电泳法分离混合蛋白质的基本原理是什么?
电泳法分离混合蛋白质的基本原理是根据蛋白质的电荷不同即酸碱性质不同分离蛋白质混合物的方法。电泳:在外电场的作用下,带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳。电泳技术可用于氨基酸、肽、蛋白质和核苷酸等生物分子的分析分离和制备。 区带电泳是由于在支持物上电泳蛋白质混合物被分离为若干区带。 电泳前用缓冲液浸润薄膜或滤纸等支持物或用缓冲液直接配置成凝胶,将待分离的蛋白质样品加在它的一端或中央,支持物的两端与电极连接,通电电泳。电泳完毕,各个组分分布在不同的区域,用显色剂(蛋白质可用考马斯亮蓝或氨基黑等染色)显色后可以显示出各个组分。 氨基酸混合物特别是寡聚核苷酸混合物一次电泳往往不能完全分开。这种情况可以将第一次电泳分开的斑点通过支持介质间的接触印迹转移到第二个支持介质上,旋转90°,进行第二次电泳。这种方法称为双向电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳:以聚丙烯酰胺凝胶为支持物,一般制成凝胶柱或凝胶板,凝胶是由相连的两部分组成(小的......阅读全文
蛋白质的毛细管电泳分析实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质溶液
蛋白质的毛细管电泳分析实验
毛细管电泳的主要特点是柱效高(N>105~106)、分析时间短,所用样品量和试剂消耗少,操作模式多,更容易改变背景电解质,在线检测和自动化,使其成为同 HPLC 互补的分析技术,在生命科学领域显示出很好的应用前景。对肽和蛋白质的分析已经从对标准样品混合物的初步优化研究朝着应用方向发展,如定量测定重组
蛋白质组的双向凝胶电泳技术介绍
双向凝胶电泳技术与质谱技术是目前应用最为广泛的研究蛋白质组学的方法。双向凝胶电泳技术利用蛋白质的等电点和分子量差别将各种蛋白质区分开来。虽然二维凝胶电泳难以辨别低丰度蛋白,对操作要求也较高,但其通量高、分辨率和重复性好以及可与质谱联用的特点,使其成为目前最流行、可靠的蛋白质组研究手段。双向凝胶电
蛋白质电泳中上样Buf中甘油有啥作用
甘油防止蛋白扩散,甘氨酸起着浓缩蛋白的作用。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在
蛋白质的毛细管电泳分析实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 毛细管电泳仪实验步骤 「操作条件选择」具体见「其他」1. 毛细管电泳柱的制备:清洗、反应与柱平衡;2. 移开进样端的缓冲溶液池,换上样品管;3. 使用低压或电迁移方式进样;4. 再换上缓冲溶液池;5. 施加分离所需的电压。 进行电泳分析。收起 注意事项
琼脂糖凝胶电泳和蛋白质分离纯化
脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为介质的一种电泳方法,其兼具“分子筛”和“电泳的双重作用。 琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的,当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。 经过化学修饰的低熔点的琼脂糖,在
蛋白质电泳结束后不染色能不能过夜
蛋白质电泳凝胶过夜的话应该也会扩散的,一般电泳完了立即就染色了,没有必要过夜,过夜的话效果肯定不会很好的,如果一定要过夜的话建议4度冰箱密封保存。
蛋白质电泳分子量标准试剂的取用规则
蛋白质电泳分子量标准试剂的取用规则:(1)试剂不能与手接触。(2)要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,*不准用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,方可取用另一种试剂。(3)试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后将瓶放回原处(
SDSPAGE电泳测定蛋白质相对分子质量
实验目的了解SDS-PAGE垂直板型电泳法的基本原理及操作技术。学习并掌握SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。实验原理 SDS-PAGE电泳法,即十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法,。1.在蛋白质混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷多少。2.在聚丙烯酰
常规蛋白质聚丙烯-酰胺凝胶电泳实验
实验方法原理 聚丙烯酰胺凝胶, 是由丙烯酰胺单体( Acr ) 和少量的交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺(Bis) , 在催化剂(过硫酸铵或核黄素, 前者为化学聚合, 后者为光聚合) 和加速剂( N, N, N’,N’-四甲基乙二胺
蛋白质电泳结束后不染色能不能过夜
蛋白质电泳凝胶过夜的话应该也会扩散的,一般电泳完了立即就染色了,没有必要过夜,过夜的话效果肯定不会很好的,如果一定要过夜的话建议4度冰箱密封保存。
蛋白质电泳结束后不染色能不能过夜
蛋白质电泳凝胶过夜的话应该也会扩散的,一般电泳完了立即就染色了,没有必要过夜,过夜的话效果肯定不会很好的,如果一定要过夜的话建议4度冰箱密封保存。
血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳
【原理】以醋酸纤维薄膜为支持物,用缓冲液润湿后,将微量血清样品点于膜上,再在电泳槽中进行电泳,可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带,将薄膜置于染色液中,使蛋白质固定并染色后,可看到清晰色带,也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定,再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。在正常情况下,
血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳
【原理】以醋酸纤维薄膜为支持物,用缓冲液润湿后,将微量血清样品点于膜上,再在电泳槽中进行电泳,可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带,将薄膜置于染色液中,使蛋白质固定并染色后,可看到清晰色带,也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定,再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。在正常情况下,
关于乳糜微粒的火箭电泳法的简介
① 抗原稀释倍数与抗血清用量的选择,应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜。本法同时测定apoA-Ⅰ与apoB,应调整两种抗血清用量,使二者峰高有区别,apoB峰高不小于1cm。 ② 不同种类来源的抗血清(如兔与羊),在等效价的情况下进行试验,结果会有差异。apoA-Ⅰ测定以兔抗血清为好
Zeta电位仪的测量方法电泳法
对许多熟悉利用此法进行高分子分离的人来说,颗粒电泳也是一个类似现象。悬浮于介质中的颗粒被置于一电场中;如果带电他们会在电场产生流动,阳性颗粒朝负极流动,阴性颗粒朝正极流动。然而,颗粒并不是独自流动,他们周围会携带一薄层离子和溶剂。这一分离固定媒介与移动颗粒及其携带的离子和溶剂的界面叫做流体剪切面
醋酸纤维素薄膜电泳法
仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂(1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。(2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。(3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5m
血清脂蛋白电泳法的操作与增速
血清脂蛋白电泳法是近些年临床上经常采用的一种检验方法,由于其分离和显色效果均不是很满意,目前不少实验室已废弃脂蛋白电泳法,改用脂蛋白胆固醇和载脂蛋白测定。 在国外,脂蛋白电泳方法已商品化,在分析速度精度等方面均可满足常规应用。参照有关方法和技术[1,5],我们得到了一种适合于国
关于纸电泳法的操作方法介绍
(1) 电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液(pH3.0)。取枸橼酸 (C6H8O7·H2O)39.04g与枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O4.12g,加水4000ml,使溶解。 (2) 滤纸 取色谱滤纸置1mol/L甲酸溶液中浸泡过夜,次日取出,用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干,
Zeta电位仪的电泳法测量方法
对许多熟悉利用此法进行高分子分离的人来说,颗粒电泳也是一个类似现象。悬浮于介质中的颗粒被置于一电场中;如果带电他们会在电场产生流动,阳性颗粒朝负极流动,阴性颗粒朝正极流动。然而,颗粒并不是独自流动,他们周围会携带一薄层离子和溶剂。这一分离固定媒介与移动颗粒及其携带的离子和溶剂的界面叫做流体剪切面
关于电泳法缓冲液作用的介绍
作用之一 缓冲液在电泳过程中的作用是维持合适的pH。电泳时的正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应,负极发生的是还原反应。长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。 作用之二 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电
毛细管电泳法的特点;优点
1、电泳柱效更高,可达105m-1~106m-1,分离速度更快,在几十秒至几十分钟内即可完成一个试样的分析。2、溶剂和试样消耗极少,试样用量仅为纳升级。3、没有高压泵输液,因此仪器成本更低。4、通过改变操作模式和缓冲溶液的成分,毛细管电泳有很大的选择性,可以对性质不同的各种分离对象进行有效的分离。
Zeta电位仪的测量方法:电泳法
对许多熟悉利用此法进行高分子分离的人来说,颗粒电泳也是一个类似现象。悬浮于介质中的颗粒被置于一电场中;如果带电他们会在电场产生流动,阳性颗粒朝负极流动,阴性颗粒朝正极流动。然而,颗粒并不是独自流动,他们周围会携带一薄层离子和溶剂。这一分离固定媒介与移动颗粒及其携带的离子和溶剂的界面叫做流体剪切面,而
高效毛细管电泳法的缺点
毛细管电泳具备如下优点: (1) 高效 塔板数目在105-106 片/m 间,当采用CGE 时 毛细管电泳色谱图,塔板数目可达107 片/m 以上; (2) 快速 一般在十几分钟内完成分离; (3) 微量 进样所需的样品体积为nL 级; (4) 多模式 可根据需要选用不同的分离模式且
双向电泳法的基本原理
蛋白质首先在薄条凝胶中通过等电聚焦分离。然后将凝胶水平放置在第二个平板状凝胶上,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质。水平分离反映了pI的差异;垂直分离反映了分子量的差异。因此,原始的蛋白质组成在两个维度上扩散。使用双向电泳技术可以分解数千种细胞蛋白质。可以从凝胶中切取出单个蛋白质点,并通过质谱
电泳法(三个主要的方法,步骤)
电泳法电泳法是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其含量(%)的方法。各电泳法,除另有规定外,照下述方法操作。第
毛细管电泳法的检测方法
毛细管电泳通常用到的检测方法有吸收光谱,荧光光谱,热镜,拉曼光谱,质谱和电化学方法。
血浆脂蛋白电泳法的分离方法介绍
由于血浆脂蛋白表面电荷量大小不同,在电场中,其迁移速率也不同,从而将血浆脂蛋白分为乳糜微粒、β-脂蛋白、前β-脂蛋白和α-脂蛋白等四种。α-脂蛋白中蛋白质含量最高,在电场作用下,电荷量大,分子量小,电泳速度最快,电泳在相当于α1球蛋白的位置。cm的蛋白质含量很低,98%是不带电荷的脂类,特别是甘
毛细管电泳法的特点;优点
1、电泳柱效更高,可达105m-1~106m-1,分离速度更快,在几十秒至几十分钟内即可完成一个试样的分析。2、溶剂和试样消耗极少,试样用量仅为纳升级。3、没有高压泵输液,因此仪器成本更低。4、通过改变操作模式和缓冲溶液的成分,毛细管电泳有很大的选择性,可以对性质不同的各种分离对象进行有效的分离。
毛细管电泳色谱法简介
毛细管电泳色谱法(capillary electrochromatography; CEC)是毛细管电泳与液相色谱相结合形成的一种高效、快速微分离分析技术。毛细管电泳色谱法可以分离离子和中性分子。它是利用缓冲溶液的电渗流作为泵,使被分析的分子通过对其具有不同保留程度的第二相,达到分离的目的。