PCR法检测乙肝病毒（HBV）

血清样品

HBV-PCR反应液 HBV-DNA裂解液 阳性模板 溴化乙锭

PCR扩增仪 电泳仪 紫外线分析仪

一、标本处理

取混匀的血清20μl加20μl裂解液，搅匀后100℃沸水浴10分钟，最后15000rpm/min离心3分钟，取4μl上清待检。

二、加样及PCR

取反应液一管（使用前稍加离心），加4μl待检上清或阳性对照于底层反应液中，混匀后高速离心片刻，然后置PCR仪，设置程序94℃预变性2分钟，再按94℃/30秒、55℃/30秒、72℃/60秒扩增35个循环。

三、电泳与结果判断

取15μl 反应液，经2%琼脂糖凝胶电泳（5V/cm）30分钟后，在紫外灯下观察结果，若410bp处出现橙黄色带，则HBV为阳性。

1. 反应管中加好所有试剂后，应立即上机扩增，以免形成过多的二聚体。

2. 阳性模板可用阳性血清代替，处理方法同上。

3. 阳性模板及DNA提取液使用前需充分融化离心。

4. 反应也的表面为固体封盖剂，电泳取样时从反应管底部洗液。

5. EB为强致癌物，操作过程应注意防护。

6. 注意无菌操作，以免出现假阳性。