放射自显影和从测序凝胶上读取DNA序列实验

本实验介绍关于放射自显影和从测序凝胶上读取 DNA 序列的过程。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化学发光标记物参见附录 9。可重复使用的放射性墨水主要是选择 Stratagene 的冷光标记物(Glosos)。标记物能被多次运用而且应该恰拾在一个新的放射自显影循环之前被暴露在荧光灯下。凝胶DNA 测序胶准备和电泳见方案 8~11。特殊设备放射自显影暗盒(金属,弹簧 35.6 cmX43.2 cm)放射增感屏每个胶片需要两个大的增强的钨酸钙屏幕(例如,LighteningPlus,Dupont)。80°C 的凝胶干燥机凝胶干燥机应该被连接在一个真空系统上。聚脂薄膜片(在长和宽上比凝胶大约 5 cm)聚脂薄......阅读全文

DNA碱基序列决定其光敏性

DNA分子在所有生命形态中扮演着遗传信息载体的角色,对紫外光的修改具有高度的抵抗性,但要理解其光稳定性的机制还存在一些令人费解的问题,一个重要方面是构成DNA分子的4种碱基之间的相互作用。德国基尔大学的研究人员成功地证明,DNA链因其碱基序列而有不同的光敏感性。相关研究结果刊登在最近出版的《科学》(

细菌DNA序列可作信息“存储器”

  阿根廷科学家近日成功将该国国歌旋律以人工基因编码形式植入某种细菌染色体中。这一方法不仅可以用来存储音乐旋律,还可能发展为一种拥有巨大应用潜力的信息存储方式。   据阿根廷媒体报道,主持研究的阿根廷信息生物学家费德里克·普拉达介绍说,生物的DNA(脱氧核糖核酸)由四种脱氧核苷酸组成,即腺嘌呤、胸

着丝粒DNA序列的基本信息

中文名称着丝粒DNA序列英文名称centromere DNA sequence定  义真核细胞染色体着丝粒部位可与动粒结合的DNA序列。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)

DNA核苷酸序列冈崎片段的介绍

  冈崎片段是相对较短的DNA核苷酸序列(真核生物中大约有150到200个碱基对长),它们的合成是不连续的,并随后通过DNA连接酶连接在一起,形成DNA复制过程中的滞后链。冈崎片段是20世纪60年代两位日本分子生物学家、名古屋大学的一对校友夫妇冈崎令治和冈崎恒子共同发现的。

Nature:科学家发现最古老DNA序列

  动物的遗传信息最长可以保存多久?一百万年!  2月17日,据《自然》上线的一项研究报道,古生物学家在西伯利亚东北部的永久冻土层中提取并解析了3头猛犸象的遗传物质,它们分别来自于70万年、100万年和120万年前。研究者解析了西伯利亚冻土中的猛犸象遗传信息,这刷新了古动物DNA的年代纪录。(图片来

DNA序列分析电泳仪技术参数

电泳仪电源按电压分为高压1500~5000V、中压500~1500V、低压500V以下三种;按电流分为大电流500mA~2000mA、中电流100~500mA、小电流100mA以下三种;按功率分为大功率200~400W、中功率60~200W、小功率60W以下三种。基本参数外形尺寸(L×W×D):47

测序技术及DNA序列测定结果分析

实验概要 在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和   Gilbert(1977)发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的

PCR技术(十五):个体配子DNA序列的PCR分析

高等生物遗传图谱的构建依赖于选择性杂交后代的分析或者通过家系分析法来计 算连锁关系。对人类而言仅后者是可行的。使用长度多态性限制片段(RFLPS)在构 建人连锁图谱方面已取得长足的进步。为了对带有与已知表现型相关的RFLP标记的基 因进行定位,首先得建立间隔约10CM的遗传标记束(平均1CM等于1%

《科学》:首次不使用酶扩增得到目的DNA序列

来自加州理工大学计算与神经系、牛津大学物理学系和贝尔实验室(Bell Laboratories)的研究人员在DNA环路(DNA-based circuits)设计上获得了一项重要的飞跃性成果:首次不使用酶扩增得到目的DNA序列,这是迈向创造细胞内人工生化环路(artificial biochemic

新“基因魔剪”按需敲入长DNA序列

北京11月27日电 据最新一期《自然·生物技术》发表的一项研究,在CRISPR基因编辑系统的基础上,美国麻省理工学院研究人员设计了一种新工具,可以更安全、更高效的方式剪除有缺陷的基因并用新基因替换它们。 使用这个系统,研究人员可将长达36000个DNA碱基对的基因传递给几种类型的人类细胞,以及小

AluPCR:用重复序列引物扩增来源复杂的人DNA

引言  聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命,但应用PCR分 离,分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列,这使扩增局限于已知DNA序列。我 们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是,我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的

Nature:DNA重复序列是否致病取决于什么?

  DNA重复序列在人类基因组中是很常见的。重复序列已经被提出作为一种进化机制,但是它们可能与人类疾病相关。现在,马克斯-普朗克分子遗传学研究所和Charité – Universitätsmedizin Berlin的科学家已经证明,DNA重复序列是否与人类疾病相关,取决于它们在基因组中的位置,序

DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验

实验材料 样品试剂、试剂盒 双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪器、耗材 加湿盒热循环仪实验步骤 1.  将载有固定样品的载玻片置105℃加热块上5~120 s。 2.  载玻片放入含0.3%H2O2中,于37℃或室温温育过夜,以灭活内源性过氧化物酶活性,然后以

-新技术可确定DNA序列源于母亲还是父亲

  生活中常听到这样的对话:张家闺女真漂亮,和她妈一模一样;李家儿子小眼睛,像他爸。张妈妈到底是不是“无功空受禄”,而李爸爸又有没有蒙受“不白之冤”?有了本文的新技术,一切自有分晓。当然,这只是玩笑。正如文中所说,新技术的真本事,在于评估染色体病患病风险等方面。举个例子,具有较高患癌风险的人通常有多

新研究利用DNA序列追溯植物演化关键事件

  来自北美、欧洲和中国的科学家最新研究揭示了地球植物演化过程中的重要过渡细节,该研究成果于2014年10月27日发表在《美国科学院院刊》上。  从外来藻类植物、苔藓植物、蕨类植物、生长在潮湿热带雨林中的花草树木、人们食用的谷子、蔬菜到家中的观赏植物,地球上的现生植物共同经历了长达十亿多年的历史。 

DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验

原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。实验材料样品试剂、试剂盒双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪

新算法将更好组装DNA序列-检测特殊遗传突变

  刊登在国际杂志Bioinformatics上的一项研究论文中,来自杨百翰大学(Brigham Young University)的研究人员开发了一种新方法来进行人类基因组的装配,而且这或许可以帮助鉴别引发常见遗传障碍的新型突变。  这种新方法依赖于一种新算法,其可以非常敏感地检测DNA序列的特异

将四字校训变成DNA序列进行存储读取

  当摩尔定律逐渐接近极限时,寻找新的存储介质就显得迫在眉睫。12月5日,记者从东南大学获悉,该校师生将“止于至善”的校训翻译成英文后进行四进制编码,并以DNA(脱氧核糖核酸)分子形式存储在电极表面,再最终读取出来,这引发了未来对高通量自动化DNA存储的无限想象。相关成果近日发表于国际学术期刊《科学

DNA微阵列检测基因表达水平及识别基因序列

  Schena等1996年用拟南芥光调基因微阵列,以不同器官中的mRNA为探针,检测其基因表达水平,结果表明叶mRNA的表达水平是根的500倍。Shelon等1996年将酿酒酵母基因组DNA克隆制成微阵列,用6条最大染色体和10条最小染色体DNA探针分别标记上红,绿荧光标记进行杂交检测,结果表明9

《自然》:美开发DNA序列分拣碳纳米管新法

  碳纳米管为长形细小的石墨圆筒,具有电子学和热力学等多方面的特征,这些特征随着碳纳米管的形状和结构变化而有所不同。人们发现,碳纳米管多重性特征致使其本身有能力应用于电子学、激光器、传感器和生物医学,同时也能作为复合材料中的增强元素。   目前用于生产碳纳米管的方法所获得的是由粗细各异和对

DNA测序新突破:新纳米孔通过电流变化检测DNA序列

  在个体化医疗前景的诱惑下,研究人员将研发出更有效的基因测序新方法视为首要任务。如今,宾夕法尼亚大学物理学家利用固态的纳米孔区分单链DNA分子,这一有前景的技术,在DNA穿过纳米孔时,通过检测电流变化进而读取DNA序列。相关研究发表在《ACS Nano》期刊上。  领导这项研究的是艺术与科学学院物

序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验DNA亲和介质制备

实验材料两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐) pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶(New Eng

序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验_DNA亲和层析法

实验材料制备性的DNA亲和层析树脂试剂、试剂盒缓冲液Z或其他柱缓冲液(如缓冲液Ze或TM)配制时含不同的KCl浓度(从缓冲液 Z 0.1 mol L KCl 至缓冲液 Z 1 mol L KCl对缓冲液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分纯化的蛋白质组分非特异性的竞争DNA柱再生缓冲液柱储存缓

核糖体DNA的重复单元的序列同质性

在大型的rDNA序列,rDNA的重复单元之间的多态性非常低,这表明rDNA的串联阵列通过协同进化演变。在对9种果蝇的5S串联重复序列区域彼此进行比较后得出的结果表明,因这一区域插入和删除较为频繁,在5'端以及3'端两侧发现有保守序列。他们可能在DNA复制或通过基因转换的过程中发生新合

Cell-Rep:DNA序列重复会引发遗传性疾病

  近日,来自塔夫斯大学的研究人员通过研究揭示,DNA链中长的核苷酸重复会导致基因组的不稳定,最终会引发遗传性疾病的发生,比如Freidreich征和亨廷顿病等,相关研究刊登于国际杂志Cell Reports上。  研究者认为,当细胞分裂或细胞中DNA修复机制激活时就会在DNA复制过程中形成长的重复

Cell-Rep:DNA序列重复会引发遗传性疾病

  近日,来自塔夫斯大学的研究人员通过研究揭示,DNA链中长的核苷酸重复会导致基因组的不稳定,最终会引发遗传性疾病的发生,比如Freidreich征和亨廷顿病等,相关研究刊登于国际杂志Cell Reports上。  研究者认为,当细胞分裂或细胞中DNA修复机制激活时就会在DNA复制过程中形成长的重复

直接检测着丝粒DNA序列的PCR技术问世了!

  X形的染色体中心是有着“DNA的最后边界”之称的“着丝粒”,在维持日常细胞分裂中起重要作用,同时它也与出生缺陷、癌症等涉及细胞分裂的疾病息息相关。  如今,一种新技术终于可以帮助人类一窥着丝粒的秘密。密歇根大学医学院的研究人员已经用它找到了着丝粒在唐氏综合征(多了1条21号染色体)中所扮演的角色

加深癌症了解!新基因工具可按时序编辑DNA序列

  据物理学家组织网23日报道,美国研究人员在最新一期《分子细胞》杂志撰文指出,他们发明了一种新基因编辑技术,可按时间顺序对切割点或编辑点进行编辑,有望促进癌症研究等领域的发展。  基因编辑领域的“当红炸子鸡”CRISPR使科学家能改变细胞内DNA的序列,或添加所需序列或基因。CRISPR使用名为C

Science:重磅!定制分子有望治疗DNA重复序列导致的疾病

  弗里德希氏共济失调(Friedreich's ataxia)是一种罕见的致命性遗传疾病。与至少40种其他的遗传疾病(比如脆性 X 染色体综合征和一些肌肉萎缩症类型)一样,它是由阻止蛋白正确形成的DNA重复序列导致的。这些DNA重复序列能够含有上百个相同的短DNA序列(如GAAGAAGAA

关于DNA标记的酶切扩增多态性序列介绍

  CAPS技术又称为PCR—RFLP,它实质上是PCR技术与RFLP技术结合的一种方法。CAPS的基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19—27bp),然后用这些引物扩增该位点上的某一DNA片段,接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得扩增产物,凝胶电泳分离酶切片段,