ELISA样本制备及注意事项（一）

一、血清的采集、处理和保存

1、真空采血针采集新鲜血液，加入无菌试管中；

2、采血后室温静置1小时；

3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

4、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。

大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。

二、ELISA 实验中血浆的采集、处理和保存

1、真空采血针采集2ml 新鲜血液，加入无菌试管中；

2、按 1:9加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠），30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；

3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心5min；

4、取上清。分装冻存备用，

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA，抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。

三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存

1、采集尿液样本500ul，加入无菌试管中；

2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

3、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。

四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存

1、采集脑脊液样本，加入无菌试管中；

2、将采集的脑脊液用离心机4℃，2500rpm 离心10min；

3、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存

1、采集细胞培养上清液，加入无菌试管中；

2、将采集的细胞上清液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

3、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

六、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存

1、10%水合氯醛溶液，腹腔麻醉；

2、打开腹腔，另取10ml注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽；

3、在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml，分三次灌洗：2ml、1.5ml、1.5ml灌，。回收率在70%以上；

4、将采集的肺泡灌洗液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。