PCR实验操作
PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子 （universal primers） 进行扩增反应；比较常用的引子包括SP6, T3 与T7 promoter primer, M13/pUCforward与reverse primers等；若有特殊考量，也可以使用序列专一性核酸引子对。进行PCR反应时若同时添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP，所增殖的DNA即被32P或DIG所标定，所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。仪器用具：微量离心机；PCR 反应器药品试剂：模版DNA： pBlueGus 质体DNA （~50 pg）核酸引子对： T3 promoter primer 与T7 promoter primer （各2 μM）矿......阅读全文
RACE－PCR简介
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA
PCR产物克隆
克隆方法：1. 平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3''''末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'''&#
Silver:－Colony－PCR
Zymolyase Solution:Regular stock of zymolyase is 10 mg/ml diluted in water, mix by inverting, not all will go into solution (filter it) store aliquots
什么是PCR
PCR是聚合酶链式（Polymerase Chain Reaction）反应的简称，是一种将几个或几十个拷贝数DNA片段扩增至上百万份拷贝的方法，这是迄今为止最为重要的技术之一。PCR技术的影响不仅仅局限于生物科学领域，几乎人人都可以感受到PCR所带来的改变，在亲子鉴定以及犯罪调查中PCR技术便有广
PCR使用技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&
PCR实验技术
PCR实验技术 PCR（聚合酶链式反应） 【原理】 PCR（polymerase chain reaction）用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），是人工合成的一对寡核苷酸
QRTPCR
Comparison of normalisation methodsThere is an ongoing debate what is the best way to normalise qPCR data. Reference genes are the most common method,
差异显示PCR
实验材料 反转录酶 热稳定 DNA 聚合酶 锚定 3'-寡核苷酸引物 随机 5'-寡核苷酸引物 总 RNA 带放射标记的 dA
其它PCR方法
· Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommend
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
巢式PCR
实验方法原理 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。 由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部，而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小，因此第二套引
DDPCR
实验试剂 T12G、T12C、T12A、10－mer的随机引物、RT－PCR试剂盒、测序胶、银染系统实验设备 PCR仪、电泳仪、测序槽、银染设备实验步骤 1. 总RNA提取(略)2. 残留DNA的去除反应体系 1－5ugRNA 10×DNA酶缓冲液 2ul
PCR技术综述
前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有
TAIL－PCR－Protocol
TAIL is a series of reactions that are intended to map where a T-DNA (transfer DNA) has inserted within the genome. The main components of the 3 react
PCR扩增仪
聚合酶链锁反应，Polymerase chain reaction，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段，这种方法可在生物体外进行，不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。PCR这项技术，被广泛地运用在医学和生物学的实验室，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊
PCR扩增过程
①首先是将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温（>91℃）环境下加热1分钟,使双链DNA变性,形成单链模板DNA；②降低反应温度（约50℃）,致冷1分钟,使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA发生退火作用并结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上;③将反应混合物的温度上升到72左右保温1-数分钟,在
PCRELISA
PCR-ELISA 一、原理 PCRELISA是用免疫学方法检测PCR产物，这比常规用电泳方法及Southerlot要简便、省时，可同时处理大量标本，便于自动化。PCR-ELISA的原理是在做PCR扩增时应用生物素(biotin)标记的引物，这样PCR的产物就可结合到亲和素(avidi
定量PCR技术
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型： （1）外参法+终产物分析。所谓“外
长距离PCR
实验方法原理 在标准 PCR 反应条件下，PCR 扩增 DNA 片段的长度一般为 1~2 kb，这种扩增能力对许许多多常规的 DNA 分子操作技术要求来说是已经足够了（如 DNA 序列分析和基因突变等)，但是对于扩增某些大的完整的哺乳动物
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇 乙醇 矿物油或者一个蜡珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突变 PCR 缓冲液
PCR技术原理
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有T
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
降落PCR实验
实验材料 基因样品仪器、耗材 PCR实验步骤 1. 反应体积为50 μl。2. 人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系：CD137-pCDNA3质粒4 μl，P1，P2各0.5 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。3. hIgG1Fc片
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
CORE－SAMPLE－PCR
A method to re-PCR unique bands from products of mixed sizeContentsINTRODUCTIONPROTOCOLCOMMENTSINTRODUCTIONThe products of a PCR reaction - especially
PCRSSCP
一. 样品的制备1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析，设定引物，引物长度18-21个碱基，扩增片段以200-300bp最为合适。2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量3-5ul。PCR产物为10
Methylation－Specific－PCR
Methylation Specific PCRProtocol written by James Herman*Methylation Specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the meth
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合