单细胞研究指南:细胞分离

多细胞生物的每个细胞都携带着相同的遗传学信息。不过,近年来蓬勃发展的单细胞研究告诉我们,每一个细胞都是独一无二的。不同类型的细胞激活特定组合的机制,即使是同类型细胞,基因表达也会出现差异。 那么,细胞之间的哪些差异有生物学意义,哪些差异来自于技术偏好呢?要获得可靠的结果又需要研究多少细胞呢?这些问题曾经是单细胞研究(尤其是单细胞转录组研究)的拦路虎,令人望而却步。单细胞RNA测序(scRNA-seq)和单细胞数据分析工具在这方面为人们提供了很大的帮助。 The Scientist杂志最近联系了单细胞研究领域的一些专家,请他们分享了在单细胞中进行转录研究的秘诀。希望帮助研究者们更好地构建文库,处理和分析结果数据。 细胞分离 分离细胞是单细胞研究中最困难的步骤之一。目前的单细胞分离策略主要分为三类:手动分离、荧光激活的细胞分选和微流体技术。 在进行单细胞转录分析之前,我们需要确定自己拿到了正确的细胞。如果你想要的细胞已......阅读全文

单细胞分离与孔板成像组合的高效细胞株开发流程

  高剪切乳化机是一种能将物料充分细化均匀的机器,其名称来源应该是能促使油性物质(油相)与水性物质(水相)相混并形成均匀的乳化液的机器。而细化均匀的机器又有多种,如球磨机、砂(珠)磨机、粉碎机、胶体磨、分散机、高压均质机等,这些能细化物料的机器适用范围、细化均质能力各不相同。而高剪切乳化机具备了细化

单细胞分离与孔板成像组合的高效细胞株开发流程

 细胞株开发的典型工作流程当前细胞株开发的工作流程有一些局限,如低细胞活率、低效的单细胞分离以及有限的单克隆性证据。有限稀释,一种传统分离单细胞的方法,依赖于统计概率,无法提供单克隆性的可视化证据。此外,该技术的效率非常低,最终导致每块微孔板上可供筛选的克隆非常少。 CloneSelectTM高通量

单细胞分离仪应用介绍单克隆筛选和高产细胞株挑选

单克隆抗体技术的产生至今,技术已经相对成熟。单克隆抗体具有靶向性强、特异性高和毒副作用低等特点,目前已经成功用于治疗免疫、癌症等多种疾病领域。治疗性单抗药物已经成为目前生物技术药物中品种最多,销售额最大的类型。全球在售单抗药物在生物药中的占比超过30%,在研单抗药物在生物药中的占比逾70%。与国际水

微流体可帮助早产儿呼吸

  呼吸窘迫综合征是新生儿死亡的第二大原因。医疗工作者尤其会尽力向早产儿(约占美国所有新生儿的1/10)输送氧气,因为肺是最后在子宫中完全发育的器官之一。一项新的微流体创新带来了改善人造胎盘从而使早产儿能在出生后适当发育肺的希望。图片来源于网络  一个国际团队展示了一种构建微通道的最新技术。该通道可

微流体芯片商Fluidigm正式进入中国

  Fluidigm Corporation已开始向中国客户提供直接服务。Fluidigm于2012年1月下旬在中国建立了全资Fluidigm子公司,官方名称为富鲁达(上海)仪器科技有限公司(Fluidigm(Shanghai)InstrumentTechnologyCo.,Ltd.

微流体平台造福药物工作者

  新药的上市,真的经历了九九八十一难,从使用体内模型进行的临床前研究,再经过漫长的三期临床试验,药物开发的成本成倍增加。除了增加经济负担外,在三期临床试验阶段,由于体外实验的不可预测性,导致药物吸收、排泄等问题,因此淘汰了许多具有潜在疗效的化合物,实在是可惜。为了提高临床前体外试验的可预测性,目前

微流体芯片商Fluidigm正式进入中国

  Fluidigm Corporation已开始向中国客户提供直接服务。Fluidigm于2012年1月下旬在中国建立了全资Fluidigm子公司,官方名称为富鲁达(上海)仪器科技有限公司(Fluidigm(Shanghai)InstrumentTechnologyCo.,Ltd.),通过该子

微流体操控之序列进样

在细胞灌流式培养应用中,需要将多种试剂连续不断的输送至细胞培养腔或反应器中,其中涉及到的多种试剂的连续进样被称为序列进样。序列进样操作繁琐,手动操作时会存在巨大的时间与成本(尤其在使用珍贵试剂时)问题,所以科研人员更加倾向于选择一种全自动或人工参与极少的系统来辅助完成序列进样。通常,可使用以下两种方

微流体操控之循环进样

在细胞培养或器官培养中了在微流控芯片内模拟生物体内环境,除了温度、湿度和酸碱度等条件之外,还需要模拟生物体内如血液循环之类的流体流动,尽可能的为细胞提供与在生物体内一致的培养环境,同时,在流体循环过程中,也方便收集细胞产物。此外,在做一些微流体的过滤实验时,也需要进行流体循环,如使用全血过滤膜滤除全

如何避免微流体实验中的气泡

在微流体实验中,气泡的产生会带来诸多问题:气泡是动态的,会随着压力和温度的变化发生膨胀或收缩,因此会吸收压力变化,降低系统的响应时间,同时也会改变流阻,导致流量不稳定,此外,在细胞培养中,气泡会导致细胞死亡。本文内容分为以下3个部分:1.气泡是如何产生的?2.如何避免气泡的产生?3.如果气泡不可避免

开发新型微滴反应筛选技术并开展单细胞分析应用

  中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室杜文斌研究组和黄力研究组共同开发了一种新型的微流控界面纳升注射技术(Interfacial Nanoinjection, INJ),该技术可以将传统的生化反应体系微缩在一个纳升体积的油包水微液滴体系中完成。针对这一技术创新,团队申请了多项中国

Fluidigm公司微液流芯片在单细胞研究中的应用(三)

The next playersBeyond cell imaging and gene expression, other applications of single stem cell analysis are hardly thick on the ground. No one ca

新型微流控芯片可提高单细胞转录组测序效率

近日,中国科学院深圳先进技术研究院医工所微纳系统与仿生医学研究中心研究员陈艳和南加州大学教授钟江帆合作,在针对稀有细胞样本的单细胞测序技术方面取得新进展。相关研究成果以Improving single-cell tranome sequencing efficiency with a microfl

Fluidigm公司微液流芯片在单细胞研究中的应用(二)

It was also worth it for Tannishtha Reya, who studies stem cell fate and cancer at Duke University Medical Center in Durham, North Carolina. "Im

Fluidigm公司微液流芯片在单细胞研究中的应用(一)

Nature杂志在2009年5月7日的主页文章中大篇幅地介绍了美国Fluidigm公司的微液流芯片在单细胞表达中的应用。A closer look at the single cellMegan ScudellariNature Reports Stem CellsPublished online:

Analyst:新型微流控芯片可实现100%单细胞捕获率!

  近日,中国科学院深圳先进技术研究院医工所微纳系统与仿生医学研究中心研究员陈艳和南加州大学教授钟江帆合作,在针对稀有细胞样本的单细胞测序技术方面取得新进展。相关研究成果以Improving single-cell transcriptome sequencing efficiency with a

超临界流体萃取分离技术及其应用

超临界流体具有独特的物理性质,是一种环境友好的绿色溶剂;超临界萃取技术是一种新型、清洁、高效的绿色分离方法、绿色工艺.文章从超临界流体的基本特性、临界流体萃取技术的基本原理与特点、超临界流体的主要类型、超临界流体该技术在中医药、天然产物中的应用等方面进行了概述了,并对超临界萃取技术的应用前景进行了展

超临界流体萃取分离法简介

超临界流体萃取(SFE),也称气体萃取(gas extraction)、稠密气体萃取(dense gas extraction)或蒸馏萃取(distillation)。由于萃取中的一个重要因素是压力,有效的溶剂萃取过程也可以在非临界状态下实现,因此广义上也称为压力流体萃取(pressure

超临界流体色谱有哪些分离方法?

    一般在实际使用超临界流体色谱时,根据物质性质以及操作条件的不同,超临界流体色谱具有不同的分离方法。一般利用超临界流体色谱分离药物时,会分为直接分离法以及间接分离法。以下根据网上查询资料,对超临界流体色谱分离方法进行整合:   1.直接分离法:超临界流体色谱分离方法中的直接分离法可分为手性流动

超临界流体萃取分离技术及其应用

超临界流体具有独特的物理性质,是一种环境友好的绿色溶剂;超临界萃取技术是一种新型、清洁、高效的绿色分离方法、绿色工艺.文章从超临界流体的基本特性、临界流体萃取技术的基本原理与特点、超临界流体的主要类型、超临界流体该技术在中医药、天然产物中的应用等方面进行了概述了,并对超临界萃取技术的应用前景进行了展

微流控芯片单细胞克隆形成抑制乳腺癌干细胞药物筛选

大量研究结果提示,肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤发生、发展、转移的决定因素,也是导致治疗失败的主要原因。传统肿瘤治疗手段如放疗和化疗,并不能彻底清除肿瘤干细胞而且会对正常组织造成损害。鉴于上述事实,针对肿瘤干细胞的靶向清除方法已成为近期肿瘤治疗的一种新策略。肿瘤干细

单细胞分离和鉴定系统在清华大学投入使用

  2014年2月,由美国FLUDIGM公司生产的C1™ 单细胞全自动制备系统和BioMark™ HD基因分析系统正式在清华大学基因组与合成生物学平台启用。   C1™ 单细胞全自动制备系统基于Fluidigm创新的微流体技术,能够让研究者们快速可靠地分离单个细胞并进行基因组分析。前所未有

新一代Namocell单细胞分离技术的基本工作原理

技术简介:该技术采用的是集流式细胞术和微流控技术于一体的新一代细胞分离技术。流式细胞仪的流体聚焦技术能够极大地提高检测灵敏度,另外微流控技术使得设备内部的鞘液压力可以降至2psi以下,也无需高频振荡,极大地减少了分选过程对细胞的伤害,大大提高了分选出来的细胞的活性。另外,一次性芯片真正第一次实现了细

单细胞技术分类及应用(一)

2019年10月22日,Biogen与日本Eisai宣布,经与FDA协商,计划于2020年初向FDA提交Aducanumab治疗阿尔兹海默症(AD)的上市申请。如果获批,Aducanumab将成为首个逆转疾病进展的AD药物。从技术角度看,Aducanumab也将有可能成为首个单B细胞测序来源的抗体药

微流控芯片流体的控制与驱动

驱动:通过外力的作用驱动微流控芯片内的液体。控制:控制流体的速度、方向开启关闭流动及混合液的流动。简单来说,微流控芯片的主要形态特征是各种构型的微通道网络、微阀、微泵的集合体。一般地,在微流控系统中,主要是通过泵实现流体的驱动,它起着传输液流和分配液流的作用,掌控着整个过程的成败,是实现微流体控制的

如何选择合适的微流体驱动泵(一)

微流控系统中,流体驱动泵作为流体的动力源,显得至关重要。针对不同的应用,该如何进行驱动泵的选择,既能满足应用需求,又能拥有较高的性价比?针对此问题,我们制作了两期推文,以作参考。第一期(本期)介绍主流流体驱动泵及其工作原理,第二期结合应用实例,对比各种流体驱动泵的优缺点,并给出如何选择驱动泵的建议。

如何测量微流体仪器的稳定性

  微流体实验中,可通过稳定区间(Stability band)、标准差(Standard deviation)和变异系数(Coefficient of variation, CV)三个参数来量化微流体仪器的稳定性。   1.稳定区间(Stability band)   稳定区间指的是所采集到的

Cell:首次在单细胞水平描绘肝癌微环境中的免疫图谱

  2017年6月16日,北京大学生命科学学院BIOPIC中心、北京未来基因诊断高精尖创新中心、北大-清华生命科学联合中心张泽民研究组,首都医科大学附属北京世纪坛医院暨北京大学第九临床医学院肝胆胰外科彭吉润研究组,以及美国AMGEN公司的欧阳文军研究组在Cell杂志发表了题为“Landscape o

单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤

单细胞凝胶电泳(single-cell gel eiectrophoresis,SCGE)又称慧星试验(comet assay)是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来,经过不断的改进,已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法,广泛地应用