免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1. 制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2. 电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3. 将转移盒放入一个较大的托盘中,加入足量的能盖没整个转移盒的转移缓冲液。 4. 在塑料转移盒的底边,依次将下面物品组装转印夹层垫或海绵,一张剪切得如凝胶大小的滤纸,并预先以转移缓冲液湿润凝胶,用一试管或玻璃棒在凝胶表面缓慢滚动,以排去凝胶和滤纸间的气泡。 图一、利用转印槽进行免疫印迹 5. 准备转印膜,按凝胶大小但各边都比凝胶大约1 mm 剪膜。成45。地慢慢将凝胶放入蒸馏水中,水将会渗进膜中并润湿整个表面。然后在转移缓冲液中平衡10~15 min......阅读全文

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

免疫印迹与免疫检测实验——半干转移系统转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材半干燥转移装置滤纸实验步骤1.  制备样品,并在小型或标准尺寸的单向或双向凝胶上分离蛋白质。 2.  准备转印膜3.  拆卸凝胶夹层,除去积层胶。4.  组装转印夹层:Mylar聚酯薄膜屏蔽物3张以转移缓冲液饱和的滤纸已平衡的转印膜凝胶3张以转移缓冲液饱

Southern-印迹实验——电转印法

实验方法原理因为聚丙烯酰胺凝胶的扎径太小,DNA不能在其横截面上有效地扩散,毛细管转移法不适用DNA从聚丙烯酰胺凝胶的转移。因此,聚丙烯酰胺凝晈必须在低离子强度的缓冲液中用电转移法进行印迹。实验材料DNA试剂、试剂盒TBE仪器、耗材Scotch-Brite垫Whatman滤纸实验步骤1.  在非变性

免疫印迹与免疫检测

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液仪器、耗材 摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤 1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 m

免疫印迹与免疫检测实验——发光底物显迹

实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris缓冲液发光底物显迹液PBS磷酸盐仪器、耗材保鲜膜摇床实验步骤1.  用50 ml 底物缓冲液洗膜两次以平衡膜,每次15 min。 2.  对于使用硝酸纤维素膜或PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应:膜置于Nitro-Block溶液中5 min,然后以50 ml 底物缓冲液

湿式转印槽使用教程

湿式转印槽可快速、高质量地转印小型凝胶。作为电泳系统的一个组件,小型转印槽能容纳2个凝胶三明治转印夹, 用于在电泳槽内电转印两块小凝胶。

转印槽使用方法步骤

伯乐bio-rad转印槽可快速、高质量地转印小型凝胶。作为Mini-PROTEAN 3 电泳系统的一个组件,伯乐bio-rad转印槽能容纳2 个凝胶支架转印夹,用于在Mini-PROTEAN 3 电泳槽内电转印两种小凝胶(Mini-PROTEAN 3 凝胶和ReadyGel 预制胶)。伯乐b

免疫印迹与免疫检测实验——第二抗体欧联物进行免疫检测

实验材料蛋白质试剂、试剂盒封闭缓冲液TTBS缓冲液第一抗体TBS缓冲液仪器、耗材手套摇床实验步骤1.  将膜放入可热密封的塑料袋,加5 ml 封闭液,密封塑料袋,在旋转摇床或摆动平台中摇动30~60 min。 2.  用封闭液稀释第一抗体(取决于抗体和检测系统,以1:10~1:100 000稀释)。

免疫印迹与免疫检测实验——发色底物显迹

实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris缓冲液发色底物显迹液PBS磷酸盐仪器、耗材摇床实验步骤1.  在室温以PBS洗膜15 min 以去除过量的磷酸盐和Tween 20。2.  将膜放入发色底物显迹液,条带应在10~30 min 内出现。3.  用蒸馏水洗膜,终止反应。晾干后拍照留永久的记录。

免疫印迹与免疫检测实验——亲和素生物素偶联

实验材料蛋白质试剂、试剂盒TTBS缓冲液TBS缓冲液过氧化物酶碱性磷酸酶仪器、耗材摇床硝酸纤维素膜尼龙膜实验步骤1.  在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜,需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。2.  用TTBS溶液(用于硝酸纤

蛋白质转印法

蛋白质经SDS-PAGE后,胶片浸入转印缓冲液,蛋白质可被转印到硝化纤维纸(nitrocellulose) 上,先经尿素洗去SDS,并使蛋白质回復原态抗原性,可使用抗体进行免疫染色 (Towbin et al, 1979)。仪器用具:电泳转印槽 (Hoefer Transphor TE 52):转印

Northern-Blotting转印实验(毛细管转移法)

要进行Northern杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、

全自动转印仪Blotstainer在蛋白免疫印迹上的应用

由于蛋白免疫印迹的步骤操作较为繁琐,要求精度较高,实验中一步出现操作失误就会导致整个实验的白白浪费。并且一抗二抗试剂也比较宝贵,所以采用仪器操作可以降低实验的风险,保证实验的顺利进行。 鼎昊源推出的全自动转印仪就是替代人工操作的好选择,它配有自动移液系统,温控系统和孵育摇床。自动移液系统包括10个管

蛋白质免疫印迹实验

实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in,将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上,然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上,如

蛋白质免疫印迹实验

蛋白质免疫印迹实验             实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张

蛋白质免疫印迹实验

这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程,小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法,我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白:哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

  电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)  一、两块胶电泳和四块胶电泳  Mini P-4小型垂直电泳槽

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)一、两块胶电泳和四块胶电泳Mini P-4小型垂直电泳槽 

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

蛋白质转印法检定蛋白质

蛋白质转印法检定蛋白质     蛋白质经SDS-PAGE后,胶片浸入转印缓冲液,蛋白质可被转印到硝化纤维纸(nitrocellulose) 上,先经?素洗去SDS,并使蛋白质回?原态抗原性,可使用抗体进?免疫染色 (Towbin et al, 1979)。仪器用具:电泳转印槽 (Hoefer Tra

以毛细管转移方式进行Northern-Blotting转印实验

要进行北方杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vac

如何选择合适的电泳槽?

常有一些用户在电泳槽的选购时存在一些疑问,我们特作一些提示,以供购置时参考。根据用户的不同实验需要,可将最常用的电泳槽分类如下:1 水平电泳槽用于对少量或大批量核酸(DNA或RNA)进行琼脂糖电泳。水平电泳槽有不同型号,一般分为迷你型,小号,中号和大号,主要差别是凝胶板规格大小和试样格齿数及厚度。迷

高灵敏度化学发光技术应用心得(一)

一.概述化学发光 (ChemiLuminescence ,简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类,它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本

western-blot转膜是怎么做的

蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法,分为湿式转印与半干转印。湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以E-Blotter湿转槽为例,一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体,将内部垂直电

鼎昊源全自动转印仪Blotstainer在蛋白免疫印迹上的应用

  由于蛋白免疫印迹的步骤操作较为繁琐,要求精度较高,实验中一步出现操作失误就会导致整个实验的白白浪费。并且一抗二抗试剂也比较宝贵,所以采用仪器操作可以降低实验的风险,保证实验的顺利进行。   鼎昊源推出的全自动转印仪就是替代人工操作的好选择,它配有自动移液系统,温控系统和孵育摇床。自动移液系

以毛细管转移方式进行北方转印实验

   要进行北方杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (

如何获得精准的Western-Blot实验结果?(一)

蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们

半干转印与湿式转印的区别-|-WEALTEC-威泰克

刚接触 Western Blot 不久的用户,在选购 WB 设备时,经常会遇到仪器选型的问题:为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择,干式和湿式,那么哪种方法更适合我们呢?这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。

蛋白质印迹实验——从SDS凝胶上转移蛋白质

蛋白质印迹(protein blotting ) 也称为电泳转移(electropheretic transfer),即把从电泳或层析分离的蛋白转移到固定基质上的过程。固定基质通常是一些纸或膜。最通常的蛋白质印迹是将从聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离的蛋白质分子转移到硝化纤维素膜上。本实验来源「蛋白质电泳实