用TaqDNA聚合酶进行双脱氧测序反应实验
热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外，还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下（70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题，它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材微量离心管（0.5 ml) 或微量滴定板装有多孔加热板的程控热循环仪可加热到 65°C 的水浴实验步骤材料缓冲液和溶液试剂、缓冲液、储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。去离子蒸馏水（冰预冷）dd......阅读全文
聚合酶链反应构建重组DNA
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材 电泳仪离心机PCR仪实验步骤 1. 制备模板DNA，如DNA不是经氯化铯梯度纯化的，100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷酸引物，若PCR产物要进行平端克隆，就应该对引物的5’端羟基进行磷酸化处理。 图一
T4－DNA聚合酶实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材 水浴锅实验步骤 一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，pH8.0（2）5 mmol/l MgCl2（3）5mmol/l DTT（4）100 μmol/l 4dNTP混合液（5
耐热DNA聚合酶的选择指南
耐热DNA聚合酶特点：合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DNA聚
聚合酶链反应构建重组DNA
2016年09月12日 15:27 来源:上海江林生物科技有限公司>>进入该公司展台 实验材料DNA试剂、试剂盒TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材电泳仪离心机PCR仪实验步骤1. 制备模板DNA，如DNA不是经氯化铯梯度纯化的，100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷
耐热DNA聚合酶的应用介绍
DNA序列测定中应用的耐热DNA聚合酶 1.Promega公司测序级TaqDNA聚合酶 是在TaqDNA聚合酶的基础上对它进行修饰,去除5'-3'外切酶活性,保证测序记过的高度准确性,可产生强度均一的测序条带,背景清晰。 2.Bca Best DNA 聚合酶 从Bacil
T4－DNA聚合酶实验
T4 DNA聚合酶 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
耐热DNA聚合酶的选择指南
一、耐热DNA聚合酶特点合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热 DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DN
DNA聚合酶作用部位及功能
DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；2、3’→5’'外切酶活
关于DNA聚合酶的历史简介
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事们就想到DNA的复制必然是一种酶的催化作用，于是决心分离出这种酶并研究其结构和作用机制。为了达到这个目的，他们分离的蛋白，然后加到体外合成系统中即 同位素标记的dNTP、Mg2+及模板DNA，经过大量的工作，于1956年终于发现了DNA聚合酶Ⅰ（
DNA聚合酶的用途和缺陷
用途聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物，3’末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基，而这个碱基几乎总是A，因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性，故可用T载体克隆。缺点无3’→5’阅读校正功能，在PCR扩增过程可引起错配，30次循环
T4－DNA聚合酶实验
T4 DNA 聚合酶具依赖人为模板的聚合酶活性，同时具有对单链、双链DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。实验材料DNA试剂、试剂盒Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材水浴锅实验步骤一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，p
DNA聚合酶及DNA连接酶的功能和区别
DNA聚合酶，以已有的核酸序列作为模板，将4种脱氧核苷酸（A、T、G、C）按照模板的碱基排列顺序，以“碱基互补原则”依次连接，聚合成为一条新的DNA链。 DNA连接酶，是将DNA片段上的缺刻连接起来的酶。 一、DNA聚合酶 （一）DNA聚合酶I DNA聚合酶I（DNA pol
Tth－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Tth DNA聚合酶英文名称Tth DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于嗜热细菌(Thermus thermophilus) 的耐热DNA聚合酶，有逆转录活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Mlu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Mlu DNA聚合酶英文名称Mlu DNA polymerase定 义来自藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Taq－DNA－聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有
Vent－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Vent DNA聚合酶英文名称Vent DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。从极端嗜热细菌(Thermococcus litoralis)中提纯的耐热DNA聚合酶，有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR产物为平端。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（
关于DNA聚合酶I的功能简介
1）通过核苷酸聚合反应，使DNA链沿5’→3’方向延长（DNA聚合酶活性） 2）催化由3’端水解DNA链（3’→ 5’核酸外切酶活性，用于切除错配的碱基） 3）催化由5’端水解DNA链（5’→ 3’核酸外切酶活性，用于切除引物） 4）催化由3’端使DNA链发生焦磷酸解 5）催化无机焦磷酸
Vent－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Vent DNA聚合酶英文名称Vent DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。从极端嗜热细菌(Thermococcus litoralis)中提纯的耐热DNA聚合酶，有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR产物为平端。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（
Mlu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Mlu DNA聚合酶英文名称Mlu DNA polymerase定 义来自藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Taq－DNA－聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有
Pfu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Pfu DNA聚合酶英文名称Pfu DNA polymerase定 义存在于嗜热古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐热DNA聚合酶，兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Pfu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Pfu DNA聚合酶英文名称Pfu DNA polymerase定 义存在于嗜热古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐热DNA聚合酶，兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
DNA聚合酶的特性、用途和缺点
特性良好的热稳定性;70℃ 2h，残留90%活性;93℃ 2h，残留60%活性;94℃ 2h，残留40%活性。5'→3'聚合酶活性，对dATP有优先聚合活性;5'→3'外切酶活性;无3'→5'外切酶活性。用途聚合酶链反应(polymerase chai
Tth－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Tth DNA聚合酶英文名称Tth DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于嗜热细菌(Thermus thermophilus) 的耐热DNA聚合酶，有逆转录活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
T4DNA聚合酶的用途
(1)利用取代合成反应制备探针(2)标记具有平末端的或具有3’－隐蔽末端的DNA片段利用较强的3 ′→ 5 ′外切酶活性和 5′→3′聚合活性(3)用于DNA序列分析
DNA聚合酶与复制的保真性
DNA复制的保真性是遗传信息稳定传代的保证。生物体至少有3种机制实现保真性：①遵守严格的碱基配对规律；②5’—3’聚合酶活性中心对底物的选择，使核苷酸的错配率仅为10-4~10-5；③3’—5’外切酶活性中心在复制出错时的即时校对，使错配率降至10-6~10-8。
T7－DNA聚合酶测序技术
一、概述T7 DNA聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及单链和双链3'→5'外切酶活性。当T7 DNA聚合酶用适当方法处理后，可使3'→5'外切酶活力明显下降。改造后的T7 DNA聚合酶又称T7测序酶。使用T7测序酶得到的测序数据具有在每个碱
耐高温DNA聚合酶的相关介绍
特性 良好的热稳定性； 70℃ 2h，残留90%活性； 93℃ 2h，残留60%活性； 94℃ 2h，残留40%活性。 5’→3’聚合酶活性，对dATP有优先聚合活性； 5’→3’外切酶活性； 无3’→5’外切酶活性。 用途 聚合酶链反应(polymerase chain re
大肠杆菌DNA聚合酶的介绍
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ）这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶，又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 ⑴理化性质：纯化的DNApolⅠ由一条 多肽链组成，约含1000个 氨基酸残基，
DNA聚合酶外切酶活性─校对作用
外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA 生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有 聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明