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脱氧核酶实验

随着体外分子实验技术的发展,近年来相继发现了许多具有不同催化功能的 DNA 分子,这些被称为脱氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反应、连接反应、卟啉环金属化等许多化学反应,而且还具有 DNA 激酶活性。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理随着体外分子实验技术的发展,近年来相继发现了许多具有不同催化功能的 DNA 分子,这些被称为脱氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反应、连接反应、卟啉环金属化等许多化学反应,而且还具有 DNA 激酶活性。实验材料脱氧核酶试剂、试剂盒脱氧核酶切割缓冲液终止缓冲液脂质体仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶电泳装置放射自显影用具水浴实验步骤一、材料与设备1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳装置。2. 放射自显影用具。3. 水浴。4. 脱氧核酶 ( 修饰或未修饰)由化学合成获得。5. 脱氧核酶体外切割的底物 RNA 由体外转录获得。6. 2X 脱氧核酶切割缓冲液:50 mmol/L Tris ......阅读全文

脱氧核酶实验

            实验方法原理 随着体外分子实验技术的发展,近年来相继发现了许多具有不同催化功能的 DNA 分子,这些被称为脱氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反应、连接反应、卟啉环金属化等许多

脱氧核酶实验

实验方法原理 随着体外分子实验技术的发展,近年来相继发现了许多具有不同催化功能的 DNA 分子,这些被称为脱氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反应、连接反应、卟啉环金属化等许多化学反应,而且还具有 DNA 激酶活性。实验材料 脱氧核酶试剂、试剂盒 脱氧核酶切割缓冲液终止缓冲液脂质体仪器、耗材

3.8 脱氧核酶切割 RNA 专一位点

脱氧核酶是一类由三十几个脱氧核苷酸构成的寡聚脱氧核糖核苷酸,制备容易,使用方便,是体外在特定位点切割 RNA 的有效方法。常用于体外切割 RNA 底物的脱氧核酶是「10~23」型脱氧核酶。实验材料脱氧核酶无RNA酶的DMA酶切割底物RNA试剂、试剂盒5X反应缓冲液5X乙酸镁或氯化镁无水乙醇水饱和酚实

脱氧核酶切割 RNA 专一位点

实验材料 脱氧核酶无RNA酶的DMA酶切割底物RNA试剂、试剂盒 5X反应缓冲液5X乙酸镁或氯化镁无水乙醇水饱和酚实验步骤 一、材料与设备1) 脱氧核酶 (其设计与制格参见脱氧核酶相关章节)2)5X 反应缓冲液:750Tnmol/LNaCl,200 mmol/LTris-HCl (pH8.0)3)5

脱氧核酶切割 RNA 专一位点

            实验材料 脱氧核酶 无RNA酶的DMA酶 切割底物RNA 试剂、试剂盒

小鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA试剂盒操作步骤

我司ELISA试剂盒品质保证,质量优,价格实惠,是您生物实验的首选,如有需要可与我司销售人员联系。本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆,细胞上清及相关液体样本中小鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)水平。

125I-UdR释放试验测定NK细胞活性

            实验方法原理 25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-U

细胞凋亡的分子生物学检测方法(1)

[实验原理]细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 ﹪的染色体DNA在Ca ²+和Mg²+依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180~200bp核小体DNA多聚体。DNA

中检院发布二代测序试剂质量评价通用原则

  一.前言  本指导原则主要针对第二代测序(next generation sequencing,NGS)技术检测试剂(以下简称“NGS检测试剂”)产品质量提出指导性要求,涉及基本原则、主要原材料、检测流程及性能评价等方面。  本指导原则是对企业和检验人员的指导性文件,但不包括注册审批所涉及的行政

NGS检测试剂生产应获得《医疗器械生产许可证》

  为加强第二代测序技术检测试剂的规范和指导,进一步保证和提高相关产品的质量,8月8日,中国食品药品检定研究院(中检院)组织制定了《第二代测序技术检测试剂质量评价通用技术指导原则》(下称《指导原则》)。  该文件是中检院发布的首个质量评价技术指导原则,旨在对产品设计、研发及验证的各关键环节进行规范,

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化             实验材料 T4 DNA 连接

125I-UdR释放试验测定NK细胞活性

实验方法原理25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞,以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞,进行体外NK细胞活性检测。被

放射性同位素的应用-同位素示踪法(三)

(二)正式实验阶段 1.选择放射性同位素的剂量   同位素必须能经得起稀释,使其最后样品的放射性不能低于本底,一般来说放射性同位素在生物体内不是完全均匀地被稀释,可能在某些器官、组织、细胞、某些分子中有选择性地蓄积,蓄积的部分放射性就会很强,在这种情况下,应以相关部位对示踪剂的蓄积率来考虑示踪剂用量

方案27.5 羊膜细胞的培养

封闭式试管培养 开放式盖玻片培养             实验方法原理 在标准培养箱(37°C ) 中用 Lei

羊膜细胞的培养

封闭式试管培养 开放式盖玻片培养             实验方法原理 在标准培养箱(37°C ) 中用 Lei

细胞凋亡检测实验——TUNEL法

实验方法原理脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确

125I-UdR释放试验测定NK细胞活性

自然杀伤(NK)细胞参与了机体免疫防御的第一道防线,主要用于(1)免疫监视系统中抗肿瘤抗病毒(2)免疫调控。实验方法原理25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外

TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法

       细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 ﹪的染色体DNA在Ca ² 和Mg² 依赖的核酸内切酶作用下,在

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

细胞凋亡的分子生物学检测方法

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 ﹪的染色体DNA在Ca ²+和Mg²+依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180~200bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或

DNA序列测定的技术和策略

目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱

诱变 PCR 实验

试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高纯度的脱氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物琼脂糖凝胶用溴化乙锭

诱变 PCR 实验

            试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇 乙醇 矿物油或者一个蜡珠 3mol L NaOAc 5 mmol L M

DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议,请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)

羊膜细胞的培养——封闭式试管培养

实验方法原理在标准培养箱(37°C ) 中用 Leighton 塑料管培养细胞,然后用胰蛋白酶悬浮法收集细胞。实验材料羊水标本D-PBSA秋水仙酰胺胸腺嘧啶核苷溴脱氧尿核苷胰蛋白酶EDTAHistopaque-l077试剂、试剂盒完全培养液胰蛋白酶和EDTA混合液消毒剂如Virkon氯化钾低渗溶液固

DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验             实验材料 新鲜组

甲型肝炎病毒 RNA 提取

试剂、试剂盒 TSES 缓冲液TSES 缓冲液饱和酚氯仿辛醇乙酸钾乙醇缓冲液 Almol LNaH2P04 缓冲液氯胺 T 溶液Na125I5 mmol LNa2S2O5lOOmmol LKINET 缓冲液酵母 tRNA蔗糖纤维素柱平衡液三重蒸馏水0.1mol LNaOH5 mmol L

双氧水诱导肿瘤细胞凋亡——双氧水诱导法

实验材料Hela细胞系试剂、试剂盒DMEM培养基生理盐水台盼蓝染色液DAPI染料青霉素链霉素Rnase A硫酸亚铁仪器、耗材普通光学显微镜荧光显微镜载玻片盖玻片细胞培养瓶电泳仪高速离心机超净工作台二氧化碳培养箱恒温水浴锅细胞记数器1. 实验目的通过实验了解细胞凋亡的一般过程和形态特征,了解诱导细胞凋

细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)-2

2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA 特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种染料与 DNA 的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA 的A

微核实验在染色体水平检测DN A损伤实验(二)

2 用阿糖胞苷微核实验检测人淋巴细胞 (V G 1 期 DNA 剪切修复损伤的方法在对暴露于各种遗传毒物的人 G 。期淋巴细胞的 M N 进行检测后发现,对于主要引起碱基损伤和 DNA 加合物而不是 DNA 链断裂或者纺锤体损伤的化学物质和紫外辐射而言, MN 的形成与细胞毒性相比明显程度较