PCR技术（十五）：个体配子DNA序列的PCR分析
高等生物遗传图谱的构建依赖于选择性杂交后代的分析或者通过家系分析法来计 算连锁关系。对人类而言仅后者是可行的。使用长度多态性限制片段（RFLPS）在构 建人连锁图谱方面已取得长足的进步。为了对带有与已知表现型相关的RFLP标记的基 因进行定位，首先得建立间隔约10CM的遗传标记束（平均1CM等于1％重组），这样没 有基因离标记RFLP的距离会超过5CM。可靠的统计表明家系分析能够检测的遗传间距 精确到1cM(1cM相当于1000kb的DNA。分析更小的遗间距需要检测家族内大量的个体， 而这实际上是行不通的。 最近发展了一种不依赖遗传交叉或家系分析的方法检测遗传标记间的重组频率。 具体方法是直接决定配子(精子)的基因型是亲本型还是重组型。这通过确定两个等位 基因中哪一个存在于双杂合男性精子上的两个基因座点其中之一来完成。根据上述方 法确定的重组精子的数量被总检测精子数除就可估计出重组频率。已知聚合酶反应在 体外扩增基因能够使DN......阅读全文
PCR技术（十五）：个体配子DNA序列的PCR分析
高等生物遗传图谱的构建依赖于选择性杂交后代的分析或者通过家系分析法来计 算连锁关系。对人类而言仅后者是可行的。使用长度多态性限制片段（RFLPS）在构 建人连锁图谱方面已取得长足的进步。为了对带有与已知表现型相关的RFLP标记的基 因进行定位，首先得建立间隔约10CM的遗传标记束（平均1CM等于1％
直接检测着丝粒DNA序列的PCR技术问世了！
X形的染色体中心是有着“DNA的最后边界”之称的“着丝粒”，在维持日常细胞分裂中起重要作用，同时它也与出生缺陷、癌症等涉及细胞分裂的疾病息息相关。 如今，一种新技术终于可以帮助人类一窥着丝粒的秘密。密歇根大学医学院的研究人员已经用它找到了着丝粒在唐氏综合征（多了1条21号染色体）中所扮演的角色
PCR技术（十七）：用PCR扩增cDNA库中的特异序列
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异DNA扩增
DNA－序列分析技术
DNA序列分析技术可用于：（1）分析物种的遗传多样性；（2）鉴定新的物种；（3）用于比较基因组学。实验方法原理本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDe
DNA－序列分析技术
实验方法原理 本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDeoy TM Terminator
DNA－序列分析技术
试剂、试剂盒 琼脂糖TE 水饱和酚无水乙醇70％乙醇TEMED测序酶溴化乙锭仪器、耗材 电泳仪离心管离心机冰浴箱恒温板DNA 测序仪
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
实验材料 样品试剂、试剂盒 双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪器、耗材 加湿盒热循环仪实验步骤 1. 将载有固定样品的载玻片置105℃加热块上5~120 s。 2. 载玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室温温育过夜，以灭活内源性过氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。实验材料样品试剂、试剂盒双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪
DNA序列分析技术2
3)电泳电极缓冲液 1 倍TBE（pH 值8.0）预电泳 30 分钟至1 小时恒温方式 测序胶板上夹盖铝恒温板电泳温度 50℃左右电泳条件 恒功率 90～110W电泳时间 2.5 小时至5 小时4)干胶制备和压片电泳结束后取下胶板，用工具撬开玻璃板，使胶留在其中一块板上。将裁剪好的新华3 号滤纸在胶
DNA序列分析技术1
物种的遗传多样性在本质上是DNA 一级序列的多样性。近年来，随着DNA 测序技术的迅速发展和日益普及，DNA 测序在遗传多样性的研究中正在起着越来越大的作用。本章将介绍目前在遗传多样性研究中常用的一种手动和一种全自动双链DNA 测序方法。1.DNA 模板的制备在遗传多样性的研究中，由于样本量一般都较
PCR技术（八）：扩增较大片段DNA的PCR方法
一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基
pcr技术扩增dna需要的条件
①PCR技术需要目的基因作为模板，①正确；②PCR技术中需要一对引物，②正确；③PCR技术中需要四种脱氧核苷酸作为原料，③正确；④PCR技术是体外扩增DNA的，不需要mRNA，④错误；⑤PCR技术需要热稳定DNA聚合酶等，⑤正确；⑥PCR技术是体外扩增DNA的技术，不需要核糖体，⑥错误．
DNA复制与PCR技术的异同
PCR技术单指体外大量复制目的基因（DNA片段）的现代生物技术，DNA先在90-95ºC解旋为单链，再在70-75ºC复性，最后在55-60ºC且在Taq酶（热稳定的DNA聚合酶）作用下合成长链DNA。
PCR技术（十三）：PCR用于进化分析
进化遗传学具有两个并列的研究方向：系统发育的重建和种群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样用于标志 现存物种分化的时间以来，各种生化方法被用于系统发育的研究。在最初二十年内， 同功酶的电泳分析、免疫学比较和蛋白质序列分析被广泛地应
PCR技术－PCR技术的应用
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。
PCR技术－PCR技术的应用
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。
PCR技术－PCR技术的应用
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也
新型PCR分析方法毛细管PCR技术
常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样品温度要比槽板温度滞后20—30s，加上槽板升降温度较慢(1’C／s)，因此30个循环反应通常需要2～6h，循环时间多浪费在加热和冷却样品过程中，不能满足临床快速诊断的需要。毛细管PCR由于采用导热性远强于塑料管的毛细管作为反应
新型PCR分析方法毛细管PCR技术
新型PCR分析方法毛细管PCR技术 常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样品温度要比槽板温度滞后2030s，加上槽板升降温度较慢（1C／s），因此30个循环反应通常需要2～6h，循环时间多浪费在常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样
PCR技术（一）：PCR技术概论
PCR技术概论PCR技术简史PCR技术的基本原理PCR反应体系与反应条件PCR反应特点PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出
PCR仪DNA产量的很低原因分析
可能的原因:*RNA模板质量低、*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大,不应超过50μl
DNA的PCR扩增及Southem－blot分析
DNA存在于细胞核和线粒体内．携带遗传信息，决定着细胞和个体的遗传性状。细胞DNA的检测有助于了解DNA的特征，如复制、表达以及变异情况等，从而在分子水平研究细胞的生物学特征，细胞的DNA检测主要包括DNA的提取及检测。检测方法有多种，如PCR、限制性片段长度多态性(restriction
PCR技术（九）：PCR扩增产物的电泳分析
凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种.一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在 37℃下维持液体
PCR技术（十四）：反向PCR
描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩 增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列，但其方向性，使链的延长经过环上的未知区而不是分开引
PCR技术（三）：Taq－DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的.(一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比
PCR技术（七）：mRNA差异PCR技术
生物界的丰富多彩很大程度上取决于严格调控下的基因的选择性表达。高等生物的细胞内约含有105个不同的基因，而主 基因在某个特定的细胞中，只有占15％的一小部分表达。而且在不同的细胞中，选择性表达的基础也是不同的。正是这些基因的选择不同决定了整个生命的过程：如细胞的生长分化，激素和细胞困子对细胞的作用、
PCR技术（六）：PCR技术应用进展
PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术 原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应，它结
pcr技术扩增dna需要的条件是什么
Pcr 技术扩增DNA 需要的条件是:DNA模板链，脱氧核苷酸原料， TaqDNA的聚合酶，引物等。
PCR技术应用社会学DNA的检测
目前广泛采用的 DNA 测序方法有化学法和双脱氧法两种,它们对模板的需要量比较大。利用 PCR 方法可以比较容易地测定位于两个引物之间的序列。利用 PCR 测序有下列几种方法。(1)双链直接测序将 PCR 产物进行电泳回收或利用分子筛等方法除去小分子物质。采用热变性或碱变性的方法使双链 DNA 变成
pcr技术扩增dna需要的条件是什么
Pcr 技术扩增DNA 需要的条件是:DNA模板链，脱氧核苷酸原料， TaqDNA的聚合酶，引物等。