武汉病毒所等创建细胞内蛋白三聚体超分辨成像技术

蛋白质常常以复合体形式发挥功能。例如,包括G蛋白在内的许多信号转导蛋白以异三聚体形式行使功能。在细胞内原位监测多蛋白复合体,对其功能解析极为重要,但一直存在方法学挑战。而且,由于受到普通光学显微成像分辨率限制,蛋白复合体内亚基相互作用的精细成像研究难以实现。近期,中国科学院武汉病毒研究所崔宗强课题组与中国科学院生物物理研究所张先恩课题组合作,创建了细胞内蛋白三聚体超分辨成像技术——三片段荧光互补-光激活定位显微技术(TFFC-PALM),并在单分子和细胞亚衍射空间水平解析了G蛋白αβγ异源三聚体亚基在信号转导中的动态解离过程。 该团队利用具有光激活和光转换特性的mIrisFP荧光蛋白,首先筛选合适的拆分位点构建mIrisFP双分子荧光互补系统(BiFC),进而又把mIrisFP拆分为三个片段,成功构建了三片段荧光互补系统(TFFC)。BiFC和TFFC结合光激活定位成像技术,实现了蛋白-蛋白以及蛋白三聚体亚基间相互作用的超......阅读全文

异三聚体G蛋白的定义

中文名称异三聚体G蛋白英文名称heterotrimeric Gprotein定  义由α,β和γ三个亚单位构成的蛋白质复合物。锚定在质膜内侧,其α亚单位能与GTP结合,具有GTP酶活性,能使受体和腺苷酸环化酶等靶效应器偶联起来,使胞外信号穿膜转换为胞内信号。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞通信与

异三聚体G蛋白的的概念

中文名称异三聚体G蛋白英文名称heterotrimeric Gprotein定  义由α,β和γ三个亚单位构成的蛋白质复合物。锚定在质膜内侧,其α亚单位能与GTP结合,具有GTP酶活性,能使受体和腺苷酸环化酶等靶效应器偶联起来,使胞外信号穿膜转换为胞内信号。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞通信与

武汉病毒所等创建细胞内蛋白三聚体超分辨成像技术

  蛋白质常常以复合体形式发挥功能。例如,包括G蛋白在内的许多信号转导蛋白以异三聚体形式行使功能。在细胞内原位监测多蛋白复合体,对其功能解析极为重要,但一直存在方法学挑战。而且,由于受到普通光学显微成像分辨率限制,蛋白复合体内亚基相互作用的精细成像研究难以实现。近期,中国科学院武汉病毒研究所崔宗强课

荧光素酶互补(Luc)实验

【导入】基于荧光素酶(Luciferase)的发光原理,形成了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海参荧光素酶(Renilla luciferase)。两者可与各自的底物发生氧化作用产生生物荧光,产生的荧光值即表示两种酶的表达量多少。图片来源

为什么荧光素酶互补实验结果阴性也有

三大类的非编码RNA(ncRNA),miRNA/lncRNA/circRNA仍然是医学基础研究领域最为火热的研究热点,大部分的研究人员在立项之初,通过查阅文献或二代测序+生物信息学分析,获得了合适的研究对象,但在实验推进的过程中却遇到了重重困难。主要有以下几个原因:1. 找错了转录本;2. ncRN

碱基互补配对原则的碱基互补的介绍

  在脱氧核糖核酸分子中,含氮碱基为腺嘌呤(A),鸟嘌呤(G),胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。每一种碱基与一个糖和一个磷酸结合形成一种核苷酸。在其双链螺旋结构中,磷酸-糖-磷酸-糖的序列,构成了多苷酸主链。在主链内侧连结着碱基,但一条链上的碱基必须与另一条链上的碱基以相对应的方式存在,即腺嘌呤对应胸

基因互补实验

实验方法原理 互补作用可以用来确定两个突变是属于同一基因还是属于不同的基因。如果是同一基因内两个不同位点的突变,它们就不能互补;如果是不同基因的突变则是互补的,此为基因间互补。有时同一基因内的两个突变位点也能发生基因内互补,但基因内互补所恢复的酶活性一般最多只有野生型酶活性的25%,而基因间互补则为

基因互补实验

实验方法原理互补作用可以用来确定两个突变是属于同一基因还是属于不同的基因。如果是同一基因内两个不同位点的突变,它们就不能互补;如果是不同基因的突变则是互补的,此为基因间互补。有时同一基因内的两个突变位点也能发生基因内互补,但基因内互补所恢复的酶活性一般最多只有野生型酶活性的25%,而基因间互补则为1

碱基互补原则规律

根据碱基互补配对的原则,一条链上的A一定等于互补链上的T;一条链上的G一定等于互补链上的C,反之如此。因此,可推知多条用于碱基计算的规律。规律一:在一个双链DNA分子中,A=T、G=C。即:A+G=T+C或A+C=T+G。也就是说,嘌呤碱基总数等于嘧啶碱基总数,各占全部碱基总数的50%。规律二:在双

什么是碱基互补?

在脱氧核糖核酸分子中,含氮碱基为腺嘌呤(A),鸟嘌呤(G),胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。每一种碱基与一个糖和一个磷酸结合形成一种核苷酸。在其双链螺旋结构中,磷酸-糖-磷酸-糖的序列,构成了多苷酸主链。在主链内侧连结着碱基,但一条链上的碱基必须与另一条链上的碱基以相对应的方式存在,即腺嘌呤对应胸腺嘧

互补RNA的定义

中文名称互补RNA英文名称complementary RNA定  义能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

互补RNA的功能

中文名称互补RNA英文名称complementary RNA定  义能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

什么是互补碱基?

  互补碱基,碱基间的一一对应的关系叫做碱基互补配对原则就是Adenine(A,腺嘌呤)一定与Thymine(T,胸腺嘧啶)配对,Guanine(G,鸟嘌呤)一定与Cytosine(C,胞嘧啶)配对,反之亦然。  碱基指嘌呤和嘧啶的衍生物,是核酸、核苷、核苷酸的成分。DNA和RNA的主要碱基略有不同

互补DNA的定义

cDNA是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。

互补序列的定义

中文名称互补序列英文名称complementary sequence定  义在双链核酸中,一条多核苷酸链可与另一条多核苷酸链互补的那部分序列。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

互补DNA的概念

cDNA是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列 。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。

酵母功能互补实验

实验概要本实验将在构建了大蒜重金属抗性基因表达载体并转入大肠杆菌DH5α的基础上,选择鉴定准确的质粒转化酵母细胞,对转化子进行了PCR鉴定和RT-PCR分析,及重金属抗性实验。主要试剂YPD培养基,醋酸锂,PEG(50%),乙醇,少量酵母菌总RNA快速抽提试剂盒主要设备摇床,离心机,水浴锅,PCR仪

互补链的概念

按照核酸中碱基互补的原则,两条核苷酸单链在一定条件下能相互作用,形成双链核苷酸链,它们彼此之间称为互补链。

互补碱基的原则

互补碱基,碱基间的一一对应的关系叫做碱基互补配对原则就是Adenine(A,腺嘌呤)一定与Thymine(T,胸腺嘧啶)配对,Guanine(G,鸟嘌呤)一定与Cytosine(C,胞嘧啶)配对,反之亦然。

α互补筛选的原理

载体带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞.因此

顺反子内互补测验

用噬菌体的不同突变型成对组合同时感染宿主。如双重感染的宿主中产生两种亲代基因型的子代噬菌体,则一个突变补偿了另一个,二者互补。若不产生子代噬菌体,则两种突变有一个相同功能受损。判断两突变是否发生在一个基因座内的测验,称为互补测验又称顺反测验(cis-transtest)。测验时,如果顺式和反式都为野

互补测验的概念

即互补测验指通过测验可确定两个表型效应相似的突变位点是否位于同一个顺反子或基因内。

互补-DNA的定义

中文名称互补 DNA英文名称complementary DNA;cDNA定  义利用反转录酶以mRNA为模板合成的DNA。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)

三聚体GTP结合调节蛋白概述

三聚体GTP结合调节蛋白(trimericGTP-bindingregulatoryprotein)简称G蛋白,位于质膜胞质侧,由α、β、γ三个亚基组成,α和γ亚基通过共价结合的脂肪酸链尾结合在膜上,G蛋白在信号转导过程中起着分子开关的作用(图8-12),当α亚基与GDP结合时处于关闭状态,与GTP

互补DNA的合成步骤

1.cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3]  。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒

细胞化学基础互补碱基

互补碱基,碱基间的一一对应的关系叫做碱基互补配对原则就是Adenine(A,腺嘌呤)一定与Thymine(T,胸腺嘧啶)配对,Guanine(G,鸟嘌呤)一定与Cytosine(C,胞嘧啶)配对,反之亦然。碱基指嘌呤和嘧啶的衍生物,是核酸、核苷、核苷酸的成分。DNA和RNA的主要碱基略有不同,其重要

互补DNA的合成步骤

1.cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3]  。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒

细胞化学基础互补-DNA

中文名称:互补 DNA英文名称:complementary DNA;cDNA定  义:利用反转录酶以mRNA为模板合成的DNA。应用学科:细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)

关于互补DNA的简介

  cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成,并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DN

细胞化学词汇互补RNA

中文名称:互补RNA英文名称:complementary RNA定  义:能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)