上海应物所发展出基于酸碱调控的室温PCR新方法
近日，中国科学院上海应用物理研究所与清华大学合作，发展了一种新型的离子介导聚合酶链式反应（Ion-Mediated Polymerase Chain Reaction, IM-PCR），通过精确调控溶液pH值（即质子和氢氧根离子），可以在室温下完成PCR扩增，相关结果发表于《德国应用化学》（Angew. Chem. Int. Ed.）杂志，并申请了美国和国际ZL。 PCR是体外通过酶反应合成、高灵敏扩增目标基因片段的一种方法，是最常用的分子生物学技术之一。常规PCR是通过控制溶液温度来实现DNA分子的可逆变复性，从而达到复制扩增的目的。而这种升降温过程通常需要复杂的控温装置并消耗大量能源。从理论上来说，DNA变复性还可以通过酸碱变性来实现，然而如何在不改变溶液体积的情况下精确控制溶液pH值则是一个难题。上海应物所物理生物学研究室樊春海课题组与清华大学化学系刘冬生课题组合作，建立了一种基于微流控的电化学芯片，可以通过电压驱动......阅读全文
免疫PCR(IMPCR)注意事项
免疫PCR(IM-PCR)注意事项 (1)固相载体的选择：主要取决于抗原在固相载体上的吸附程度。如果抗原吸附良好，可以进行IM-PCR。如果抗原吸附不良，则需选用双抗体夹心IM―PCR。另外选用的固相载体要和PCR仪器相匹配。一般用0.5ml的塑料反应管，也可以用微量滴定板。 (2)
上海应物所发展出基于酸碱调控的室温PCR新方法
近日，中国科学院上海应用物理研究所与清华大学合作，发展了一种新型的离子介导聚合酶链式反应（Ion-Mediated Polymerase Chain Reaction, IM-PCR），通过精确调控溶液pH值（即质子和氢氧根离子），可以在室温下完成PCR扩增，相关结果发表于《德国应用化学》（An
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法2
4DNA和PCR系统 免疫PCR中的DNA是一指示分子，用DNA聚合酶将结合于固相上的DNA特异放大，由此定量检测抗原。免疫PCR的敏感性高于ELISA主要是应用了PCR强大的扩增能力。免疫PCR中的DNA分子可以选择任何DNA，但要保证DNA的纯度，且有较好的均质性，尽可能不选用受检样品
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法4
3 PCR产物的检测与定量技术 1）凝胶检测系统 用凝胶扫描仪或计算机辅助视频设备对溴化乙锭染色的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶进行定量，放射性标记的扩增产物可通过放射自显影定量测定，最近用自动DNA 测序仪检测荧光标记的核酸，这种方法可准确测量扩增产物的大小，而且其检测灵敏度达fg水平，
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法3
3)抗原抗体反应:用释释液1:8000稀释单克隆抗BSA抗体，每孔加50μl，室温(～22℃)下45min，洗板孔15次×10min，去除未结合的抗体分子。4)链亲合一蛋白A结合反应:每孔加入50μl用稀释液稀释的已与生物素-pUC19结合的链亲合素-蛋白A嵌合体，室温(～22℃)50min，使得嵌
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法1
一、定义；免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法，用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高，常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方
免疫PCR的基本原理
免疫PCR的基本原理1.定义 免疫PCR（immuno polymerase chain reaction,IM-PCR）是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来，利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的
免疫PCR
免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针，用此探针与待测抗原反应，PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子，电泳定性，根据特异性PCR产物的有无，来判断待测