Antpedia LOGO WIKI资讯

杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别

1. *纤维素膜*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。NC膜的使用也很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;比如NC膜很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途--因为经不起多次“折磨”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜--混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。另外提醒一句:由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代......阅读全文

Southern 转印分析

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)

浸入式电转印

实验概要采用浸入法将蛋白质从凝胶转移至硝酸纤维素膜是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维素膜,然后再将这种夹层组合浸入盛有大量缓冲液的转印槽内,使电流从转印槽的一侧通向另一侧。通过电洗脱的方法可将蛋白质从凝胶中转印至滤膜上,如同在凝胶中迁移,只不过移动方向与胶平面垂直。若操作仔细,这是一种可将许多蛋白质转印至

半干转印与湿式转印的区别 | WEALTEC 威泰克

刚接触 Western Blot 不久的用户,在选购 WB 设备时,经常会遇到仪器选型的问题:为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择,干式和湿式,那么哪种方法更适合我们呢?这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。

Western blot转印的优化

从SDS凝胶中进行Western蛋白转印的优化需要对一系列参数进行考虑。目的是转印所有凝胶上的蛋白并将其定量地转移到转印膜上。进行高效转印需要一定程度的优化,尤其是对于大分子量和小分子量蛋白。转印后,凝胶上应不残留或残留很少的蛋白。可以在转印后进行染色进行检测。转移出凝胶的蛋白应该仅在接触凝胶的膜的

Southern 转印分析方法步骤

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)

蛋白质转印法

蛋白质经SDS-PAGE后,胶片浸入转印缓冲液,蛋白质可被转印到硝化纤维纸(nitrocellulose) 上,先经尿素洗去SDS,并使蛋白质回復原态抗原性,可使用抗体进行免疫染色 (Towbin et al, 1979)。仪器用具:电泳转印槽 (Hoefer Transphor TE 52):转印

半干电转印法

先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上(Kyhse-Andersen1984)。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗

半干电转印法

实验概要本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至

湿式转印槽使用教程

湿式转印槽可快速、高质量地转印小型凝胶。作为电泳系统的一个组件,小型转印槽能容纳2个凝胶三明治转印夹, 用于在电泳槽内电转印两块小凝胶。

Southern 印迹实验——电转印法

实验方法原理因为聚丙烯酰胺凝胶的扎径太小,DNA不能在其横截面上有效地扩散,毛细管转移法不适用DNA从聚丙烯酰胺凝胶的转移。因此,聚丙烯酰胺凝晈必须在低离子强度的缓冲液中用电转移法进行印迹。实验材料DNA试剂、试剂盒TBE仪器、耗材Scotch-Brite垫Whatman滤纸实验步骤1.  在非变性