表达β半乳糖苷酶噬菌体的噬菌斑分析
材料：LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal对于3ml顶层琼脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。大肠杆菌铺平板细菌只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影响噬菌斑的检测。方法：1. 将λ噬菌体原种于SM+明胶液稀释。2. 用10ul适当稀释的λ噬菌体感染0.1ml铺平板细菌。感染培养物37℃温育20min。3. 用3ml含X-gal的已熔顶层琼脂（47℃）至第一个试管，通过轻拍或轻微涡旋振荡混匀，随后倒入至琼脂平板上。4. 用剩下的噬菌体原种的稀释液......阅读全文
表达β半乳糖苷酶噬菌体的噬菌斑分析
材料：LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal对于3ml顶层琼脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。大肠杆菌铺平板细菌只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
实验方法原理 遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物，也可用于以后的分析。
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物，也可用于以后的分析。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
实验方法原理 遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物，也可用于以后的分析。实验材料 λ 噬菌体试剂、试剂盒 氯仿SM仪器、耗材 硼硅酸盐巴斯德设管（配有橡皮球）或微量移液
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
实验方法原理 一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法，在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法，包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。实验材料 λ 噬菌体文库大肠杆菌铺平板细菌试剂、试剂盒 变性液中和液SM
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法，在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法，包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理一个从 λ 噬菌体文库中鉴
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
实验方法原理 一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法，在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法，包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。
关于插入型λ类噬菌体载体的简介
外源的DNA克隆到插入型的λ载体分子上，会使噬菌体的某种生物功能丧失效力，即所谓的插入失活效应。插入型的λ载体又可以分为免疫功能失活的（inactivatiortofimmunityfunction）和大肠杆菌β-半乳糖苷酶失活的（inactlvatlonofE．coliβ-galactosid
噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(1)
在流行病学和细菌学的研究中，噬菌蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovorus，简称蛭弧菌）、噬菌体、细菌素的研究及其应用已越来越引起人们的关注。蛭弧菌、噬菌体、细菌素是分属于细菌、病毒、抗菌物质3种不同的有机物，但它们有许多相似的生物特性，而且往往引起人们产生错误的概念。蛭弧菌是
噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(4)
噬菌体侵入宿主细胞进行系列合成反应时，宿主菌细胞本身进行了一系列工作，以修复噬菌体侵入所引起的创伤，并加固胞壁的结构，阻止细胞质的继续渗出。噬菌体巧妙地利用宿主菌细胞的“机器”而有效地合成自身。 （三）细菌素对敏感菌株的作用 细菌素的作用范围很窄，与噬菌体一样有很强的特异性。有的细菌素
噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(2)
（二）噬菌体的形态与结构噬菌体不能在光学显微镜下观察到，因此，对噬菌体形态、结构的认识，得从电子显微镜开始，这一点与细菌素是相同的。噬菌体个体叫做病毒粒子，它的形状有3种，包括蝌蚪形、微球形和纤丝形。目前已知大部分噬菌体是属于蝌蚪形，它由头和尾两部分组成。噬菌体尾部的结构比较复杂，是感染、吸附、侵入
噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(5)
蛭弧菌、噬菌体和细菌素作用敏感细菌，在含有敏感细菌的双层琼脂上均可形成透明的噬菌斑。形成的噬菌斑随敏感菌株的生长代谢停止而停止扩展。蛭弧菌噬菌斑可随培养时间而扩展，直至宿主菌耗尽。蛭弧菌在死菌上形成噬菌斑的速度更快、数目更多。用检查噬菌体、细菌素的方法很难检出蛭弧菌，用检查蛭弧菌的方法不能检出噬菌体
噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(3)
T偶数噬菌体除头部蛋白和可收缩尾部蛋白质外，还有一些功能不明的内部蛋白占总蛋白质的3%，此外还含有少量其他物质，如酸溶性肽类，主要为门冬氨酸、谷氨酸和赖氨酸；两种酸溶性多胺——腐胺和精胺。 （三）细菌素的化学组分及理化性质 细菌素是一种具有生物活性蛋白质类物质。大多数细菌素是含有蛋白质
λ噬菌体的铺平板培养实验
噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌，后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基（如含琼脂糖或琼脂）上，这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个
细菌和噬菌体的遗传分析－4
（2）重组发生在部分二倍体中； （3）只出现一种重组子，不出现相反的重组子（如gal-消失，只剩下gal+）。 三、噬菌体遗传分析 噬菌体是指浸染细菌、放线菌以及真菌的病毒。包括温和、烈性两种，都没有细胞结构，由一个蛋白质外壳包围一段DNA或RNA（烟草花叶病毒为RNA病毒）
噬菌体效价的计算和技术优点
又称噬菌斑形成单位（pfu）数,指每毫升试样中含有侵染性噬菌体的粒子数。测定方法有双层平板法，其优点有：1）弥补平板不平2）噬菌斑位于同个平面，较清晰3）上层为半固体培养基，有利噬菌体扩散
用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。 l DN
用噬菌粒载体制备单链DNA
噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。本实验来源「分子克隆实验指
λ噬菌体的铺平板培养实验
实验方法原理 噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌，后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基（如含琼脂糖或琼脂）上，这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。实验材料 λ 噬菌体原种大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 MgSO4SM 和 SM+
λ噬菌体的铺平板培养实验
实验方法原理 噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌，后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基（如含琼脂糖或琼脂）上，这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。
噬菌体的检查及效价测定
1、目的：1.1 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。1.2 学会检查噬菌体的方法。1.3 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。2、原理：噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌 裂解，释
用噬菌粒载体制备单链DNA
实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。实验材料
用噬菌粒载体制备单链DNA
实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA
噬菌体的检查及效价测定
实验方法原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑──噬
从自然环境中分离和纯化噬菌体实验
实验方法原理 因为噬菌体是专性寄生物，所以自然界中凡有细菌分布的地方，均可发现其特异的噬菌体的存在，亦即噬菌体一般是伴随着宿主细菌的分布而分布的，例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，故也能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体；乳牛场有较多的乳酸杆菌，也容易分离到乳酸杆菌噬菌体等。虽然近年的研究表明，自由噬
从自然环境中分离和纯化噬菌体实验
实验方法原理因为噬菌体是专性寄生物，所以自然界中凡有细菌分布的地方，均可发现其特异的噬菌体的存在，亦即噬菌体一般是伴随着宿主细菌的分布而分布的，例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，故也能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体；乳牛场有较多的乳酸杆菌，也容易分离到乳酸杆菌噬菌体等。虽然近年的研究表明，自由噬菌
概述噬菌体的基因重组
历史：1936年F. M. Burnet发表了噬菌体能产生突变体，其噬菌斑的外形和野生型的有明显区别，可惜的未能引起重视，以致噬菌体遗传学延迟了十年才得以建立。 1946年第11届冷泉港学术讨论会上，在宣布一基因一酶学说的胜利，及Ledernerg、Tatum细菌杂交实验报告的同时，Hersh
基因重组的噬菌体的相关介绍
历史：1936年F. M. Burnet发表了噬菌体能产生突变体的观点,其噬菌斑的外形和野生型的有明显区别,可惜未能引起重视,以致噬菌体遗传学延迟了十几年才得以建立。 1946年第11届冷泉港学术讨论会上,在宣布一基因一酶学说的胜利,及Ledernerg、Tatum细菌杂交实验报告的同时,He
CDNA文库筛选
（一）λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1．用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基（Y1088用于噬菌斑杂交，Y1090用于免疫筛选），于37℃振荡培养过夜。2．将过夜培养物以3000×g离心5min。3．分别用2ml λ-dil（10 mmol/L tris-Cl,
噬菌体的检查及效价测定（二）
六、结果：1. 噬菌体检查① 离心分离加热法OD650光密度值正常发酵液（对照） 异常发酵液（试验）离心上清液(A1)离心上清液加热煮沸后(A2)A2/A1② 绘出平板上的噬菌斑检测结果，指出噬菌斑和宿主细菌。2. 噬菌体效价测定① 平板上噬菌斑数目噬菌体稀释度10-4、10-5、10-6 对照噬菌