巢式PCR
实验方法原理 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性。 由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部,而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小,因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。巢式PCR反应模式图实验材料 基因样品试剂、试剂盒 PCR缓冲液Tris·HClKClTaq聚合酶仪器、耗材 PCR仪实验步骤 1. 目标的DNA模板蓝色的第一对引物结合。第一对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断(图中未显示可能的多种产物)。2. 使用图中红色标记的第二套引物对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。第一轮1.  ......阅读全文
巢式PCR
基本方案 实验方法原理 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对P
巢式PCR
巢式PCR可应用于:(1)病毒检测;(2)测序分析;(3)低表达基因检测。实验方法原理由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性。 由于第二套引物位于第一轮PCR产物
巢式PCR
实验方法原理 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性。 由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部,而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小,因此第二套引
巢式PCR反应
巢式PCR通过两轮PCR反应,使用两套引物扩增特异性的DNA片断。第二对引物的功能是特异性的扩增位于首轮PCR产物内的一段DNA片断。
巢式PCR实验
巢式PCR标签: 巢式 PCR巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。实验方
巢式PCR的定义
巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通 PCR相似。第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于,如果第一
3巢式PCR的步骤
第一步:目标的DNA模板蓝色的第一对引物结合。第一对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片段(图中未显示可能的多种产物)。 第二步:使用图中红色标记的第二套引物对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。 由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部,
巢式PCR(Nested-PCR)定义、原理和步骤
巢式PCR的定义巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通 PCR相似。第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增。巢 式PCR的好处
巢式引物的概念
中文名称巢式引物英文名称nested primer定 义为巢式聚合酶链反应所设计的引物,第二组引物是在第一组引物扩增得到的产物序列范围内设计的。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
巢氏PCR(Nested-PCR)技术的定义和特点
1.定义:也称套式PCR是指利用两套PCR引物(巢式引物)进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。在这种技术中,首先用一对外引物进行第1轮PCR,然后再使用第1对引物扩增的DNA 序列内部的一对引物再次扩增。2.优点:由于巢式PCR反应
甘肃检验检疫局巢式NESTPCR试剂盒为番茄快速“体检”
2010年6月12日,甘肃检验检疫局技术中心外繁种子检疫重点实验室一项技术发明―――检测番茄溃疡病菌的巢式NEST-PCR试剂盒获得国家知识产权局ZL授权。 这项凝聚着技术人员心血、耗时3年的实用新型ZL,揭开了该局外繁种子检疫重点实验室解决种子检疫关键技术的序幕。 科研团队
何谓巢式聚合酶链反应?
巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction, nPCR)也称套式PCR。在这种技术中,首先用一对外引物进行第1轮PCR,然后再使用第1对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩增,所以称为巢式PCR。由于使用了两对引物并且进行了两轮扩增反应,因此试验的
巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称巢式聚合酶链反应英文名称nested PCR定 义由两次相继进行的聚合酶链反应组成的一种PCR技术,其中第二次PCR是在第一次PCR反应产物序列范围内进行扩增的,借以提高PCR的成功率和分析的特异性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
半巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称半巢式聚合酶链反应英文名称semi-nested PCR;hemi-nested PCR定 义第二次PCR反应的引物只有一个,另一个是用第一次PCR反应的一个引物的一种PCR技术。此法是在无法获得理想的第二次引物时采用。对提高灵敏度和特异性仍有助益。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科)
淋病的实验室诊断和药敏分析(三)
(2)PCR引物的设计 由于淋球菌隐蔽质粒CPPB基因在淋球菌染色体中和4.2kb隐蔽质粒中都有存在,同时在96%的淋球菌中都有该隐蔽质粒,因此很多PCR引物设计在CPPB基因区。 靶基因 引物序列 片段长度(bp)CPPB NG1 5′GTT TGG C
现在都有什么PCR技术
反转录PCR,荧光定量实时PCR,巢式/半巢式PCR,锚定PCR,单链构象多态性PCR,免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特
T细胞归巢的概念
中文名称T细胞归巢英文名称T cell homing定 义T细胞借助其表面归巢受体与胸腺或外周淋巴器官内皮细胞表面地址素相互作用,定向迁移至淋巴组织的过程。应用学科免疫学(一级学科),免疫系统(二级学科),免疫细胞(三级学科)
PCR技术迈入第三代-微滴式数字PCR
你说世界变化快不快,PCR已经迈入第三代!近日,一种称为微滴式数字PCR(ddPCR™)的新技术出现在《Analytical Chemistry》杂志上,它能够确定样品中待测靶分子的绝对数目。 第一代PCR就是我们目前最常用的终点PCR技术,通过凝胶电泳获得定性的结果。风靡全球的实时定
如何提高扩增效率和PCR的特异性
引物引物设计:引物长度适当,18-24mers,并保证序列独特性,以降低序列在非目的片段中存在的可能性,但长度大于24核苷的引物并不意味着有更高的特异性,较长的序列可能会与错误配对序列杂交,反而降低特异性,而且长序列比短序列杂交慢,影响产量; 引物浓度:引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0
空巢综合症的病因
心境行为因素(20%): 心境抑郁,行为退缩,这些老人可能由于本身性格方面的缺陷,对生活兴趣索然,缺乏独立自主、振奋精神、重新设计晚年美好生活的信心和勇气。 情感依赖因素(20%): 对子女情感依赖性强,正需要儿女做依靠的时候,儿女却不在身边,不由得心头涌起孤苦伶仃、自悲、自怜等消极情感。
空巢综合症的概念
据说“空巢”一说最初起源于一则童话:在一片茂密的山林里,栖息着很多小鸟,它们有的在翩翩起舞,有的在歌唱,然而在这片山林里,却有一对老鸟趴在窝中,它们心中感叹着:孩子们的翅膀硬了,都飞走了,剩下我们两个老的好凄凉、好孤单…… 单从字义上讲,空巢就是“空寂的巢穴”,比喻小鸟离巢后的情景,现在被引申
空巢综合症的症状
1、精神空虚,无所事事 子女离家之后,父母从原来多年形成的紧张有规律的生活,突然转入松散的、无规律的生活大辩论态,无法很快适应,进而出现情绪不稳、烦躁不安、消沉抑郁等。 2、孤独、悲观、交往少 对自己存在的价值表示怀疑,陷入无趣、无欲、无望、无助状态,甚至出现自杀的想法和行为。 3、躯体
趋化因子的炎症归巢作用
炎症归巢作用:炎症趋化因子在感染或损伤过程中产生高浓度,并决定炎症性白细胞向受损区域的迁移。典型的炎性趋化因子包括:CCL2、CCL3和CCL5、CXCL1、CXCL2和CXCL8。一个典型的例子是CXCL-8,它是中性粒细胞的趋化剂。与稳态趋化因子受体相比,结合受体和炎症趋化因子存在明显的混杂。这
空巢综合症的诊断
子女离家之后,父母从原来多年形成的紧张有规律的生活,突然转入松散的、无规律的生活大辩论态,们无法很快适应,进而出现情绪不稳、烦躁不安、消沉抑郁等。 孤独、悲观、交往少 对自己存在的价值表示怀疑,陷入无趣、无欲、无望、无助状态,甚至出现自杀的想法和行为。 躯体化症状 受“空巢”应激影响产生
淋巴细胞归巢的概念
淋巴细胞归巢是以淋巴细胞表面的归巢受体与血管内皮细胞表面的黏附分子——血管地址素的相互作用为基础定向移动的一种迁移活动,在淋巴细胞的成熟、再循环以及向炎症部位渗出过程中均会发生。
趋化因子的基础归巢作用
基础归巢作用:在胸腺和淋巴组织中产生的基础的稳态趋化因子。趋化因子CCL19和CCL21(在淋巴结和淋巴管内皮细胞中表达)及其受体CCR7(在细胞中注定要归巢到这些器官的细胞中表达)是它们在归巢中的稳态功能的最好例证。利用这些配体可使抗原呈递细胞(APC)在适应性免疫应答过程中转移至淋巴结。其他的稳
裂谷热诊断技术-PCR方法
RT-PCR已经用于蚊子和临床样品中RVFV的检测。Sall等用RT-PCR对NS(S)蛋白编码区进行序列分析,用于系统发育分析以鉴定病毒的两个不同谱系,发现一个是埃及的,另一个是撒哈拉的,使得RT-PCR成为分子流行病学的有力工具。Ibrahim等从M节段的高度保守的区域设计了两对PCR引物用于R
3’RACE-实验心得
引子:从06年12月份开始,断断续续做了一个多月的3’RACE,有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验,受益匪浅。在这里,我就自己的经历略作总结,希望能给像我一样的新人们有点启示,少走些弯路,不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择:3’RACE从原理上就能明白,它比5’RACE 要容易得多,所
引才归巢,南昌在87所高校设赣才归巢工作站
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/2/494083.shtm 据,为精准传达南昌强劲的发展势头、贴心的政策、舒心的服务,点对点推送南昌优质的就业岗位,南昌在全国87所高校设置赣才归巢工作站。 越来越多的赣籍学子感受到南昌求贤若渴的诚意,
现在到底有多少种类PCR
1、RT-PCR: RT-PCR 原理:首先提起RNA,然后用逆转录酶与MRNA为模板进行CDNA第一链的合成,然后的原理和PCR就一样了! RT-PCR意义:RT-PCR是个半定量的试验,可以确定在MRNA水平的表达差异,即在转录水平 ! 2、免疫PCR(immuno p