3’RACE实验心得

引子:从06年12月份开始,断断续续做了一个多月的3’RACE,有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验,受益匪浅。在这里,我就自己的经历略作总结,希望能给像我一样的新人们有点启示,少走些弯路,不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择:3’RACE从原理上就能明白,它比5’RACE 要容易得多,所以并不一定需要用进口试剂盒。原来准备用Takara 3’RACE的试剂盒,可是看了一下它的原理和内容,觉得挺挫的,自己DIY可能效果更好一些呢。于是根据 Invitrogen GeneRacer Kit 自己DIY了,效果不错。找来了:Invitrogen的SuperScript III反转酶,TAKaRa LA Taq酶、Pyrobest高保真酶。并根据 Invitrogen GeneRacer Kit,自己合成了3’接头引物(侵犯了人家知识产权):3’接头:3'ap 5'-GCTGTCAACGATACGCTACGT......阅读全文

原子吸收仪器使用心得

环境篇:   1、原子吸收仪器应该放置在单独的实验室内(不与其它仪器混放);   2、仪器上方有良好的排风装置;   3、原子吸收仪器室不得放置有机试剂;   4、实验室应具备独立的钢瓶室,并具备相应的防爆设施;   5、稳定的220V电源(220V+-

悬浮细胞培养方法求心得

悬浮细胞一般几天离心一次,觉得好难养啊!求心得?丁香园网友goingba认为:你养的是什么细胞,原代吗?我觉得悬浮细胞最好养了,不用消化,关于几天离一次心,要看你的细胞生长状态了,我养过血液肿瘤细胞,增值比较快,我一般是第二天半量换液(加等量培养基后一分二),第三天若长得比较满,就离心换液。若你不想

胆结石超声诊断及误诊心得

  超声诊断胆结石准确性高,对临床意义很大,并且看似简单的往往存在有误诊,谈谈干扰因素及避免误诊:    漏诊原因:    1.大多胆固醇结石比重轻漂浮在底上部,因肠气干扰易漏诊,患者右侧卧位使结石移向体部。    2.胆泥掩盖的结石。    3.无声影结石,此类声束可透过,不产生声影,适当低增益,

临床微生物室轮转心得

 小昭同学:不知不觉我都在微生物呆了一个多月了,从真菌结核到手工鉴定,再到血培,血清,培养基,最后一周就是前台。说一下我的 感受,也希望后面来轮转的同学能从我这提前得到点信息(每个实习点都有很多知识值得我们学习,这不仅仅是说同学,我们工作人员也需要不断更新和理论联系实际。诸位同学在上课时候学了 很多

浅谈中风后突发癫痫处理心得

脑中风属于一种对人们健康危害性较大的常见病和多发病,而癫痫发作是指具备突发突止、短暂一过性、自限性等特点,脑电图存在异常过度同步化放电的临床发作。脑中风是引起癫痫发作的重要原因,脑中风后癫痫发作成为增加脑卒中患者致残率、致死率的重要因素。一般来说,卒中后2周内发作属于卒发性发作,卒中第3周以后发作癫

长片段PCR技术心得分享

PCR技术自1983Mullis发明以来,给生命科学带来了历史性的变化,现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是,普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片段基因,对于5kb以上的长片段基因很难有效的扩增,这使PCR受到了很大限制。故人们一直以来都在尝

RTPCR一些心得

从RNA到电泳鉴定一、RT-PCR原理:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA 作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA 为模板,用VI 型胶原蛋白的α1 链的编码序列的特异性引物进行PCR 扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR 使RNA

长片段PCR技术心得分享

PCR技术自1983Mullis发明以来,给生命科学带来了历史性的变化,现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是,普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片段基因,对于5kb以上的长片段基因很难有效的扩增,这使PCR受到了很大限制。故人们一直以来都在尝

原子吸收仪器使用心得

  环境篇:  1、原子吸收仪器应该放置在单独的实验室内(不与其它仪器混放);  2、仪器上方有良好的排风装置;  3、原子吸收仪器室不得放置有机试剂;  4、实验室应具备独立的钢瓶室,并具备相应的防爆设施;  5、稳定的220V电源(220V+-10%,无波动),避免与大型用电设备使用同相电源; 

全站仪进行控制测量心得

  一、 仪器测量前必须严格校验盘读数指标差,特别是竖盘读数指标差的校验。有规范要求仪器使用时第一、二、三天每天校验,以后一个周一次。使用中发现,我们使用的仪器必须每天校验,只要发现竖角盘左,盘右读数指标差偏差过大,就要校仪器,一般都有效。不知是我们这台仪器有问题,还是这个型号仪器的通病。还好竖盘校

长片段PCR技术心得分享

PCR技术自1983Mullis发明以来,给生命科学带来了历史性的变化,现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是,普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片段基因,对于5kb以上的长片段基因很难有效的扩增,这使PCR受到了很大限制。故人们一直以来都在尝

胶回收的心得体会

胶回收1. 提高胶回收量的办法:1) 增加电泳时的上样量。2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。3) 切胶时尽量只切有条带的胶,减小切胶体积:含目的片断很少的胶就不要要了,不然影响回收率。4) 把切的两块或多块胶融化后,无论多大的体积都用一个管子,转移到同一个柱子上。5) 溶胶时所加的溶液可多一点,这样更有

液相色谱柱使用心得

 液相色谱柱使用心得  柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配  色谱柱是消耗品,不是仪器原配的情况很多,如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长,不易拧紧而漏液;接头比柱头深度短,柱头内留有空隙而产生死体积,使谱带展宽和峰拖尾。  溶剂的匹配转换  色谱柱内保存溶剂和仪器

高效液相色谱柱使用心得

柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配  色谱柱是消耗品,不是仪器原配的情况很多,如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长,不易拧紧而漏液;接头比柱头深度短,柱头内留有空隙而产生死体积,使谱带展宽和峰拖尾。  溶剂的匹配转换  色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂,如果和流

支气管哮喘辨证辨病心得

  支气管哮喘属祖国医学的“哮证”或“吼病”范畴。此病多因先天禀赋不足或后天劳倦内伤,屡感外邪等损伤肺,脾,肾,使脏腑功能失调,结痰并深伏于肺。每因感邪,劳累或情志不遂等诱因引触伏痰而发。    发作时肺气郁闭,气道痉挛,使气道受阻,见呼吸困难。此时最易见效的治疗方法是祛风解痉通气道,以及抗过敏

恒温恒湿试验箱维修心得

  恒温恒湿试验箱是最常见的环境试验设备,虽然它的普及率仅次于烘箱,而且随着用户对设备品质的追求,如今的恒温恒湿试验箱操作起来也相对便捷,但是不管是廉价的、还是高昂的设备维护保养起来都是特别的繁琐,这就导致了用户不能及时去维护保养设备容易故障累积,维修事故频发。   恒温恒湿试验箱最容易出现的故障便

慢性胰腺炎辨证辨病心得

  慢性胰腺炎属“胰胀、胃脘痛”等范畴。初因暴饮暴食、大量饮酒等引起脾胃受损,湿热内蕴。湿热与食滞积于肠道成阳明腑实,诸邪犯胰,损伤胰腺,即发为胰胀;湿热薰蒸肝胆,胆汁外溢可形成黄疸,胆内湿热亦可横逆犯胰,使胰受损,发为胰病。胰腺受邪日久不愈或反复发作,必然入络而导致气滞血瘀,最终湿热、痰浊、食

痔疮局部麻醉心得体会

 痔疮的局麻也分两步作:第一步是把麻药打在肛管的上端,务使麻药沿齿状线浸润一周,穿刺深度应在皮下和黏膜下层,不必刺入肌层。至于用针的型号大小和刺入的技法,与诸位大同小异;我们体会是:如果事前在肛管涂抹表面麻醉剂,3--5分钟后再打局麻,可以明显减轻刺入瞬间的疼痛。完成第一步后,继而施以手法或器械扩肛

粒径分析仪的使用心得

  粒径分析仪特点  1、测量粒径范围广  激光粒度分析仪可进行从纳米到微米量级如此宽范围的粒度分布.约为:20nm——2000μm,某些情况下上限可达3500μm;由于仪器使用过程中无须更换镜头及调整光学系统,提高了系统的稳定性,简化了操作过程.  2、适用范围广  激光粒度分析仪不仅能测量固体颗

高效液相色谱柱使用心得

 高效液相色谱柱使用心得:柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品,不是仪器原配的情况很多,如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长,不易拧紧而漏液;接头比柱头深度短,柱头内留有空隙而产生死体积,使谱带展宽和峰拖尾。溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留

冰冻切片的制作技巧及心得(一)

下面发一个有关冰冻切片制作的资料,来自于国外病理医生的经验和心得,现翻译过来供大家参考,欢迎提出不同的见解。冰冻切片技术1.从锋利的刀片开始我发现使用新的锋利的刀片时常常做出高质量的片子。我觉得在医疗场合中某些尽量省钱的做法显得有些因小失大。一般我对每位患者的标本都使用一组新的刀片,当片子的质量开始

制备感受态的技术心得

1:要注意每次做感受态要摇过也菌,最重要的是在摇菌的过程千万不要被污染。2:其次是摇菌,要菌并不需要按照一定比例接,最重要的是收菌时候的OD600的值。这是极其重要的,也是很容易被大家忽略的问题,一般OD值达到0.42-0.48收菌是最好的。其次是方法:我做的方法是经过分子克隆上的INOUE法 我做

克隆心得:帮助新手快速做出克隆2

酶切直接在回收PCR产物的试管中配置酶切体系:PCR产物酶切-制作插入片断公用Buffer 6μl酶 I 3μl酶 II 3μlPCR产物 ——双蒸水 48μl合计 60μl要将PCR产物接入的质粒载体A,取A质粒3μl进行酶切。A质粒酶切-制作载体片断公用Buffer 3μl酶 I 1μl酶 II

简述心得安的物化性质

  外观与性状:白色无气味的结晶粉末。在水或乙醇中溶解,在氯仿中微溶。  密度:1.093 g/cm3  熔点:163-164ºC  沸点:434.9ºC at 760 mmHg  闪点:216.8ºC  稳定性:对热稳定,对光不稳定。  储存条件:保存在避光、阴凉、干燥、密封的容器中。

关于心得安的鉴别测定介绍

  (1)取本品,用甲醇制成每l mL中含20μg的溶液,照紫外-可见分光光度法(附录Ⅳ A )测定,在290 nm 与319 nm的波长处有最大吸收。  (2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集396图)一致。  (3)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应(附录Ⅲ)。

梨状肌综合症的治疗心得

  由于急慢性损伤,如下肢的过度内外旋或外展,或负重时用力不当、久站、久蹲或感受风寒均可引发此病,引起臀后部及大腿后外侧疼痛麻痹。由于梨状肌变性,后期可形成硬性条状肿块,俯卧位可触及。       诊断:    1、患侧臀部疼痛,并沿大腿后侧,小腿后外侧扩散,有的患者小腿也有麻木感。    2、俯卧

光化学反应仪使用心得

  1、光化学反应仪使用前首先把八位反应器(或磁力搅拌器)放入主机箱内,石英反应管(或反应容器)内放入磁子。之后检查所需要使用的汞灯(氙灯)、反应器以及冷却水循环装置是否连接好。  2、反应暗箱内设有八位反应器(或磁力搅拌器)和灯的电源接口,请按指示连接。  3、调节控制器上面的光源选择,使所使用光

硬件高手的开关电源设计心得(二)

今天谈一谈印制板铜皮走线的一些事项:走线电流密度:现在多数电子线路采用绝缘板缚铜构成。常用线路板铜皮厚度为35μm,走线可按照1A/mm经验值取电流密度值,具体计算可参见教科书。为 保证走线机械强度原则线宽应大于或等于0.3mm(其他非电源线路板可能最小线宽会小一些)。铜皮厚度为70μm

细胞污染的一些总结和心得

小生刚开始做细胞培养不久,对于一个细胞培养的新手来说,最怕的就是细胞受污染。所以本人翻阅了一些园子里的关于细胞培养过程中的污染问题的贴子,结合平时查阅资料以及这些天的细胞培养的一些心得,整理出一些关于细胞污染的东东与大家一起分享。希望能对刚踏入细胞培养的同仁们有些帮助,也希望各位达人作出补充,大家共