SD大鼠神经视网膜组织分离和鉴定

实验概要

本研究对SD大鼠神经视网膜进行分离，并用组织学和透射电镜方法鉴定所分离的组织。

主要试剂

1%戊巴比妥钠，液氮，HE染色剂，4%多聚甲醛，二甲苯，苏木素-伊红，2.5%戊二醛，0.1mol/L磷酸缓冲液，1%饿酸，丙酮，环氧树脂618，醋酸铀，枸椽酸铅

主要设备

解剖显微镜，冻存管，光镜，LKB超薄切片机，透射电镜(transmission electron- microscope，TEM)

实验材料

成年雄性SD大鼠

实验步骤

1. 成年雄性SD大鼠50只，体重300 g左右。1%戊巴比妥钠30 mg/kg，腹腔注射，颈推脱臼处死。

2. 摘除眼球，分离神经视网膜组织。

3. 解剖显微镜下沿角膜缘切开眼球，去除角膜、晶体和玻璃体，剥离神经视网膜组织，用预冷去离子水冲洗，滤纸吸干水分。置冻存管内，用做组织总蛋白提取。

4. 部分分离的神经视网膜组织，立即液氮冻存。7 um快速冰冻切片，HE染色，封片镜检。

5. 部分神经视网膜组织，立即用4%多聚甲醛固定24小时，常规石蜡包埋，4um连续切片，二甲苯脱蜡，苏木素-伊红染色，常规脱水，透明，封片，光镜观察。

6. 部分神经视网膜组织，立即用2.5%戊二醛4℃固定2小时，0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗，1%饿酸后固定2小时，丙酮梯度脱水，环氧树脂618包埋，LKB超薄切片机切片，电子染色、醋酸铀、枸椽酸铅各15 min。透射电镜(transmission electron- microscope，TEM)观察摄片。