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敲降斑马鱼基因的方法学比较

一、基因敲降的前期准备工作相同 1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。 1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。 1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,进行PCR扩增,确认目标基因在早期有表达。 二、MO法与CRISPRi法的敲降原理不同 2.1 MO是在转录后水平上敲降基因的功能(MO-Spl阻遏原始转录本的剪接,MO-Atg阻遏成熟转录本的翻译)(基因转录后调控) 2.2 CRISPRi 是在转录水平上敲降基因的功能(抑制基因的转录)(基因转录水平的调控)。 敲降工具有效性验证的方法不同 3.1 吗啡啉敲降法(确认有效性)的技术路线 抑制翻译的MO(MO-Atg)和抑制剪接的MO(MO-Spl)二者敲降基因的有效性评价方法不同。抑制剪接......阅读全文

敲降斑马鱼基因的方法学比较

一、基因敲降的前期准备工作相同1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,进行PCR扩增,确认目标基因

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

转基因斑马鱼的构建

实验概要本实验对斑马鱼导入含 EGFP的质粒,观察其在动物体内的表达情况,在斑马鱼体内,绿色荧光蛋白从原肠胚到出苗期均能在荧光显微镜下观察到绿色荧光。主要试剂EGFP、绿色荧光蛋白基因、pEGFP-N2载体、E.coli主要设备试管、试管架、可调式微量加样器、电泳仪、电泳槽、染色缸、42℃恒温水浴箱

斑马鱼基因编辑技术介绍

斑马鱼又叫蓝条鱼,因为其体表有暗蓝色和银色的类似于斑马一样的条纹而命名。斑马鱼属于鲤科鱼类,同属鲤科的还有我们十分熟悉的鲤鱼、鲫鱼等。斑马鱼的体型较小,成鱼体长约4-6厘米,而且成鱼常年产卵且产卵量大,可达300-1000粒,还是体外受精并发育,因此十分适合进行实验室的大规模养殖与筛选。斑马鱼这种原

斑马鱼

一、概述斑马鱼是生长在印度、巴基斯坦淡水河流中的一种硬骨鱼(鲤鱼),成年鱼全身仅长4-5厘米,因全身横向分布着一道一道褐色的斑马线而得名。斑马鱼很容易在实验室饲养,一般3个月就可以达到生殖成熟期,雌鱼每次产卵200枚左右,一生可产卵数千枚,斑马鱼所产之卵经24小时即可胚胎发育成熟,仔鱼期只有1个月。

定向基因编辑改写斑马鱼的DNA

  斑马鱼是基因研究中一种常用的模式生物。现在科学家可以对它们的基因组进行定向的编辑。   据Nature近日报导,在对脊椎动物和人类疾病的研究中,斑马鱼是一种重要的模式生物。它的卵是透明的,在体外孵化,它的繁殖周期很短,生长速度快,这些都意味着,很适合在生物生存的条件下对它的胚胎进行密切研究。而

Dev Cell:转基因斑马鱼的彩色皮肤

  美国杜克大学的研究人员,利用基因工程改造的方法,造成单个的皮肤细胞可以产生70种不同颜色的荧光。该研究发表在最近的《Developmental Cell》上。  该团队并非是为了好玩才做成这样五彩斑斓的斑马鱼,实际上,他们希望通过颜色标记来研究斑马鱼皮肤的愈合。利用颜色来标记细胞,可以让斑马鱼皮

斑马鱼基因敲除是怎么做的

  一、基因敲除的设计方案   1.1 基因的基本信息   确认斑马鱼基因的基本信息,包括名称ID号等,一般会在NCBI等查询。   1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析   1.3分析蛋白质的保守结构功能域   通过综合考虑,设计最佳的KO靶点。   1.4

水生所揭示急性白血病基因MLL对斑马鱼血细胞发生的作用

  急性白血病基因MLL编码一个组蛋白甲基化转移酶,能通过表观遗传机制调控Hox等基因的表达。它与70多种基因发生重排是导致急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性骨髓性白血病(AML)发生的主要原因。由于小鼠mll基因敲除导致早期胚胎死亡,因此对于它在早期胚胎发育中的作用及其分子机制仍很不