步骤 一、材料 1. 胞质分裂阻滞微核试验 2. 微核的着丝点检测 (1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。 (2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 过氧化物酶

动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤

实验概要通过本实验掌握传代细胞培养的基本方法,了解无菌操作的基本原则。掌握磷酸钙介导的贴壁细胞的通用转染方法。了解细胞凋亡的形态特征,掌握细胞凋亡DNA梯度(“DNA Ladder”)电泳检测法。实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点,一是研究对象是活的细胞,可长时期

动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法

细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点,一是研究对象是活的细胞,可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等;二是可以人为地严格控制研究条件,便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响,有利于单因子分析;三是研究的样本可以达到比较均一性。

活体生物发光成像技术的最新进展

活体动物体内光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进

细胞凋亡研究

前言:细胞凋亡是细胞程序性死亡中最具特征性的一种。它在生物发展,体内平衡,甚至在不同的疾病,例如:癌症,的发病机制都扮演着重要的角色。在过去的几十年里,科学家们对细胞凋亡进行了广泛的研究。细胞凋亡的过程中,细胞会有不同的形态变化。同时,细胞膜(plasma membrane),线粒体(mitocho

微核实验在染色体水平检测DNA损伤实验(一)

实验步骤一、材料1. 胞质分裂阻滞微核试验2. 微核的着丝点检测(1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。(2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。(3) 过氧化物酶标记的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基联苯溶液(D A B ): I m g /m L 溶于

流式细胞术的工作原理与发展综述

摘要:流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。是一项多学科交叉研究的结晶。流式细胞术及流式细胞仪的出现融合了医学,计算机学,物理学等众多学科背景。。它不仅测量速度快、准确度好、灵敏度高,而且还

生物发光技术在生命科学中的应用

  随着发光(luminescence)技术在多种生物实验中的广泛应用,生物发光(bioluminescence)技术越来越成为首选的生物检测手段。在这篇文章中,我们将详细讨论生物发光技术在生物检测中的应用,以及它与其它发光检测手段相比所显示出的优点。   1 生物发光的特点   根据产生光子的

生物发光技术在生命科学中的应用

  随着发光(luminescence)技术在多种生物实验中的广泛应用,生物发光(bioluminescence)技术越来越成为首选的生物检测手段。在这篇文章中,我们将详细讨论生物发光技术在生物检测中的应用,以及它与其它发光检测手段相比所显示出的优点。   1 生物发光的特点   根据产生光子的

动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤(一)

实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点,一是研究对象是活的细胞,可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等;二是可以人为地严格控制研究条件,便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响,有利于单因子分析;三是研究的样本可以达到比较

干细胞实验技术入门

《Science》刚刚公布的十大科学突破中,占据首位就是细胞重新编程技术(iPS,induced pluripotent stem cells),这一才初初“面世”一年的干细胞 技术引发了生命科学研究领域的极大震动,引用《科学》杂志负责新闻的副主编Robert Coontz的话就是“这项研

R&D Systems试剂 Q&A 常见问题解答 (1)

问:R&amD Systems有分装试剂吗?答:没有分装试剂。R&amD Systems公司不会分装,也没有授权任何公司进行分装。目前市场上所谓的“RD分装试剂”是没有品质保证的3无产品,R&amD Systems公司不承担任何“RD分装试剂”的售后服务。在此,建议广

Transwell侵袭实验

第一节 概念这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1. Transwell关于Transwell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可以这么理解吧,trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透

乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒使用说明

乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒产品编号产品名称包装C0017乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒500次产品简介:一基的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Relea

R&D Systems试剂 Q&A 常见问题解答(二)

 细胞凋亡 问:为什么有两套不同的TUNEL试剂盒?答:因为有两种不同的TUNEL方法可检测细胞凋亡。第一种方法采用TdT酶(末端脱氧核苷酸转移酶)将生物素化的核苷酸加到组织中的DNA片段的3'-羟基端。加入正离子可使这种标记更有效,经生物素化的核苷酸可用streptav

流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin V 法)

实验概要Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,本实验介绍了一个用流式细胞仪检测细胞凋亡的方法(Annexin V 法)。实验原理Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。在细胞发生凋亡

微核实验在染色体水平检测DN A损伤实验(二)

2 用阿糖胞苷微核实验检测人淋巴细胞 (V G 1 期 DNA 剪切修复损伤的方法在对暴露于各种遗传毒物的人 G 。期淋巴细胞的 M N 进行检测后发现,对于主要引起碱基损伤和 DNA 加合物而不是 DNA 链断裂或者纺锤体损伤的化学物质和紫外辐射而言, MN 的形成与细胞毒性相比明显程度较

流式细胞术在血液学中的应用

  DNA倍体分析及细胞周期分析    在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化,正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go), G1期细胞虽有DNA合成,但DNA含量仍为2N,为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞

流式细胞术常见问题问答

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免

ImageXpress Micro高内涵3D细胞球成像检测手册(一)

一、概述1 当前细胞培养和观察的常用方法十九世纪起,当显微镜出现后,人们就开始尝试对细胞结构进行观察,并在二十世纪发展出细胞的培养技术。单层细胞的培养相对方便,而且商业化的显微镜非常适合于平面的、薄样品的观察,所以,在二十世纪的中后期,人们普遍采用 2D 的细胞培养方法,进行生物学的研究,以及进

脑力智宝对实验性脑缺血大鼠学习记忆与神经细胞凋亡...

脑力智宝对实验性脑缺血大鼠学习记忆与神经细胞凋亡的影响【摘要】  目的研究脑力智宝对实验性脑缺血大鼠学习记忆功能与神经细胞凋亡的影响。方法结扎实验大鼠双侧颈总动脉制作脑缺血模型,Morris水迷宫法测试其学习记忆功能,HE染色法观察其神经细胞形态学改变,TUNEL法检测凋亡细胞。

细胞状态差的三大原因实例分析

我们在做技术支持时常常接到用户来电:“老师,我的细胞状态很差,不知道怎么了,您能帮我分析下原因吗?” 细胞状态很差,常常出现的现象是:细胞边缘不清晰、细胞不饱满、折光性差、背景比较脏、黑点很多、细胞碎片多(细胞凋亡后的细胞碎片)、单个细胞内有空泡(凋亡)且空泡比较多;如果细胞出现老化,也就

彗星实验在环境毒理学中的应用实验

彗星实验,又称单细胞凝胶电泳实验,是用来检测几乎所有有核细胞中 D N A 损伤的方法。彗星实验与其他遗传毒性检测实验相比有明显优势,但是由于它对实验中的细微变化非常敏感,可导致结果变化较大。本章的目的在于提供环境毒性实验中与碱性彗星实验相关的背景信息和详细的标准化操作流程。我们将阐述彗星实验相关缺