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首个CRISPR/Cas9靶序列数据库

近期,来自美国国立卫生研究院和瑞典乌普萨拉大学的研究人员,在国际著名学术期刊《Nucleic Acids Research》上发表的一项研究中,首次提出了一个已在斑马鱼中经过实验验证的CRISPR/Cas9靶序列数据库。 CRISPR及CRISPR相关蛋白(Cas9),是在古细菌和细菌中发现的一种获得性免疫系统,可防御入侵的病毒、噬菌体和其他外源DNA。Cas9是一种可编程的、RNA引导的核酸内切酶,与CRISPR RNA crRNA和激活的crRNA (tracrRNA)共同起作用,产生一个用于切割的DNA靶位点。该CRISPR/Cas9系统已被研究人员用于多种细胞类型和生物的体内基因组编辑,包括斑马鱼。 双向RNA引导成分被进一步简化为单导向RNA(sgRNA),其序列可指导Cas9到达一个靶位点,并导致双链断裂。然后,当供体DNA存在时,使用容易出错的非同源末端连接修复(NHEJ)或同源指导修复(HDR),修复裂解......阅读全文

解锁电鳗发电之谜,让斑马鱼发电

研究人员证实,他们发现的基因控制区只控制肌肉中钠通道基因的表达,而不控制其他组织。电鱼和电鳗一样,可以根据种类、性别、甚至个体来区分其他电鱼,这要归功于它们的电器官,它还允许它们传输和接收类似于鸟叫声的信息。最近发表在《科学进展》(Science Advances)上的一项研究描述了微小的基因改变是

Nat Commun:斑马鱼研究发现脊椎损伤修复新机制

  最近,研究者们以斑马鱼为研究对象,发现了神经纤维再生的关键分子,这一发现将为神经损伤患者的治疗提供了新的线索。具体地,这一发现将为脊神经损伤后大脑与肌肉之间连接的重建提供帮助。  对于人与其它哺乳动物来说,脊神经的损伤会导致永久性的瘫痪,然而,斑马鱼在脊神经损伤之后的几周之内就能够恢复正常的运动

Micro CT在斑马鱼为模型的骨骼研究上的应用

Micro CT在斑马鱼为模型的骨骼研究上的应用

Dev Cell:转基因斑马鱼的彩色皮肤

  美国杜克大学的研究人员,利用基因工程改造的方法,造成单个的皮肤细胞可以产生70种不同颜色的荧光。该研究发表在最近的《Developmental Cell》上。  该团队并非是为了好玩才做成这样五彩斑斓的斑马鱼,实际上,他们希望通过颜色标记来研究斑马鱼皮肤的愈合。利用颜色来标记细胞,可以让斑马鱼皮

斑马鱼如何长出新的神经元

  研究人员已经发现了使得斑马鱼的大脑能够在其受到创伤性损害之后再生的机制。与哺乳动物不同,这些在淡水中生长的小鲦鱼因为脑部损伤所致的炎症会伴有新神经元的产生。   如今,Nikos Kyritsis及其同事展示,在损伤反应中,斑马鱼脑部的炎症会激活特定的信号传导分子及神经胶质细胞,后者可促进

斑马鱼嗅觉作用主要是左鼻子

斑马鱼嗅觉作用主要是左鼻子   如同人有“左撇子”一样,鱼也有类似“左撇子”的鼻子。   日前,日本名古屋市立大学与国立遗传学研究所的一项新研究发现,斑马鱼发挥嗅觉作用的主要是左鼻子。相关研究论文在线刊登在了近期出版的《自然—神经科学》(Nature Neuroscience)杂志上。  

除了小鼠,斑马鱼也被盯上了 | PNAS

  植有人类肿瘤细胞(红色)的斑马鱼胚胎,这一模型有望帮助医生快速筛选癌症患者最佳的治疗方案(图片来源:Rita Fior团队)  最新一期《PNAS》在线发表了一篇题为“Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinato

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

斑马鱼基因敲除是怎么做的

  一、基因敲除的设计方案   1.1 基因的基本信息   确认斑马鱼基因的基本信息,包括名称ID号等,一般会在NCBI等查询。   1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析   1.3分析蛋白质的保守结构功能域   通过综合考虑,设计最佳的KO靶点。   1.4

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

斑马鱼基因敲除是怎么做的

  一、基因敲除的设计方案   1.1 基因的基本信息   确认斑马鱼基因的基本信息,包括名称ID号等,一般会在NCBI等查询。   1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析   1.3分析蛋白质的保守结构功能域   通过综合考虑,设计最佳的KO靶点。   1.4

斑马鱼基因敲除是怎么做的?

一、基因敲除的设计方案1.1 基因的基本信息确认斑马鱼基因的基本信息,包括名称ID号等,一般会在NCBI等查询。 1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析 1.3分析蛋白质的保守结构功能域通过综合考虑,设计最佳的KO靶点。 1.4 分析并设计CRISPR,分析其效率及脱靶的情况一般使用C

Nat Commun:斑马鱼可用于癫痫药物筛选

  化学药物Clemizole在“Dravet综合症”的一个斑马鱼模型中能有效防止癫痫类发作。在Nature Communications上发表的这一发现确认了一个新方法,后者有可能被用来识别癫痫病的另类疗法。   “Dravet综合症”是一种从婴儿时期开始的严重癫痫,以严重的、自发的和复发的

寄生虫感染或破坏斑马鱼实验

  研究人员表示,一种感染实验室斑马鱼的常见寄生虫可能令多年的行为实验结果产生混淆。不过,批评者认为,这个案例仍有待证实。  和小鼠一样,斑马鱼被用在全球的实验室中,以研究从药物疗效到诸如精神分裂症和自闭症等遗传性疾病和障碍的所有事情。由于斑马鱼和人类都具有高度社会性,因此研究人员认为,和啮齿类动物

斑马鱼胚胎细胞的培养——原代培养

实验方法原理收集胚胎,除去绒毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎细胞,然后在胚胎成纤维细胞饲养层上培养从斑马鱼囊胚和原肠期胚获得的原代细胞。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纤维细胞饲养层人重组白血病抑制因子试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培

斑马鱼胚胎细胞的培养——细胞系

实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2细胞(或等同物)试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培养液D培养液Holtfreter缓冲液实验步骤鳟鱼胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鳟鱼种系

斑马鱼的胚胎原位杂交试验实录

收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗,然后换成甲醇,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧水处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)原位

敲降斑马鱼基因的方法学比较

一、基因敲降的前期准备工作相同1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,进行PCR扩增,确认目标基因

斑马鱼背腹轴形成和Wnt通路调控机制研究获新进展

  经典Wnt信号通路是细胞内的主要信号传导机制之一,在脊椎动物早期胚胎发育和器官形成中起着重要作用,其活性的非正常变化与多种人体疾病密切相关。该通路的激活可促进b-catenin在细胞核内积累,调节多种下游基因的转录表达。然而,对该通路在脊椎动物重要器官发育与形成中作用的研究刚刚起步

新进展:科学家利用斑马鱼研究阿片类药物成瘾

  阿片类药物危机逐渐升高,然而科学家对于成瘾的机制了解仍然不多。为了解决这个需求,犹他大学的研究者设计了一个系统让斑马鱼可以自行摄取一种用于治疗人类疼痛的氢可酮。一个星期以后,斑马鱼就呈现出对药具有依赖性,即使这样对它们来讲非常危险;48小时后,斑马鱼在撤药后表现出焦虑的反应。这项研究发表在《Be

水生所关于斑马鱼基因捕获与插入突变的研究取得突破

  脊椎动物后基因组时代的主要任务是解读基因的功能,而基因捕获和插入突变是揭示基因功能的重要手段。斑马鱼具有易于饲养、繁育周期短、产卵量大、体外受精与发育等优点,已成为发育和遗传学研究的理想模式动物,但尚缺乏胚胎干细胞和基于胚胎干细胞的基因敲除技术。转座子介导的基因捕获和突变研究为大规模筛选斑马鱼突

研究人员在斑马鱼中构建出一种肠道炎症模型

  国际学术期刊Nature Communications(《自然-通讯》)在线发表中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿和舒晓东研究团队关于斑马鱼研究的最新成果“Deficiency in class III PI3-kinase confers postnatal lethality with

通过流式细胞仪研究斑马鱼胚胎中细胞周期分析

[精华提要]结合绿色荧光蛋白表达的细胞周期分析广泛的用于研究绿色荧光蛋白标记的细胞的细胞周期分布。这个方案是一种用绿色荧光蛋白标记的斑马鱼胚胎来分析细胞周期的方法。材料与试剂1.        PBS(Invitrogen公司14040)2.        胎牛血清3.        乙醇4.   

以斑马鱼胚胎为模型 研究胚胎发育早期的自我保护机制

  当生物体遇到药物或化学污染物入侵时,它会应激性地提高自身转化及外排能力,从而尽快将外源物降解或排出体外,从而实现自我保护,这一作用也被称作生物体的外源物抵御作用。由于该作用决定了药物或污染物在体内的停留时间,从而影响了药物药效或化学污染物毒性的发生,因而受到药物学及环境毒理学研究的广泛关注。  

国际首例 他们用光指挥斑马鱼的白细胞

未来,如果你生病了,除了吃药外,还有更多简单高效的治疗方式可选择,比如用光照一照身体就能远程遥控白细胞,从而主动调动身体的免疫能力。这并非科幻。我国科学家已实现了在活体上用光将白细胞变成“医学微机器人”,可自主控制白细胞的激活和运动,这在国际上是第一例。7月13日,暨南大学李宝军教授和郑先创教授研究

淋巴管帮助斑马鱼“培育”早期脑细胞

在大脑发育的胚胎阶段,一些神经元和突触可以正常形成并连接,但另一些不能,导致一些部分和部分被丢弃。这会留下死亡或垂死的细胞,这就需要中枢神经系统雇佣一种清理人员。小胶质细胞接受了这个挑战,“摄取”废物,因此对大脑发育至关重要。然而,科学家们对它们是如何在大脑中繁殖的还缺乏充分的了解。美国圣母大学生物

国际首例 他们用光指挥斑马鱼的白细胞

  未来,如果你生病了,除了吃药外,还有更多简单高效的治疗方式可选择,比如用光照一照身体就能远程遥控白细胞,从而主动调动身体的免疫能力。这并非科幻。我国科学家已实现了在活体上用光将白细胞变成“医学微机器人”,可自主控制白细胞的激活和运动,这在国际上是第一例。7月13日,暨南大学李宝军教授和郑先创教授

从斑马鱼身上竟然获得治疗帕金森的方法

   与哺乳动物相比,成年斑马鱼会使大脑中的神经元再生,但这种能力的程度和变异性尚不清楚。来自Edinburgh大学脑神经科学研究中心的Thomas Becker及其研究团队探寻了各种多巴胺能神经元群体的丧失是否足以触发神经元的功能性再生。 他们的研究结果为未来治疗具有运动异常、震颤等症状的神经系统

《自然》:发现斑马鱼造血干细胞生成机理

为医学界研究白血病疗法提供了新思路   法国科学家日前通过对斑马鱼胚胎进行即时监控,发现了其造血干细胞的生成机理。这一成果为医学界研究白血病疗法提供了新思路。   该研究由法国国家科研中心和巴斯德研究所共同完成。研究人员在最新一期英国《自然》杂志上报告说,他们采用即时成像技术对斑马鱼的胚胎进行了观察

《干细胞》:斑马鱼细胞可修复人视网膜

在最新一期的《干细胞》(Stem Cells)杂志上,来自英国的研究人员发现,斑马鱼眼睛中的一类叫做Muller胶质细胞的特殊细胞对对视网膜的再生至关重要,该细胞还有助于视力的恢复。研究人员预言,这种Muller胶质细胞可能用于恢复人类受损视网膜。 已经知道,视网膜损伤是造成失明的主要原因,引起视