亚甲基蓝介导光交联反应检测蛋白质与双链RNA的相互作用

亚甲基蓝介导的光交联反应是对紫外交联反应的一个补充。亚甲基蓝属于酚噻嗪类染料。由于其环结构,亚甲基蓝可以在较低的浓度同核酸结合,插入碱基。浓度较高时,亚甲基蓝带阳离子,可以与磷酸二酯骨架通过静电力结合。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理亚甲基蓝介导的光交联反应是对紫外交联反应的一个补充。亚甲基蓝属于酚噻嗪类染料。由于其环结构,亚甲基蓝可以在较低的浓度同核酸结合,插入碱基。浓度较高时,亚甲基蓝带阳离子,可以与磷酸二酯骨架通过静电力结合。实验材料RNA试剂、试剂盒亚甲基蓝水溶液结合缓冲液RNase储存液SDS上样缓冲液维生素C水溶液实验步骤一、材料与设备1. 亚甲基蓝(MB)水溶液,2.5 mg/ml。-20℃ 避光保存。2. [ α-32P ] 标记的 RNA。如果转录模板未被 DNase 消化,dsDNA 可以同 MB 结合而增加交联反应所需的 MB 浓度。如果操作中便用互补的 ssRNA 则需要先对其......阅读全文

双链RNA抑癌原理

双链RNA抑癌原理是通过构建对癌症细胞特异蛋白转录后得到的mRNA的反义RNA,从而通过碱基结合使得该蛋白表达被阻断而最终导致癌细胞正常代谢通路受阻等,绝非所谓的食用后能够起到抑癌作用;

双链RNA病毒的特点

双链RNA病毒有两个特点:一是它的基因组为10-12条双链RNA分子;二是它有双层衣壳,而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中,在该聚合酶的作用下病毒基因组转录正链RNA,它们自髓核逸出。它们既能作为mRNA,又能作为病毒基因组的模板。MRNA翻译结构蛋白,装配内层衣壳后,正链RNA进

​双链RNA病毒的特点

双链RNA病毒有两个特点:一是它的基因组为10-12条双链RNA分子;二是它有双层衣壳,而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中,在该聚合酶的作用下病毒基因组转录正链RNA,它们自髓核逸出。它们既能作为mRNA,又能作为病毒基因组的模板。MRNA翻译结构蛋白,装配内层衣壳后,正链RNA进

双链RNA病毒的复制

虽然同为双链核酸分子,但双链RNA的复制方式和双链DNA不同,双链RNA不是半保留复制,而是全保留复制,复制需要经过mRNA中间体。双链RNA病毒有两个特点,一是它的基因组为10-12条双链RNA分子;二是它有多层衣壳,而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中,在该聚合酶的作用下病毒双链

双链RNA结合域的特点

中文名称双链RNA结合域英文名称dsRNA-binding domain定  义双链RNA或RNA中的双链区能被特异蛋白质所结合的区域。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

双链RNA的基本信息

双链RNA是基因选择性表达一种常见方式。反义RNA与正链RNA结合可抑制正链翻译。此外双链RNA还存在于tRNA中。双链RNA抑癌原理是通过构建对癌症细胞特异蛋白转录后得到的mRNA的反义RNA,从而通过碱基结合使得该蛋白表达被阻断而最终导致癌细胞正常代谢通路受阻等,绝非所谓的食用后能够起到抑癌作用

双链RNA病毒的复制介绍

  双链RNA病毒有两个特点,一是它的基因组为10-12条双链RNA分子;二是它有双层衣壳,而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中,在该聚合酶的作用下病毒基因组转录正链RNA,它们自髓核逸出。它们既能作为mRNA,又能作为病毒基因组的模板。MRNA翻译结构蛋白,装配内层衣壳后,正链RN

细胞化学词汇双链RNA结合域

中文名称;双链RNA结合域英文名称:dsRNA-binding domain定  义:双链RNA或RNA中的双链区能被特异蛋白质所结合的区域。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

RNAi——双链RNA引起的基因敲除(1)

1995年,康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都阻断了基因的表达,他们对这个结果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究证明,在正义RNA也阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA[1]。这些双链RNA是体外

RNAi——双链RNA引起的基因敲除(2)

在构建双链RNA的表达载体时,使用RNA多聚酶Ⅲ来指导RNA的合成。这是因为RNA多聚酶Ⅲ有明确的启始和终止序列,而且合成出的RNA不会带有polyA尾。当RNA多聚酶Ⅲ遇到连续5个胸腺嘧啶时,它指导的转录就会终止,并且转录产物在第二个尿嘧啶处被切下来。U6启动子能被RNA多聚酶Ⅲ识别, 合

RNAi实验中双链短RNA(dsRNA)制备过程

RNAi 实验中双链短RNA(dsRNA)制备过程,本实验方法来自于加州大学Jim教授实验,很权威!Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi1. Design polymerase chain reaction (PCR ) prim

植物中独特双链RNA合成机制获解析

  中科院分子植物科学卓越创新中心研究员张余团队和研究员王佳伟团队与浙江大学教授冯钰团队合作,首次解析了Pol IV-RDR2蛋白复合物的三维结构,并提出了Pol IV-RDR2以双链DNA为模板合成双链RNA的独特分子机制。该研究成果12月24日在线发表于《科学》。Pol IV-RDR2复合物三维

纳米介导双链RNA可防治番茄潜叶蛾

近日,针对新发重大入侵害虫番茄潜叶蛾,中国农业科学院植物保护研究所农业入侵生物预防与监控创新团队研发了纳米介导双链RNA的应用体系,为后续利用RNA干扰技术防治番茄潜叶蛾奠定了基础。纳米载体递送dsRNA防控番茄潜叶蛾示意图。中国农科院供图番茄潜叶蛾是世界检疫性害虫,主要以幼虫潜食危害番茄、马铃薯等

依赖双链RNA的蛋白激酶的基本信息

中文名称依赖双链RNA的蛋白激酶英文名称doublestranded RNA-dependent protein kinase;PKR定  义对干扰素敏感的细胞经干扰素处理后能诱导产生的一种蛋白激酶。在双链RNA的激活下可使蛋白质合成起始因子eIF-2磷酸化而失活,从而阻止蛋白质合成,抑制病毒的复制

依赖双链RNA的蛋白激酶的基本信息

中文名称依赖双链RNA的蛋白激酶英文名称doublestranded RNA-dependent protein kinase;PKR定  义对干扰素敏感的细胞经干扰素处理后能诱导产生的一种蛋白激酶。在双链RNA的激活下可使蛋白质合成起始因子eIF-2磷酸化而失活,从而阻止蛋白质合成,抑制病毒的复制

用RNase-Ⅲ-消化长片断双链RNA制备siRNA的方法特点

其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版,用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA ,然后用RNase Ⅲ (or

用RNase-Ⅲ-消化长片断双链RNA制备siRNA的技术特点

其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版,用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA ,然后用RNase Ⅲ (or

果蝇RNAi的实验中双链短RNA的合成(dsRNA)方法

实验概要We routinely produce dsRNA by in vitro transcription of a PCR generated DNA template containing the T7 promoter sequence on both ends (I. Prim

果蝇RNAi的实验中双链短RNA的合成(dsRNA)方法

本文来自于哈佛大学医学院果蝇RNAi筛选中心的经典实验方法,专门用于果蝇RNAi实验方法。感谢哈佛大学医学院果蝇RNAi筛选中心的支持!Primer Designed dsRNATemplate SelectionPCRIn vitro RNA TranscriptiondsRNA Purifica

我国研究团队解析植物中独特的双链RNA合成机制

  转座子(transposon)最早由美国遗传学家Barbara McClintock在玉米中发现,在细菌、病毒以及真核生物的基因组中广泛分布。转座子类似内源性病毒,能够在宿主基因组中“复制和粘贴”自己的DNA,以达到其自我“繁殖”的目的。活跃的转座子对基因组的稳定构成严重威胁,高等生物通过对转座

果蝇Dicer2结合双链RNA加工生成siRNA的分子机制

RNA干扰(RNAi)是许多真核生物中一种保守的RNA沉默机制, 小干扰RNA是RNA干扰的关键组成部分。在小RNA的加工过程中,Dicer家族蛋白起到了重要的作用,它们发挥作用的过程中常需要双链结合蛋白(dsRBP)作为辅因子来帮助它们发挥功能。在果蝇中,siRNA的产生是由ATP依赖型的Dice

双链螺旋结构特点

每一螺旋恒等周期中所包含的单体单元数目随取代基的大小以及相互作用情况而异。一般用p/g来表示螺旋结构的形式,其含义是在一个恒等周期中有p个单体单元,螺旋q圈。如全同聚苯乙烯晶区的分子链为3/1(TG)螺旋构象,在这种结构中反式和左右式交替排列。而间同立构的聚苯乙烯则可能形成4/1(TTGG)螺旋构象

细胞化学词汇双链

中文名称:双链英文名称:double strand定  义:两条核酸单链分子通过碱基互补作用而形成的结构,可以是DNA-DNA双链、DNA-RNA双链或RNA-RNA双链。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

同源双链的概念

中文名称同源双链英文名称homoduplex定  义由相同的或从同一来源的两个分子所构成的分子。如从同一来源的两条核酸单链构成的DNA-DNA或RNA-RNA双链就是同源双链。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

单链RNA的结构特点

中文名称单链RNA英文名称single-stranded RNA;ssRNA定  义只含有一条链的RNA分子。生物体中绝大部分RNA是单链RNA,形成二级结构时,是既有单链、又有双链结构域的RNA分子;只有某些RNA病毒是由两条链互补而成的双链RNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与

双RNA测序技术

在发表于《自然》(Nature)杂志上的一篇研究论文中, 由来自德国、奥地利和美国的研究人员组成的一个研究小组发现,采用一种允许在感染过程中同时研究细菌与宿主小RNA的新技术,可以揭示出两者转录谱的改变。该研究小组描绘了他们的技术、该技术如何更多地帮助了解细菌感染机制,以及在研究中获得的重要发现

双RNA病毒介绍

本科病毒形态与呼肠孤病毒相似,过去归于呼肠孤病毒科,亦曾作为分类地位 未定的病毒。1973年,当人们认识到该科成员中的传染性胰坏死病毒和传染性 法氏囊病病毒在形态学上很相似,尤其是它们的基因组都含有双股双节段RNA后 ,建议设立一个新科。1984年正式命名为双RNA病毒科。在国际病毒分类委员会(IC

防控食品有害生物的新型核酸药剂——嵌合体双链RNA

  2021年5月26日,J. Agric. Food Chem.在线发表了题为《Chimeric Double-Stranded RNAs Could Act as Tailor-Made Pesticides for Controlling Storage Insects》的研究论文,南京财经大

细胞化学词汇双链体

中文名称:双链体英文名称:duplex定  义:双链核酸分子或单链分子中的一个双链区。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

双链体形成的过程

中文名称双链体形成英文名称duplex formation定  义在适宜的条件下,核酸分子中互补碱基相互配对形成双链区的过程。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)