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DNA经pcr扩增后电泳出现了三条带是怎么回事

非特异性扩增 优化下pcr条件 在不行的话就重新设计引物......阅读全文

提取total RNA 跑胶为什么只有3条带

三条是主带哺乳动物的RNA包括mRNA,rRNA,tRNA和小RNA,根据分子量和沉降系数的不同,rRNA又可分为28s, 18s 和5.8s 的rRNA。从RNA的含量上看,rRNA是几种RNA中最多的,高达90%以上,而mRNA很少,只有1-2%,而其他两种RNA的分子量比较小,这就解释了为什么

煮沸裂解法提取质粒DNA

  质粒是存在于细菌染色体外的一个或多个能独立复制并稳定遗传的小型环状双链DNA分子,其分子量一般在0.2-10KD范围内。由于质粒分子小,便于分离和提取,可以携带目的基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达。  质粒提取方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质

质粒提取的方法和影响因素

质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或者表达的重要媒介,这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值,质粒提取是分子生物学最常见的实验之一。目前质粒提取实验大多借助试剂盒来完成,那么关于质粒提取的原理,您的了解足够深入吗? 目前,质粒提取试剂盒最常用的方法是碱裂解法。碱裂解法原理:根据共价闭合环状D

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA

核酸分离与纯化的设计与原则(二)

(四)核酸的浓缩、沉淀与洗涤随着核酸提取试剂的逐步加入,以及去除污染物过程中核酸分子不可避免的丢失,样品中核酸的浓度会逐渐下降,及至影响到后面的实验操作或不能满足后继研究与应用的需要时,需要对核酸进行浓缩。沉淀是核酸浓缩最常用的方法,其优点在于核酸沉淀后,可以很容易地改变溶解缓冲液和调整核酸溶液至所

消化系统的大体解剖结构实验

1.了解消化系统的组成和大体解剖构造。2.观察口腔构造,了解牙的构造和种类、舌乳头和唾液腺的形态特点及导管开口部位。实验材料头部正中矢状切标本唾液腺解剖标本腹腔剖开标本舌食管胃小肠及大肠的离体剖开标本肝胰的离体解剖标本仪器、耗材解剖镊解剖盘放大镜压舌板镜子实验步骤一、口腔用头部正中矢状断面标本,也可

消化系统的大体解剖结构实验

实验材料 头部正中矢状切标本唾液腺解剖标本腹腔剖开标本舌食管胃小肠及大肠的离体剖开标本肝胰的离体解剖标本仪器、耗材 解剖镊解剖盘放大镜压舌板镜子实验步骤 一、口腔用头部正中矢状断面标本,也可用镜子对照自己的口腔观察和辨认以下结构:口腔前界为上下口唇,后界与咽相通;两侧壁为颊;上壁为腭,腭分前部的硬腭

PCR在临床检验中的应用(二)

     呼吸系统感染性疾病主要的有肺结核、非典型性肺炎等。结核杆菌感染曾给人类健康带来很大威胁,一度是较严重的致死性疾病之一。解放以后由于对结核病的预防的重视,特别是特效抗痨药物的出现,使结核病流行基本被控制。近来结核病有抬头的趋势,基原因可能有两方面,

专家建模解释第三条范艾伦辐射带

  当我们试图将手探到更深远的宇宙空间时,地球周边这点事我们是否已能很好的驾驭?显然仍需努力。据9月22日发表在《自然—物理学》杂志上的一篇论文,加州大学洛杉矶分校的空间研究专家报告称,已成功建模并解释了地球周边第三条范艾伦辐射带的行为,其被前所未有极端高能的粒子所充斥,和常规范艾伦辐射带相比,这条

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP) 实验方法

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)     聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)

聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序为:

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)

  聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 

育人于山林——记北京林业大学赵秀海团队

赵秀海(右四)向中外专家及研究生介绍吉林蛟河针阔混交林样地树木个体长期定位监测结果。  在野外工作一段时间,师生关系、同学交往比在实验室更亲密。在野外沟通顺畅、不生硬,学生们的办事能力、自主性都得到了锻炼。  如果再晚一些时日采访,北京林业大学林学院院长赵秀海又要变成“光杆司令”了。每年5月到10月

PCR-SSCP的原理特点、操作方法和应用-2

2)电泳取10μlPCR产物,加入10μl变性剂(95%甲酰胺,10mmol/LEDTA,0.02%溴酚蓝)、30μl 石蜡油,煮沸5min,取出立刻放入冰浴中2min以上,然后将水相全部上样,10-15℃下电泳.开始在300V电压下电泳5min,然后在120V电泳8h,取下凝胶,将其浸在含

PCR技术(十二):PCR-SSCP的发展现状

随着分子生物学技术的发展,检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后,各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage,RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restric

SSCP原理

SSCP原理及特点 日本Orita等研究发现,单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个碱基发生改变时,会或多或 少地影响其空间构象,使构象发生改变,空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰 胺凝胶中受排阻大小不同.因此,通过

细胞生物学名词解释(五)

9. 带3蛋白(band 3 protein)与血型糖蛋白一样都是红细胞的膜蛋白,因其在PAGE电泳分部时位于第三条带而得名。带3蛋白在红细胞膜中含量很高,约为红细胞膜蛋白的25%。由于带3 蛋白具有阴离子转运功能,所以带3蛋白又被称为“阴离子通道”。带3蛋白是由两个相同的亚基组成的二聚体,

核酸鉴定方法之浓度/纯度及完整性鉴定

核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要,因此,对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。本文简单的回顾学习一下核酸鉴定的方法。核酸鉴定包括:浓度/纯度鉴定+完整性鉴定 1.浓度/纯度鉴定 (1)紫外分光光度计:原理:由于核酸中的

Western Blot详解-常见的问题指南(二)

4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别?解答:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)-5

NN. 用的是Roche molecular Biochemicals公司的由100kd,75kd,45kd,30kd,20kd,10kd组成的marker。开始做Western Blot时还能够看到marker,当然也仅能看见其中最多三条带。用80V进行SDS-PAGE电泳,用恒压10V4

Western Blot详解(四)

还有一种离子交换型膜是羧甲基(CM)修饰的纤维素膜,它可以结合蛋白和多肽分子,以及其他的一些带正电荷的样品,最适结合pH范围在4-7。结合的多肽分子可以从CM膜上洗脱下来,用于氨基酸系列分析或微测序。5.Marker的相关疑问MM.我用的是可视marker(BIO_RAD),但是电泳总跑不全8条带,

RNA甲醛变性电泳实验原理和操作

[原理] 用溴化乙锭等荧光染料示踪的核酸电泳结果可用于判定核酸的纯度。由于DNA分子较RNA分子大许多,电泳迁移率低;而RNA中以rRNA最多,占到80%~85%,tRNA及核内小分子RNA占15%~20%,mRNA占1%~5%。故总RNA电泳后可呈现特征性的三条带。在原核生物为明显可见的23S

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

为什么RNA电泳是三条带

核糖体RNA的含量最高,因此这三条带最明显,可是其实不只是这三条,可能你们实验条件有限,只看到3条了,我实验中有时候能看到很多条

为什么RNA电泳是三条带

核糖体RNA的含量最高,因此这三条带最明显,可是其实不只是这三条,可能你们实验条件有限,只看到3条了,我实验中有时候能看到很多条

新能源成大港支柱产业建津最大风力发电聚集区

  滨海新区大港通过建设三条风力发电带、促进石油石化产业升级、实施海水淡化工程使新能源产业成为支柱产业。新能源产业创新发展带动区域经济快速发展,今年上半年,大港各项经济指标高速增长,地方生产总值完成144.3亿元,同比增长21.4%;地方财政收入16.6亿元,同比增长27%;地方固定资产投资 8

PCR-SSCP标记技术

实验概要日本Orita等研究发现,单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个碱基发生改变时,会或多或少地影响其空间构象,使构象发生改变,空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻大小不同.因此,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(

DNA琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分析

一、原理琼脂糖凝胶具有分子筛效应。在中性ppH值的电泳缓冲液体系中,DNA分子由于带负电荷,所以在电场作用下由负极向正极泳动。由于DNA分子的大小和构型不同,在相同的时间内迁移至不同的位置。凝胶经溴化乙锭染色后,紫外检测仪下观察,即可看见DNA片段按大小不同呈条带分布。由于在一定条件下,DNA的迁移