3’RACE实验心得
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所以并不一定需要用进口试剂盒。原来准备用Takara 3’RACE的试剂盒，可是看了一下它的原理和内容，觉得挺挫的，自己DIY可能效果更好一些呢。于是根据 Invitrogen GeneRacer Kit 自己DIY了，效果不错。找来了：Invitrogen的SuperScript III反转酶，TAKaRa LA Taq酶、Pyrobest高保真酶。并根据 Invitrogen GeneRacer Kit，自己合成了3’接头引物(侵犯了人家知识产权)：3’接头：3'ap 5'-GCTGTCAACGATACGCTACGT......阅读全文
MTT实验心得
MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看
3’RACE－实验心得
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所
Realtime－PCR实验心得和RNA提取心得
并不是所有的实验都可以做real－time的，技术路线要选好当你的基因表达量少或有些不表达具体就是做普通pcr跑胶条带比较弱，不是很亮的情况下个人觉得最好不要选择real，不容易做好，特别是融解曲线用sbgr green染料做的话，引物设计时扩增片断最好小于250bp，太长了不好扩预实验先rt－pc
关于药物分析降解实验心得
今天我们说说5种条件下的降解实验及深入的讨论降解实验，是否可以参照破坏试验?破坏试验的目的是什么?实验条件的设置要注意什么?等等问题。 降解实验也就是通过高温、酸、碱、氧化等实验条件对其产品进行产物降解，也属于破坏性实验，主要看都能产生哪些杂质。 1、酸降解试 一般选择0.1N的盐酸，在
MTT实验两年心得
MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看
荧光原位杂交技术实验心得
荧光原位杂交技术（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一种非放射性原位杂交方法，用特殊的荧光素标记核酸探针，在细胞或组织切片标本上进行杂交，以检测细胞内 DNA 或 RNA 特定序列存在与否。FISH 实验操作与用非荧光标记探针的原位杂交基本相似。在组
dna的制备实验的心得体会
DNA制备即从生命体中提取DNA，需要注意到问题主要有以下几个方面：（1）新鲜样品中DNA含量相对较高且完整，能用的时候尽量用新鲜的；（2）取样量要与抽提试剂的量相对应；（3）离心的转速要适当；（4）操作时间不宜太长；（5）提取完成后最好用酸性缓冲液低温保存。
ＷＥＳＴＥＲＮ－ＢＬＯＴＴＩＮＧ心得
蛋白提取：１． 总蛋白提取（胞膜，胞浆，胞核）： 组织匀浆后,15000g, 4度, 20分钟后,取上清.Buffer:NP40 750ul, 脱氧胆酸钠0.5克, SDS 0.1克, 加1*PBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (现用现加)7.4mg/ml P
【锐赛小课堂】荧光原位杂交技术实验心得
锐赛小课堂1221-157 荧光原位杂交技术（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一种非放射性原位杂交方法，用特殊的荧光素标记核酸探针，在细胞或组织切片标本上进行杂交，以检测细胞内 DNA 或 RNA 特定序列存在与否。 FISH 实验
核酸抽提心得
最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切
western－blot试验心得
前两天做了一个western blot,现在把试验中的一点小小的体会发上来，与大家交流，希望大家多多指点！1 本实验室采用的脱脂奶粉已经存放了近两年了，虽然是四摄氏度保存，但是其封闭质量还是难以保证的。所以本人的试验结果中出现了小斑点。建议最好使用BSA或专用的脱脂奶粉进行封闭，虽然贵点，但还是有个
酶切反应心得
一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用
ChIP－新手心得
最近有不少战友在做ChIP实验，希望我的一点经验对大家有帮助（本贴不谈实验步骤，最后我会附件一份说明书，有详细步骤，另外建议像我一样的新手用试剂盒，避免不必要的麻烦）一、原理转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转
光镜与电镜技术我的一点实验心得
一般生物体是不透明的，不能直接在显微镜下观察其内部结构 经过特殊的手段，减少体积和厚度，使光线能透过。 基本原则：保持其原有的组织结构和相互关系。 制片方法的种类 切片法 石蜡切片法、冰冻切片法等 优点：组
色谱柱保养心得
今天有人问我，《色谱柱使用记录》表里样品进样针数后面为什么还有个累计进样针数？ 套用哲学观点，任何物质都是有寿命的，大到宇宙，小到原子，但是不同的物质寿命是不一样的。 每一根色谱柱都有一个大致的进样针数寿命，理论上可以有一个规定，达到进样多少针，就强制报废。不过好像并没有这样的规定，那么也可
色谱柱保养心得
每一根色谱柱都有一个大致的进样针数寿命，理论上可以有一个规定，达到进样多少针，就强制报废。不过好像并没有这样的规定，那么也可以作为一个参考，当色谱柱的柱性能参数（就是常说的理论塔板数、分离度、拖尾因子等等）不达标时，参照进样针数判断是柱子寿命到了，属于不可逆因素，只能换柱子。还是其它原因，如流动
心得安临床新用
心得安系β－肾上腺素能受体阻滞剂，用于临床已有40余年，以往主要用于治疗心律失常、心律增快、高血压、心肌梗死、心绞痛和嗜铬细胞瘤等。 经临床实践，发现该药的还有其它用途，现分别介绍如下。 1.甲亢 心得安治疗甲亢早有报道。因它能阻断β－受体，用药后可使心律减慢、心肌收缩力和房
我作NORTHERN的心得
我们试验室作NORTHERN的一些总结，欢迎指正，谢谢。Northern杂交准备物品：50ml量筒1个 100ml量筒1个 300ml烧杯1个 250ml 烧杯1个 250ml的锥形瓶1个 10ml 离心管2个 大小盘各1个 镊子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 电泳槽、转膜槽
关于实验室数据可靠性的一些心得
关于实验室数据可靠性的一些心得
5S实验室管理心得体会分享
5S的起源5S起源于日本的现代企业管理模式，包括:整理（Sort）、整顿（Straighten）、清扫（Shine）、清洁（Standardize）和素养（Sustain），因为日语的罗马拼音均以“S”开头，英语也是，所以将这种管理模式简称为5S管理。整理（Sort）整理就是区分需要和不需要的物品，
我的实战酶切心得
几个小技巧：1：在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1-5微升(当然不能超过预混液总体积的5%)，以防止最后一管酶液不够的尴尬局面.2:记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那
胃下垂辨证辨病心得
胃下垂属“胃缓、胃痛”等范畴，病因或为饮食不节、暴饮暴食、过度思虑等，日久损伤脾胃，中气下陷，胃肌无力，致使胃下垂；或劳倦内伤，感受外邪等，使胃失和降，纳化异常，渐渐形体虚损，脾虚下陷，而导致胃下垂；或为情志内伤，肝气犯脾，升运无力，导致胃下垂；或为常因饱食，食后剧烈运动，或开车上下颠簸，久
色谱柱维护保养心得
如何清洗和保存反相色谱柱？怎样处理新买来的色谱柱？用水来冲洗色谱柱有什么后果？分析结束后如何冲洗？这些问题是HPLC分析人员常常要面对的。本文就这些问题介绍一些色谱柱的维护和保养经验。 新色谱柱的处理 对于新购买的色谱柱，首先应该做些什么呢？几乎所有的色谱柱在出厂时都保存在它们测试时的
难治性腹水的治疗心得
腹水的形成是腹腔内液体的产生和吸收失去动态平衡的结果。引起腹水的病因很多，无论是腹水呈漏出性还是渗出性，均可因多种疾病而引起，为了减轻大量腹水引起的症状(包括腹胀、呼吸受限等)，可采取必要的对症治疗。以下是本人临床中总结的治疗腹水的经验。 一、1克Na可潴留200ml的水，故出现腹水时，应
细胞增殖检测：MTT法心得
MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。一、MTT的原理活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。二、MTT法检测细胞增殖实验的注意事项1、培养好细胞点板养细胞没
阿司匹林的临床应用心得
阿司匹林 阿司匹林与青霉素、安定一起被认为是医药史上三大经典杰作。我们老祖宗早就发现嚼柳树皮可以退烧和止痛，而到了19世纪，欧洲科学家发现柳树皮的有效成分是水杨酸，成功提取出来但是对胃**太大。1897年，德国化学家霍夫曼成功将水杨酸乙酰化合成为乙酰水杨酸，保持了原来药效但副作用大大减
液相色谱柱使用心得
液相色谱柱使用心得 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多，如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。 溶剂的匹配转换 色谱柱内保存溶剂和仪器系
长片段PCR技术心得分享
PCR技术自1983Mullis发明以来，给生命科学带来了历史性的变化，现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是，普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片段基因，对于5kb以上的长片段基因很难有效的扩增，这使PCR受到了很大限制。故人们一直以来都在尝
相色谱柱的使用心得
高效液相色谱仪是进行定量分析，杂质检查等分析工作中主要的精密仪器，色谱柱是液相色谱仪的zui核心部件。在这里，介绍一下依利特液相色谱柱使用中的注意事项及使用心得。 一、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 依利特液相色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多，如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积
液相色谱柱使用心得
液相色谱柱使用心得 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多，如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。 溶剂的匹配转换 色谱柱内保存溶剂和仪器