蛋白质的内源荧光与荧光探针

利用荧光光谱法研究蛋白质一般有两种方法。一是测定蛋白质分子的自身荧光(内源荧光),另一种是当蛋白质本身不能发射荧光时,通过非共价吸附或共价作用向蛋白质分子的特殊部位引入外源荧光(也称荧光探针),然后测定外源荧光物质的荧光。 蛋白质的内源荧光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan ,Trp)、酪氨酸(tyrosine ,Tyr)和苯丙氨酸(phenylalanine ,Phe))残基的蛋白质在280nm或295nm的激发光的激发下会产生荧光,这种荧光称为内源性荧光(天然荧光)。Trp、Tyr和Phe由于其侧链生色基团的不同而有不同的荧光光谱。其荧光峰位波长分别是348、303、282nm,其中Trp的荧光强度最大,而Phe的荧光强度则很低,因此蛋白质的内源荧光主要是由Trp和Tyr残基形成的。同时在含有Trp和Tyr的蛋白质中,由于其分子发生了从Tyr残基到Trp残基的能量转移,......阅读全文

荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同

荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链,它都掺。而探针法是当探针结合到目标序列上以后,聚合酶降解探针后,探针上自带的荧光基团离开淬灭基团,从而发出荧光。从两者的原理上来看,不难判断,荧光PCR法更加简单方

荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同

荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链,它都掺。而探针法是当探针结合到目标序列上以后,聚合酶降解探针后,探针上自带的荧光基团离开淬灭基团,从而发出荧光。从两者的原理上来看,不难判断,荧光PCR法更加简单方

荧光原位杂交FISH和荧光探针有什么区别?

荧光原位杂交技术(FISH):是荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交后,通过荧光显微镜观察(细胞、组织)细胞核彩色探针信号,获得特定DNA靶序列结构和数目异常的信息。

荧光探针有助于癌症研究

   Echelon Biosciences公司和犹他大学的研究人员合作研究,指出使用ATX-Red AR-2作为新的显像剂可有效照亮肿瘤。       ATX-Red AR-2是临床前阶段药物研发中令人兴奋的进步,可使研究人员使用非侵入性、机制特异诊断方法来监控疾病和候选药物。图像化酶自毒素的活性

局部荧光探针可以检测肠癌啦!

  近日,国际化学与生物学杂志chemistry&biology发表了来自斯坦福大学医学院Matthew Bogyo研究小组的一项最新研究成果,他们发现一种荧光淬灭探针(aABP)能够特异性靶向在肠道发育不良中高表达的半胱氨酸蛋白酶,对指示肠道肿瘤具有非常高的敏感性和特异性。  早期检测结肠息肉能够

荧光探针的化学性质

  荧光定量PCR所使用的荧光化学制剂可分为两种:荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切

复合荧光探针HSA/PinkmentOAc

  过氧亚硝酸盐(Peroxynitrite,ONOO-)是由超氧阴离子自由基和一氧化氮自由基形成的具有高活性的活性氮物种,是许多体内循环途径的信号传导分子。同时,该分子具有强氧化性,可引起自由基介导的硝化反应,从而会影响生物体内多种生物过程,对脂质、蛋白、DNA等造成不可逆转的损伤。研究表明,过氧

锌离子荧光染料探针的应用

锌离子在许多生理和病理过程中都起到至关重要的作用,因此对锌离子进行探测和识别有重要理论和实际意义。荧光探针因其设计简单、易于操作、灵敏度高、可细胞成像等诸多优点而广泛应用于锌离子的识别研究。锌是生物中含量第二高的过渡金属(仅次于铁), 大脑中大多数Zn 2+紧密结合,因此细胞外和细胞内的游离Zn 2

使用荧光探针的注意事项

使用荧光探针的注意事项 不同的荧光探针在不同标本的效果常有差异,除综合考虑以上因素以外,有条件者应进行染料的筛选,以找出最适的荧光探针。此外,许多荧光探针是疏水性的,很难或不能进入细胞,须使用其乙酰羟甲基酯(acetoxymethyl,AM)形式,也就是荧光探针与AM结合后变成不带电荷的亲脂性化合物

钙离子荧光探针类型大盘点

钙离子在许多生理过程中起着复杂的作用。例如,细胞内钙离子在促进神经元从神经元中释放神经递质的信号转导途径中必不可少,并参与所有肌肉细胞收缩所需的机制。细胞离子浓度受被动和主动离子通道和泵的调节。离子通道和泵的故障可能导致离子浓度调节不当,从而产生不利于正常细胞功能的不利条件。钙离子浓度研究领域中常使

荧光探针法是什么意思

荧光探针法是探针法是当探针结合到目标序列上以后,聚合酶降解探针后,探针上自带的荧光基团离开淬灭基团,从而发出荧光。荧光探针分类很多,可以根据材料属性分为有机和无机探针。荧光探针是指在紫外-可见-近红外区有特征荧光,并且其 荧光性质(激发和发射波长、 强度、寿命、 偏振等)可随所处环境的性质,如极性、

医学高科技:靶向荧光探针

  靶向荧光探针能够在术中实时点亮癌细胞,帮助医生判断肿瘤边界和发现转移灶,这一概念也被称为荧光引导手术(fluorescence-guided surgery,FGS)。  在过去几十年中,分子影像技术的发展大大提高了肿瘤诊治的能力,传统医学影像技术一般基于生物体本身的物理特性或解剖学特征,缺乏特

Small:新荧光纳米探针助力肿瘤治疗

  近日,刊登在国际杂志Small上的一篇研究论文中,来自新加坡A*STAR研究所的研究人员开发了一种混合金属聚合物纳米颗粒,其在肿瘤细胞周围特殊的酸性环境下就会发光用以指示肿瘤所在,因此可以鉴别任何肿瘤的非特异性探针或许就可以用于监测癌症的发病部位、扩散及其疗法的有效性。  癌性肿瘤pH通常比正常

功能纳米荧光探针用于肿瘤细胞检测

  恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一,目前已成为人类死亡的主要原因,并且其发病率呈逐年上升的趋势。若能早期发现肿瘤并及时治疗,可大大提高肿瘤的治愈率。因此,对于肿瘤的早期检测和诊治已成为各国科学家关注的热点。为了实现肿瘤早期诊治,目前研究大多集中于检测活细胞内一种肿瘤标志物,这可能会带来“假

耦联到抗体上的荧光团探针

荧光团探针的选择依赖于下面的重要标准: A.  仪器。比如,光源,滤片,检测系统。B.  多标记中对探针色彩区分程度的要求。例如,若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。C.  要求的灵敏度。比如,Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针

选择荧光探针的一般考虑

选择荧光探针的一般考虑 选择合适的荧光探针是有效地进行实验并获取理想实验结果的保障。荧光探针的选择主要从以下几个方面考虑。(1)仪器所采用激光器的类型:应根据仪器采用激光器的类型进行探针选择。如共聚焦激光扫描显微镜(Bio-Rad 1024,美国Bio-Rad公司产品)采用氪/氩离子激光器,激发波长

LSCM常用的检测内容及其荧光探针

胞内游离钙 共聚焦激光扫描显微镜常用的有Fluo-3、Rhod-1、Indo-1、Fura-2等,前两者为单波长激光探针,利用其单波长激发特点可直接测量细胞内Ca2+动态变化,为钙定性探针;后两者为双波长激发探针,利用其双波长激发特点和比率技术,能定量细胞内i,为钙定量探针。定量细胞内[Ca2+]i

解决荧光定量PCR引物探针问题

荧光实时定量 PCR 技术 (real-time quantitative PCR,qPCR) 几乎是现代分子生物学技术中最重要、应用最广泛的核酸定量检测技术。成功的定量 PCR 实验离不开精准的实验设计和操作流程。    实时荧光定量 PCR 分析的部分实施需要经过优化以确保所有反应参数均设置精确

荧光pcr探针室温放置会降解吗

实时定量PCR是通过产物发出荧光,根据荧光强度来定量的.激发荧光的方式有荧光染料法和探针法.荧光探针比荧光染料更具特异性,可检测特定序列的扩增产物的量.荧光染料可以检测PCR中获得的全部双链DNA,但不能区分不同的双链DNA.可以说荧光PCR包括探针法和染料法不建议这么做,pcr产物的话大部分的都会

实时荧光Taqman-探针设计的几个要点

实验室很多同学都要做Real time PCR实验,实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见,不过也有实验室前没有做过的,查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物,探针法的出现使得定量PCR技术

细胞骨架的荧光探针标记方法

细胞骨架主要有微管(micmtuble, MT),微丝(microfilament, MF),中间丝(intermediate filament, IF三种类型。它们分别由不同的蛋白单体组装而成,其中微管蛋白(tubulin)、肌动蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是细胞骨架的重要组

荧光原位杂交(FISH)探针的制备

实验概要本实验介绍了荧光原位杂交(FISH)探针的制备原理及技术。实验原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合,这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern   blot原理,以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针,探针和

ros荧光探针检测结果怎么看

活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细

多重qPCR探针的荧光基团的要求

  1. 避免荧光基团相互干扰    多重qPCR的实验设计要求比单一反应体系的要复杂的多。检测不同指标的探针必须携带不同光谱范围的荧光基团。下图是几种常用的荧光基团的发射光谱,很多荧光光谱相近的荧光基团,它们虽然最大发射波长不同,但是在附近的波段内还是会有相互重叠的,一定要避免荧光基团发射光谱之间

标记抗体、配体等常用的荧光探针

 标记抗体、配体等常用的荧光探针 共聚焦激光扫描显微镜不仅可用免疫荧光分析固定的细胞或组织切片,还可用于分析活细胞,得到特异性抗体或其他荧光免疫探针识别靶分子的表达、定位、分布变化等信息。标记抗体、配体或蛋白质等较通用的有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC

荧光定量PCR检测试剂盒简述荧光探针法的应用

荧光定量PCR检测试剂盒简述荧光探针法的应用荧光定量PCR检测试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;P

荧光探针研究获进展-实现单一波长激发双色荧光成像

  近日,中国科学院深圳先进技术研究院副研究员储军主持研发的新型大斯托克斯位移荧光蛋白取得突破,实现了在小鼠脑内单一波长激发双色荧光成像和高灵敏的生物发光成像。该工作以A bright cyan-excitable orange fluorescent protein facilitatesdual

荧光探针实验中如何找到最大激发波长

荧光探针实验中找到最大激发波长:对不同材料来说不同,绝大多数情况下,发射波长会随着激发波长的偏移而有所偏移。对于固态物质,主要是因为分子与其它材料形成了π建,对于量子点溶液,激发波长也会显著导致发射光谱的不同。但是不是绝对的,比如对于alex555分子,发射波长的便宜往往就相对较小,这是由于分子内部

细胞凋亡检测实验——荧光探针双标记法

实验方法原理本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,

新型复合荧光探针可实现快速、灵敏检测

  过氧亚硝酸盐(Peroxynitrite,ONOO-)是由超氧阴离子自由基和一氧化氮自由基形成的具有高活性的活性氮物种,是许多体内循环途径的信号传导分子。同时,该分子具有强氧化性,可引起自由基介导的硝化反应,从而会影响生物体内多种生物过程,对脂质、蛋白、DNA等造成不可逆转的损伤。研究表明,过氧