PNAS：细菌抵御病毒侵染TypeIRM系统的新发现
中科院生物物理研究所梁栋材院士课题组的研究论文 “Structural basis underlying complex assembly and conformational transition of the Type I R-M system”。该项工作报道了细菌TypeI系统中核心酶MTase复合物3.2Å的晶体三维结构，揭示了MTase在Type I分子机器中识别外源DNA，发挥核心酶活性的分子基础。 这一研究成果公布在PNAS杂志上。 细菌进化一系列的防御系统用来抵御噬菌体病毒的侵染。近年来研究表明，R-M系统和CRISPR-Cas系统同时存在于细菌中。它们作为防御系统的核心，通过直接作用和降解侵入宿主细胞的外源DNA，从而为寄主提供了先天适应性免疫保护。R-M系统存在于90%的细菌中，根据亚基的组成和DNA的切割方式主要划分为Type I，Type II，Type III和Type IV四种。TypeI R......阅读全文
核心酶的组成及种类
核心酶(core enzyme)：大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由6个亚基组成(2αββ’ωσ)(即两个α亚基、β亚基、β′亚基、ω亚基和σ亚基)，还含有两个锌原子。而无σ亚基的酶(2αββ’ω)叫核心酶。亦指DNA聚合酶Ⅲ中由α、ε、θ三种亚基组成全酶的核心酶(core enzyme)。
核心酶的基本信息
核心酶(core enzyme)：大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由6个亚基组成(2αββ’ωσ)(即两个α亚基、β亚基、β′亚基、ω亚基和σ亚基)，还含有两个锌原子。而无σ亚基的酶(2αββ’ω)叫核心酶。亦指DNA聚合酶Ⅲ中由α、ε、θ三种亚基组成全酶的核心酶(core enzyme)。
λ－噬菌体末端酶的基本信息
中文名称λ 噬菌体末端酶英文名称λ phage terminase定 义λ噬菌体编码的末端酶。能识别结合λDNA连环体中的cos序列，结合后特异性地切割DNA形成12个碱基的黏性末端。此酶还有识别蛋白质衣壳前体和ATP酶的功能，水解ATP提供能量。将切割后所形成的酶-DNA二元复合体运送到蛋白质衣
λ－噬菌体末端酶的基本信息
中文名称λ 噬菌体末端酶英文名称λ phage terminase定 义λ噬菌体编码的末端酶。能识别结合λDNA连环体中的cos序列，结合后特异性地切割DNA形成12个碱基的黏性末端。此酶还有识别蛋白质衣壳前体和ATP酶的功能，水解ATP提供能量。将切割后所形成的酶-DNA二元复合体运送到蛋白质衣
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑制非重组子背景。本实验
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
实验方法原理 λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
实验方法原理 λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如
λ噬菌体DNA(48502bp)的限制性内切酶酶切片段
没有的位点：NotI, SfiI,SpelAatI6个位点:12347,31481,33000,39995,40599,40617片段长度:19044,12436,7886,6995,1519,604,18AatII10个位点:5110,9399,11248,14979,29041,40811,41
λ噬菌体的局限性λ噬菌体
实验方法原理 本实验以含原λ噬菌体和缺陷噬菌体λdg的双重溶原菌gal+作为供体,经紫外线诱导后,获取能转导半乳糖发酵基因的高频转导噬菌体裂解液,然后让这些转导噬菌体将gal+基因转移到受体菌gal-中去。实验材料 供体菌 : Escherichia coli K12 F2 gal + (带有原噬菌
表达β半乳糖苷酶噬菌体的噬菌斑分析
材料：LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal对于3ml顶层琼脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。大肠杆菌铺平板细菌只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
实验方法原理λDNA是线状双链DNA,EcoRⅠ在其上有5个切点,产生6个片段,通过琼脂糖凝胶电泳可将这几条片段分离开。如何重建这6个片段呢?可用两种限制性内切酶同时或先后作用于λDNA。例如λDNA经EcoRⅠ切割后在凝胶上分离开来的6条带可洗脱出来,然后分别将这6条片段用HindⅢ切割。结果表明
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
实验方法原理 λDNA是线状双链DNA,EcoRⅠ在其上有5个切点,产生6个片段,通过琼脂糖凝胶电泳可将这几条片段分离开。如何重建这6个片段呢?可用两种限制性内切酶同时或先后作用于λDNA。例如λDNA经EcoRⅠ切割后在凝胶上分离开来的6条带可洗脱出来,然后分别将这6条片段用HindⅢ切割。结果表
酶促重组等温扩增（ERA）的原理和核心技术
酶促重组等温扩增技术(ERA技术)是一种等温核酸扩增技术,它是利用抗体制药领域先进的Molecular Design、Directed Evolution、Affinity Maturation 等技术手段,将来源于细菌,病毒和噬菌体的特定工具酶进行改造突变并筛选其功能,通过不同的核酸扩增反应体系进
Lambda噬菌体
· Lambda DNA Preparation (Stanford DNA Sequence & Technology Center)Detailed protocol for lambda DNA preparation with recipes· Isolati
通过噬菌体ELISA鉴定得到的噬菌体克隆
经过3～4轮的筛选后，应该能够富集到能与受体特异性结合的噬菌体群体。通常而言，在后几轮的筛选中，每次获得的噬菌体总量都会增加，但是单就这个现象并不一定能说明已经筛选到了受体特异性结合的肽段。能与靶分子非特异性结合或者能与筛选基质的噬菌体克隆也会造成这一现象。噬菌体ELISA可以说是最灵敏的鉴定所获取
烈性噬菌体（virulent－phage）和温和噬菌体（temperate－phage）
噬菌体(bacteriaphage or phage)是病毒的一类，结构很简单，基本上由一个蛋白质外壳包裹着一些核酸组成的。噬菌体的多样性来自于组成其外壳的蛋白质的种类，以及其染色体的类型和结构的不同。（一）烈性噬菌体（ virulent phage）遗传学上应用最广泛的烈性噬菌体是大肠杆菌（ E.
噬菌体裂解酶对治疗龋齿等口腔疾病有显著效果
近日，中国科学院武汉病毒研究所研究员危宏平团队联合武汉大学口腔医院教授李宇红团队研究发现，噬菌体裂解酶能杀灭导致龋齿的细菌，而对常见的口腔共生菌无害，并通过大鼠龋齿模型实验证实能显着降低龋齿程度。 龋齿俗称蛀牙或虫牙，是牙齿被龋坏逐渐形成龋洞的口腔疾病，是导致脱牙的主要原因，包括龋齿在内的口腔
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理置换型载体
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
实验方法原理 置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）。实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶λ
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
实验方法原理 置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 二硫苏糖醇 dNTP 和 ddNTP 标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液 甲酰胺上样缓冲液 测序酶稀释缓冲
噬菌体竟然可以保护自身基因组免受CRISPR核酸酶切割
细菌和感染它们的病毒正在进行一场与生命本身一样古老的分子军备竞赛。进化为细菌配备了一系列可靶向并破坏病毒DNA的免疫酶，包括CRISPR-Cas系统。但是，杀死细菌的病毒（也称为噬菌体）已设计出了它们自己的工具来帮助它们战胜这些最强大的细菌防御。 如今，在一项新的研究中，来自美国加州大学旧金山
噬菌体裂解酶对治疗龋齿等口腔疾病有显著效果
近日，中国科学院武汉病毒研究所研究员危宏平团队联合武汉大学口腔医院教授李宇红团队研究发现，噬菌体裂解酶能杀灭导致龋齿的细菌，而对常见的口腔共生菌无害，并通过大鼠龋齿模型实验证实能显著降低龋齿程度。 龋齿俗称蛀牙或虫牙，是牙齿被龋坏逐渐形成龋洞的口腔疾病，是导致脱牙的主要原因，包括龋齿在内的
噬菌体检查
病原体是许多疾病的主要诱因，对人类健康构成了严重威胁。近年来，食品、水源和环境中致病微生物已造成世界上许多流行病的爆发。因此，为了控制病原体的传播并减少流行病的发生，检测致病微生物的技术的成熟可行性显得尤为重要。 培养物细菌分离和鉴定是实验室检测病原体的“金标准”方法。该检测方法虽然足够灵敏，
噬菌体抗体ELISA
实验概要噬菌体ELISA是一种快速而便捷的方法，尤其是因为pⅧ有多拷贝会导致信号的扩增。主要试剂1. 2％MPBS2. PBS/Tween3. 辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗噬菌体单克隆抗体(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)
噬菌体抗体ELISA
实验概要噬菌体ELISA是一种快速而便捷的方法，尤其是因为pⅧ有多拷贝会导致信号的扩增。主要试剂1. 2％MPBS2. PBS/Tween3. 辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗噬菌体单克隆抗体(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)
什么是噬菌体
噬菌体是感染细菌、真菌、藻类 、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小、不具有完整细胞结构、只含有单一核酸。可视为一种“捕食”细菌的生物。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已
什么是噬菌体
噬菌体是感染细菌、真菌、藻类 、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小、不具有完整细胞结构、只含有单一核酸。可视为一种“捕食”细菌的生物。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已
噬菌体如何培养
用大肠杆菌来培养。先制备培养大肠杆菌的培养基，培养大肠杆菌。然后用噬菌体再感染大肠杆菌。噬菌体就是细菌病毒，他是严格的活细胞寄生生物，所以要用活细胞来培养。
噬菌体展示技术
1985年，Smith G P第一次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因Ⅲ，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了噬菌体展示技术。该技术的主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒颗粒内，即在噬菌体表面展示特定蛋白质，而在噬菌体核心DNA中则含有该蛋白的结构基因。另