电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthopedic Oncology, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China 摘 要 电穿孔技术利用电场造成细胞膜的改变从而将DNA导入细胞内，同时还可用于细胞融合以及动物克隆等。基因电转移的效率通常比化学法提高1-2个数量级，主要与脉冲波形、长度、缓冲液等有关。方波直流电脉冲应用广泛，在有关细胞核移植的多项研究报告中均指出其重要作用。关键词 基因转移，胚胎克隆，电穿孔 过去十年中，关于基因功能的研究取得了丰硕的成果，并因此带动了基因工程、基因治疗以及单克隆抗体技......阅读全文
转基因技术的农业应用
转基因生物技术可以加快农作物的生长速度、增强抗病性、增加产量、增强对环境的适应能力、增强抵抗除草剂和杀虫剂的能力。全世界进入田间试验的转基因植物已超过500种，但国内转基因食品的范围还比较小。①将抗除草剂基因转入到栽种的作物里面，能有效地防治田间杂草，保护作物免除药害。从植物和微生物中已克隆出多种不
什么是细胞电穿孔？
电穿孔（Electroporation）也叫电转染，是通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和有效的替代方法。电穿孔是功能强大
电穿孔转染－DNA－实验
电穿孔可以有效地转染磷酸钙-DNA 沉淀物等其他方法转染效果不好的细胞系。但是，与其他转染方法一样，未使用过的细胞系进行电穿孔转染的实验条件要经过优化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒Giem
活体电穿孔法介绍
1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒 Giemsa 染液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠载体 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿基因脉冲器 II电穿孔设备与电转化池Sorvall H1000B 转子或类似设备实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需
电穿孔法稳定转染
方案27.12 脂质体介导的瞬时转染 实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA
电穿孔法稳定转染
实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA 仪器、耗材 培养瓶 培养板
活体电穿孔法介绍
1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液 试剂、试剂盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸盐缓冲液
电穿孔技术物理机制
脂双层力学电穿孔允许细胞引入高度带电荷的分子，例如不会被动地扩散穿过疏水性双层核心的DNA。这一现象表明，该机制是在膜上形成纳米级的充水空穴。虽然电穿孔和介电击穿这两者都是由电场的应用引起的，所涉及的机制是根本不同的。在电介质击穿中，阻挡材料被电离，产生导电通路。材料的变化因此是化学性质的。相比之下
活体电穿孔法介绍
1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法（in vivo electroporation）是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115
电穿孔法稳定转染
实验材料L8057-Y10细胞D-PBSA仪器、耗材培养瓶培养板F12 FB培养基G418(Invitrogen)选择性培养基电穿孔电穿孔专用杯电穿孔仪II电穿孔仪-II配套的效能扩增器-Plus实验步骤表达载体与 DNA 制备：pSVTKGH，线性化 [ Selden et al.，1986]此载
电穿孔的技术简介
电穿孔或电渗透是微生物学技术，其中将电场施加到细胞以增加细胞膜的渗透性，从而允许化学品，药物或DNA被引入细胞。在微生物学中，电穿孔过程通常用于通过引入新的编码DNA来转化细菌，酵母或植物原生质体。如果细菌和质粒混合在一起后，质粒可以在电穿孔后转移到细菌中，尽管取决于正在转移的细胞穿透肽或CellS
电穿孔的技术特点
电穿孔（Electroporation）也叫电转染，是通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和有效的替代方法。电穿孔是功能强大
概述活体电穿孔法在不同组织上的应用
肌肉组织 在肌肉组织中最初进行外源基因活体导入是采用电穿孔法。选择肌肉组织作为靶组织是因为肌肉组织在体内所占比例很大,约占40 % ,而且外源基因可在肌肉中长期表达、分泌,在基因治疗中经常会用到。此外,外源基因也不会因肌细胞的分裂而丢失。 皮肤 皮肤组织相对于其他组织较难进行电穿孔法的基因
电穿孔转染真核细胞实验——电穿孔转染哺乳动物细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材电穿孔仪器电击池实验步骤1. 在完全
转基因技术的特点和应用
转基因技术被称为“人类历史上应用最为迅速的重大技术之一”。操作和转移的一般是经过明确定义的基因,功能清楚,后代表现可准确预期。自然界中同样广泛存在自发的转基因现象,譬如植物界的异花授粉、天然杂交以及农杆菌天然转基因系统等等。 转基因技术应用在社会各个领域 中,较为常见的包括了利用转基因技术改良农作物
显微注射法应用转基因方式
最常用来生产转基因动物的方式为：直接把重组过的 DNA 注入受精卵的原核(pronuleus) 中，也就是将从胚胎提供者的输卵管中取得的受精卵移到倒置显微镜上的微量注射台上，然后利用固定吸量管 (holdingpipette) 固定住，之后注射针则依序穿过 zona pellucida，ocyte
转基因技术应用领域介绍
转基因技术应用在社会各个领域 中，较为常见的包括了利用转基因技术改良农作物、生产疫苗、食品等。含有转基因作物成分的食品被称之为转基因食品，其与非转基因食品具有同样的安全性。各国对转基因生物的管理因为国家不同而异。世界卫生组织以及联合国粮农组织认为：凡是通过安全评价上市的转基因食品，与传统食品一样安全
转基因技术的具体技术应用
转基因技术已广泛应用于医药、工业、农业、环保等领域。医学医学中转基因技术的应用范围很广。动物转基因技术可以创造诊断和治疗人类疾病的动物模型，可克服单纯依靠自然突变体的局限。转基因技术还应用于蛋白质多肽药物的生产，如生产胰岛素、干扰素、免疫球蛋白、促红细胞生成素、尿激酶、人血红蛋白、人表皮生长因子、粒
活体电穿孔法介绍3
肝 脏由于肝脏的生理代谢十分旺盛，因此外源基因在肝脏中的表达时间往往很短暂，而且表达产物的水平也较低。为减少出血，可从小静脉注入，然后在肝脏上施加电场，能显著增强基因的表达。睾 丸相对于其他的转基因方法，活体电穿孔法可使外源基因在睾丸中产生大量和持久的表达。此外，很多研究人员希望利用活体电穿孔法将外
CRISPR重要成果:电穿孔技术
简单的电穿孔似乎使T细胞更容易接受新的遗传物质，这可以加速免疫疗法的发展。 加州大学旧金山分校的研究人员发表了题为“Reprogramming human T cell function and specificity with non-viral genome targeting”的文章，指
活体电穿孔法介绍1
1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～1
活体电穿孔法介绍（一）
1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～1
细胞转染电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率
电穿孔和电融合技术
实验概要了解细胞电穿孔(electroporation)和电融合(Electrofusion Method)的基本原理。学习电穿孔和电融合基本技术。实验原理当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、 RN
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
电穿孔转染真核细胞实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材 电穿孔仪器电击池实验步骤 1. 在完全培养液中培养特转染细胞至对数生长晚期，4℃ 640 g 离心5 min，收集细胞。 2. 将细胞沉淀用其半量体积的预冷电穿孔缓冲液重悬洗涤，4℃ 640 g 离心5 min。3. 对于稳
电穿孔技术的方法步骤
除了能使细胞膜具有通透性，让外界的分子扩散入胞液中以外，高强度的电场脉冲也能引起细胞融合，这一现象叫做电融合。然而，在用电脉冲融合前必须使细胞相互紧密接触，这一电融合方法在原生质融合制取杂交植物，胚胎细胞相互融合制备动物克隆方面非常有用，尤其在制取杂交瘤细胞制备单克隆抗体方面用处很大。几个实验室已证
电穿孔转染真核细胞实验
电穿孔转染哺乳动物细胞 植物原生质体细胞 实验材料 哺乳动物细胞