免疫PCR[ImPCR,ImmunoPCR]基本原理、试验程序和操作方法1
一、定义；免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法，用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高，常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方法，用PCR扩增代替ELISA的酶催化底物显色。PCR具有很强的放大能力，其可以定量地检测 DNA和RNA，具有非常高的敏感性和特异性，因此，将与抗原结合的特异抗体通过连接分子与DNA结合，再经PCR扩增，由此定量检测抗原使敏感性高于 ELISA和RIA。 二、基本原理： 免疫PCR主要由两个部分组成，第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验(ELISA)的测定过程;第二部分即通常的PCR检测，抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中，首先用待测抗原(如牛血清白蛋白(ESA))包被微滴板孔，......阅读全文
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法1
一、定义；免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法，用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高，常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法2
4DNA和PCR系统 免疫PCR中的DNA是一指示分子，用DNA聚合酶将结合于固相上的DNA特异放大，由此定量检测抗原。免疫PCR的敏感性高于ELISA主要是应用了PCR强大的扩增能力。免疫PCR中的DNA分子可以选择任何DNA，但要保证DNA的纯度，且有较好的均质性，尽可能不选用受检样品
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法4
3 PCR产物的检测与定量技术 1）凝胶检测系统 用凝胶扫描仪或计算机辅助视频设备对溴化乙锭染色的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶进行定量，放射性标记的扩增产物可通过放射自显影定量测定，最近用自动DNA 测序仪检测荧光标记的核酸，这种方法可准确测量扩增产物的大小，而且其检测灵敏度达fg水平，
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法3
3)抗原抗体反应:用释释液1:8000稀释单克隆抗BSA抗体，每孔加50μl，室温(～22℃)下45min，洗板孔15次×10min，去除未结合的抗体分子。4)链亲合一蛋白A结合反应:每孔加入50μl用稀释液稀释的已与生物素-pUC19结合的链亲合素-蛋白A嵌合体，室温(～22℃)50min，使得嵌
免疫PCR(ImmunoPCR)概念和基础
（一） 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上，再用PCR方法将这段DNA扩增，然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度，能检出浓度低至2ｎｇ
免疫PCR技术（ImmunoPCR）
免疫PCR技术（Immuno-PCR） 免疫PCR方法（Immuno-PCR）是Takeshi等1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术，具有抗原、抗体反应的特异性和PCR技术的高效性。它运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性，使实验中只需数百个抗原分子即可检测，甚
免疫PCR(ImmunoPCR)概念、组成和免疫PCR产物的检测
（一） 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上，再用PCR方法将这段DNA扩增，然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度，能检出浓度低至2ｎｇ
什么是免疫PCR(immunoPCR)？
1.定义：免疫-PCR(immuno-PCR)它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原，尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应，②与嵌合连接分子结合，③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。 2
什么是免疫PCR(immunoPCR)？
1.定义：免疫-PCR(immuno-PCR)它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原，尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应，②与嵌合连接分子结合，③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。 2
免疫PCR(IMPCR)注意事项
免疫PCR(IM-PCR)注意事项 (1)固相载体的选择：主要取决于抗原在固相载体上的吸附程度。如果抗原吸附良好，可以进行IM-PCR。如果抗原吸附不良，则需选用双抗体夹心IM―PCR。另外选用的固相载体要和PCR仪器相匹配。一般用0.5ml的塑料反应管，也可以用微量滴定板。 (2)
PCR技术导论、实验条件和试验程序(1)
1 导论多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是美国 Perkin-Elmer/Cetus公司人类遗传研究室Mullis K. B.等人于1985年发明的一种快速体外DNA片段扩增技术，是八十年代分子生物学资源领域的一项革命性突破，被誉为分子生物学资源
免疫PCR(immunoPCR)技术的定义及特点介绍
1.定义：免疫-PCR(immuno-PCR) 它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原，尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应，②与嵌合连接分子结合，③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。
PCR技术导论、实验条件和试验程序(2)
2.2.2.3 操作程序1．在无菌的Eppendorf管内加入以下反应物：2．93℃ 反应2 min后开始以下循环： 93℃变性反应1 min； 50℃退火反应1 min； 72℃延伸反应3 min。 经过17～35循环后，最后一个循环72℃增加5 min。循环结束后反应产物置于40
免疫PCR的基本原理
免疫PCR的基本原理1.定义 免疫PCR（immuno polymerase chain reaction,IM-PCR）是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来，利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的
PCR反应程序
1．常规程序将 PCR 反应所需的成分配置完后，在 PCR 仪上于 94-96℃ 预加热几十秒至几分钟，使模板 DNA 充分变性，然后进入扩增循环。在每一个循环中，先于 94℃ 保持 30 秒钟使模板变性，然后将温度降到复性温度（一般 50-60℃ 之间），一般保持 30 秒钟，使引物与模板
PCR反应程序
1．常规程序将PCR反应所需的成分配置完后，在PCR仪上于94-96℃预加热几十秒至几分钟，使模板DNA充分变性，然后进入扩增循环。在每一个循环中，先于94℃保持30秒钟使模板变性，然后将温度降到复性温度（一般50-60℃之间），一般保持30秒钟，使引物与模板充分退火；在72℃保持1分钟（扩增1kb
定量PCR技术基本原理和方法以及PCR产物的检测与定量1
聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是微量核酸扩增的有效工具，由于其灵敏、特异、快速等优点，在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展，特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面，不仅需要检测其存在
引物TM值和PCR程序问题
tm值和引物中的GC含量有关 只要相差不是太大就行 设定时取平均值就可以；你可以根据引物的长度和GC的百分比来确定一下哪个更准确。不知道你用的那个公司的机器，一般是的在退火温度后面的空格里，输入你每个循环升或降的温度，后面还有加减号代表升或降。
PCRSSCP的原理特点、操作方法和应用1
随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Res
反向PCR(reverse－PCR)原理、程序和局限
反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物将含有
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。1．组织切片和细胞样品的制备【试剂与配置】10%福尔马林二甲苯PBS【
PCR基因扩增仪的原理和程序
PCR技术即基因扩增技术。 PCR基因扩增仪扩增DNA的原理是：先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物，即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片
PCR操作范例和PCR反应系统的组成(1)
一、PCR操作范例 在一个典型的PCR反应体系中需加入：适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg2+和两个合成的DNA引物。模板DNa 94℃ 变性1min，引物与模板40～60℃退火1min，72℃延伸2min。在首次循环前模板预变性3～5min；在末次
免疫PCR
免疫PCR 实验方法原理 主要由两个部分组成，第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定过程；第二部分即通常的PCR检测，抗原分子的量
免疫PCR
免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针，用此探针与待测抗原反应，PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子，电泳定性，根据特异性PCR产物的有无，来判断待测
PCR实验操作程序
1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样：反应物 加样顺序 体积(μl) 终浓度去离子水 1 29.410×Buffer B 2 5 1×4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L MgCl2 4 3 1.5mmol/L有义引物 5 2.6 0.25μmol/L反义引物
PCR实验操作程序
1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样： 反应物 加样顺序 体积(μl) 终浓度 去离子水 1 29.4 10×Buffer B 2 5 1× 4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L MgCl2 4 3 1.5mmol/L 有义引物 5 2.6 0.
PCR实验操作程序
1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样：反应物 加样顺序 体积(μl) 终浓度去离子水 1 29.410×Buffer B 2 5 1×4×dNTP混合物 3 5 各200μmol/L MgCl2 4 3 1.5mmol/L有义引物 5 2.6 0.25μmol/L反义引物
PCR反应程序如何设定
程序：94℃预变性 5~10min94℃变性30s~2min退火 30s~2min72℃延伸1~5min72℃延伸5~10min中间三步循环，具体时间依自己的模板和引物情况而定。
标准的Touchdown－PCR程序
ANNEALING TEMP. 55度94 5min94 30s60 30s72 1min 2cycles94 30s59 30s72 1min 2cycles94 30s58 30s72 1min 2cycles........94 30s51 30s72 1min 2cycles94 30s50