基因敲除与RNA干扰的关系
20世纪80年代初，胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因，传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用，但是，这个方法在当年来说，存在效率低、劳动成本高的缺点，严重制约了基础研究和临床应用，这就需要科学家探索更为简洁高效的基因编辑技术。为了实现利用简单的方法使特定基因失去功能，科学家研发出了RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术，希望更易于研究哺乳动物细胞的基因功能，它具有操作简单、效果明显等优点。但RNAi不能作用于所有基因和某些细胞类型(如神经元)，而且存在位置效应、临时性和不完全敲除的缺点[3]。随着各种基因编辑技术的进步，如：锌指核酸酶技术(zinc finger nuclease，ZFN)[4]、转录激活样效应物核酸酶技术(tr......阅读全文
基因敲除与RNA干扰的关系
20世纪80年代初，胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因，传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用，但是，这个方法在当年来说，存
基因敲除，rna干扰，基因沉默有什么关系
基因敲除一般指永久的、不可逆转的敲除/失活靶基因，目前其中一种热门的，常见的基因敲除方法是CRISPR/Cas9，利用gRNA靶向靶基因并指导cas9切割基因双链，形成移码突变或片段敲除来完成基因敲除。基因沉默与基因敲除不同的地方在于，沉默可以是暂时性的、可逆转的失活基因/抑制基因表达，基因可以是存
倚天屠龙，谁与争锋——且看基因敲除与RNA干扰的关系
研究历史 20世纪80年代初，胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因，传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用，但是，这
RNAi——双链RNA引起的基因敲除（2）
在构建双链RNA的表达载体时，使用RNA多聚酶Ⅲ来指导RNA的合成。这是因为RNA多聚酶Ⅲ有明确的启始和终止序列，而且合成出的RNA不会带有polyA尾。当RNA多聚酶Ⅲ遇到连续5个胸腺嘧啶时，它指导的转录就会终止，并且转录产物在第二个尿嘧啶处被切下来。U6启动子能被RNA多聚酶Ⅲ识别， 合
RNAi——双链RNA引起的基因敲除（1）
1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA[1]。这些双链RNA是体外
RNA干扰（转录后基因沉默）实验
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。目前主要用于（1）特异性剔除或关闭特定基因的表达 （2）探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗 （3）使
RNA干扰（转录后基因沉默）实验
RNA干扰 实验方法原理 1. 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsR
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
基因敲除简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因