电泳技术在医学中的应用

目前,该技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、有机物、无机离子等的分离和鉴定,甚至病毒与细胞的研究。特别是电泳所用支持介质由流动相改为固相支持物后,各种各样的电泳分析装置不断推出以适应不同教学、临床和科研工作的需要。当今,电泳技术与质谱技术联用在后基因组学研究中,正发挥者着巨大的作用,为临床检验的发展带来新的生机与活力。电泳分析仪可分为两大类:临床实验室常规类,如全自动荧光/可见光双系统电泳仪、全自动醋纤膜电泳仪、全自动琼脂糖电泳仪和全自动琼脂糖电泳仪;科研为主兼做临床样本类,如双向电泳及双向电泳2液相色谱2质谱联用、高效毛细管电泳及高效毛细管电泳2质谱联用、高效毛细管芯片电泳、DNA测序系统。1. 全自动荧光/可见光双系统电泳仪:具有荧光/可见光双系统,在使用荧光试剂项目如肌酸激酶(CK) 、乳酸脱氢酶(LD)同工酶时为全自动。只需将样品、试剂、琼脂糖凝胶电泳胶片放好后,操作人员可离机完成试验并得到结果,此为全自动电泳仪......阅读全文

电泳技术的过程介绍

电泳是电泳涂料在阴阳两极,施加于电压作用下,带电荷的涂料离子移动到阴极,并与阴极表面所产生的碱性物质作用形成不溶解物,沉积于工件表面。它包括四个过程:电解(分解)在阴极反应最初为电解反应,生成氢气及氢氧根离子OH-,此反应造成阴极面形成一高碱性边界层,当阳离子与氢氧根作用成为不溶于水的物质,涂膜沉积

纸电泳技术的应用

纸电泳的设备简单,应用广泛,是最早使用的一种电泳技术。最初用于蛋白质,后来也用于氨基酸、核苷酸一些低分子物质,其优点在于或采用滤纸与色素结合的直接电泳图,或剪下滤纸的任何部分来抽提其中的物质。在早期的生物化学研究中,曾发挥重要作用。由于纸电泳时间长,分辨率较差,近年来逐渐为其他快速、简便、分辨率高的

双向凝胶电泳技术应用

凝胶中蛋白的检测凝胶染色的目的是使其中的蛋白质能够被观察到。目前还没有通用的染色方法,只能在考虑多种因素如需要的灵敏度、线性范围、方便程度、费用、以及成像设备类型等基础上,结合实际进行选择。有时也可以将蛋白转膜后通过免疫印迹的方法来进行检测。图像采集和分析成像设备可以摄人图像,对凝胶图像以数字形式保

电泳技术(electrophoretic-techniques)简介4

各电泳法,除另有规定外,照下述方法操作。一、纸电泳法1.仪器装置包括电泳室及直流电源两部分。常用的水平式电泳室装置如图,包括两个电泳槽A和一个可以密封的玻璃(或相应材料)盖B;两侧的电泳槽均用有机玻璃(或相应材料)板C分成两部分;外格装有铂电极(直径0.5~0.8cm)D;里格为可放滤纸E的有机玻璃

电泳技术(electrophoretic-techniques)简介3

(三)等电聚焦电泳技术等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中,具有pH梯

电泳技术(electrophoretic-techniques)简介2

⒈材料与试剂 醋酸纤维素膜一般使用市售商品,常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液,浓度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要点⑴膜的预处理:必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液,浸透后,取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液,不可吸得过干。⑵加样:样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决

凝胶电泳技术的特点

  以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。  聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)除了浓缩效应、电荷效应外,还包括分子筛效应,普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。  琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。

免疫电泳技术的优点

  (一)加快了沉淀反应的速度;  (二)电场规定了抗原抗体的扩散方向,使其集中,提高了灵敏度;  (三)可将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开,再分别与抗体反应。

影响电泳技术的因素介绍

1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少。对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离。为了保证电泳过

关于电泳技术的应用介绍

1.聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用。

凝胶电泳技术的特点

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)除了浓缩效应、电荷效应外,还包括分子筛效应,普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。

凝胶电泳技术的特点

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)除了浓缩效应、电荷效应外,还包括分子筛效应,普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。

蛋白质电泳技术2

Decrease toxicity of destain even more!The destain procedure can be made even less toxic by replacing the destaining solution completely with MilliQ w

电泳技术(electrophoretic-techniques)简介1

电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的基本原理和分类在电场中,推动带电质点运

电泳技术的现状和发展

   早期的电泳技术是由瑞典Uppsala大学物理化学系Svedberg教授提出了荷电的胶体颗粒在电场中移动的现象称其为电泳(electrophoresis)。于1937年,收Arne Tiselius教授---诺贝尔奖金获得者,利用些电泳现象,发明了最早期的界面电泳(moving

电泳技术(electrophoretic-techniques)简介5

三、琼脂糖凝胶电泳法1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂(1)醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0)取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节pH至3.0,再加水至1000ml。(2)甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g,加水100ml使溶解。3.操作法(1)制胶取琼脂糖约0.2g,加水10

电泳技术RNA电泳操作步骤

  试剂:  琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。  步骤  一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc)  1. 称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。  2. 加700mL

电泳技术基本知识和种类

电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极移动。电泳现象早在1890年就

电泳设备及电泳技术应用范围

电泳:在直流电场中,带电荷的粒子向带符号相反的电极移动,称为电泳。电泳也是一种分离的方法和技术,就是分离和鉴定混合物中带电粒子(包括离子、高分子多电解质、胶体粒子、病毒颗粒以致活的细胞,如细菌和红细胞等)的技术。 电泳装置:由电泳仪(电源)和电泳槽(混合样品电泳时的支持物)组成。 电泳仪(电源):为

电泳技术在医学中的应用

目前,该技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、有机物、无机离子等的分离和鉴定,甚至病毒与细胞的研究。特别是电泳所用支持介质由流动相改为固相支持物后,各种各样的电泳分析装置不断推出以适应不同教学、临床和科研工作的需要。当今,电泳技术与质谱技术联用在后基因组学研究中,正发挥者着巨大的作用,为临床检

电泳设备及电泳技术应用范围

电泳:在直流电场中,带电荷的粒子向带符号相反的电极移动,称为电泳。电泳也是一种分离的方法和技术,就是分离和鉴定混合物中带电粒子(包括离子、高分子多电解质、胶体粒子、病毒颗粒以致活的细胞,如细菌和红细胞等)的技术。   电泳装置:由电泳仪(电源)和电泳槽(混合样品电泳时的支持物)组成。   电泳仪(电

琼脂糖凝胶电泳技术

  一、琼脂糖凝胶的特点    天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,

对流免疫电泳技术(CIET)

一、原理在pH8.6的琼脂凝胶中,抗体球蛋白只带有微弱的负电荷,在电泳时,由于电渗作用的影响,抗体球蛋白不但不能抵抗电渗作用向正极移动,反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷,将抗原置于负极,将血清抗体置于正极,电泳后则在两孔之间相遇,并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀线。本法由于抗原抗体分子在

电泳技术的基本原理

生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使

免疫分析法的电泳技术

  基本原理:免疫扩散与电泳技术相结合。  类型:对流免疫电泳、火箭免疫电离、免疫电泳、双向免疫电泳(交叉免疫电泳)  对流免疫电泳  基本原理:多数蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷,在电泳时从负极向正极移动。抗体在碱性缓冲液只带微弱的负电 荷,且相对分子质量较大,电泳力较小,在琼脂电渗力作用 下由

电泳技术的基本原理

生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使

毛细管电泳技术缺点

毛细管电泳的缺点是:(1) 由于进样量少,因而制备能力差;(2) 由于毛细管直径小,使光路太短,用一些检测方法(如紫外吸收光谱法)时,灵敏度较低;(3)电渗会因样品组成而变化,进而影响分离重现性。

双向凝胶电泳技术的概念

双向凝胶电泳由O'Farrel以及Klose和Scheele等人于1975年发明的,原理是第1向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小,在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处;第2向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白

双向凝胶电泳技术的原理

1、根据蛋白质的等电点(第一向)和分子量(第二向)的不同进行分离。2、电泳后根据蛋白质的上样量对胶进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色,然后用相关软件对电泳图象进行分析。

琼脂糖电泳技术的特点

天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响