双向电泳操作步骤——组织来源的蛋白质样品的溶解和制备
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS尿素仪器、耗材离心管转子实验步骤1. 称重后将样品加入Dounch匀浆器。每100 mg 组织加入1.5~2.0 ml SDS/或尿素/溶解缓冲液,用B号研棒冲击50次,然后以A号研棒冲击50次。2. 放置几分钟后,取一小份样品于200 ul 离心管100 000 g 离心2 h 以上或在200 000 g 以上离心1 h。保留上清(蛋白样品)。加样于第1向凝胶上。 注意事项在离心前,样品在SDS/溶解缓冲液中煮沸5 min,千万不要在尿素/溶解缓冲液中加热样品。在第1向电泳前离心样品。......阅读全文
蛋白质谱样品制备指南(一)
研究过蛋白的人都能深刻体会其复杂性和多功能性,为解决蛋白研究的困境,应运而生了一系列技术、方法、仪器等。质谱技术就是其中一个典型代表,常被用于几个蛋白研究的重要方向:蛋白基础功能探究(结构、相互作用核酸/蛋白/蛋白组、修饰功能等),蛋白鉴定(定位、机理等),蛋白定量等。 很多初入门者一般谈“谱”色变
蛋白质谱样品制备指南(二)
1 蛋白提取 1. 细胞或组织样品裂解细胞裂解及高效地蛋白提取对于高质量的蛋白纯化至关重要。以下提供针对细菌、哺乳动物、酵母和植物细胞的裂解方案,以取得较之传统物理裂解法更高的蛋白得率,甚至可从细胞样品中选择性提取目的蛋白及总蛋白的、亚组分蛋白,以及线粒体、叶绿体、细胞核、高尔基体及溶酶体等重要的细
蛋白质组样品制备程序2
2)在4℃条件下以20000g的离心力冷冻离心60分钟 (离心力务必达到或大于20000g)。3)移取上清溶液。若上清样品不立即使用,则须储存于-80℃(最佳条件)或-20℃的无霜冰箱中以防止蛋白质的降解。2、用初始缓冲液(Start buffer)交换处理细胞裂解液1)在上述细胞裂解液中,加入初始
蛋白质组样品制备程序1
一、样品制备试剂的准备二、细菌细胞样品的裂解处理步骤三、人培养细胞样品的裂解处理步骤四、膜蛋白裂解方法步骤一、样品制备试剂的准备1、裂解缓冲液储备液的准备下述本样品制备方法已经过优化, 并被证明配合使用PF-2D 试剂盒可获得最佳的结果。您若选择其他的样品处理和细胞裂解方法,请务必避免使用离子型的表
制备填充柱操作步骤(三)
7)拔掉进样口端的小漏斗,加入一条玻璃棉,塞紧。8)如果是玻璃柱,要先在两端各套上一个胶圈,防止螺母落下时打碎柱。9)在柱上做标记后(推荐挂金属小牌),装入柱温箱中老化。注意事项:如果是玻璃柱,在操作中要小心折断。但是玻璃柱由于是透明的,可以看到填充效果;不锈钢柱虽然不会折断,可是在填充时看不到效果
制备填充柱操作步骤(一)
1)把空柱竖直架在滴定架上,两端向上,夹紧。2)色谱柱有两种,一种是两端一样长的,另一种是两端一长一短的,两端一样长的在填充时不分方向,而两端一长一短的则有方向性,长的一端接进样口,短的一端接检测器;装柱前要将小三角漏斗接在进样口的一端;用250px长的软橡胶管将柱和漏斗套在一起,注意要套得紧一些,
制备填充柱操作步骤(二)
4)把约1250px长的硅橡胶管(普通橡胶管也行,但效果略差)一头接在抽气机上(套上一层纱布以防止填料被抽入抽气机内),另一头挡在空柱接检测器一端。5)在小漏斗里加入少许填料(1-2mL),用橡胶棒轻轻敲击空柱使载体落入柱管中,开动抽气机1-2s再关闭,使这少许载体快速到达玻璃棉部位并形成有效阻塞。
农药残留检测仪样品制备及样品测定步骤
农药残留检测仪主要用于检测有机磷和氨基甲酸酯两大类农药,在使用农药残留检测仪时要进行样品制备。 样品制备步骤: 1、擦去果蔬样品表面泥土,称取1g果蔬样品(叶菜剪成宽度1厘米左右的菜样,块根菜取横截面样品)放入烧杯或提取瓶中,加入5mL缓冲溶液,振摇2分钟。 2
透射电镜生物样品制备步骤
一.取材:组织块小于1立方毫米二.固定: 2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次1%锇酸固定液固定 2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次三.脱水:
透射电镜生物样品制备步骤
生物样品, 透射电镜, 制备步骤一.取材:组织块小于1立方毫米二.固定:2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次1%锇酸固定液固定 2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次三.脱水:50%乙醇 15-20分70%乙醇 15-20分90%乙醇
样品的采集、制备和保存(六)
不同水样和不同的被测物要求使用不同的保存试剂。zui常用的保存试剂是酸。加酸保存能控制水样的pH值,也能大大抑制和防止微生物的絮凝和沉降,减少容器表面的吸附。在测定金属的水样中,通常需加入O.05~0.1mol/L的硝酸或盐酸。加碱保存也能抑制和防止微生物的代谢过程。在测定氮化物的水样中,必须加入N
乙烯的制备来源
乙烯是合成纤维、合成橡胶、合成塑料(聚乙烯及聚氯乙烯)、合成乙醇(酒精)的基本化工原料,也用于制造氯乙烯、苯乙烯、环氧乙烷、醋酸、乙醛和炸药等,也可用作水果和蔬菜的催熟剂,是一种已证实的植物激素。
蛋白质的性质实验原理和操作步骤12
2. 不可逆的沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质的分子内部结构,空间构象遭到破坏,失去其天然蛋白质的性质,这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中,这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超生波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。重
人类外周血染色体制备原理和操作步骤
一、原理人外周血小淋巴细胞,通常都处在G1期(或G0期),一般情况下不进行分裂。如在培养液中加入植物血凝素(PHA),这种小淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞,进入有丝分裂。短期培养后,经秋水仙素处理,低渗和固定,即可得到大量的有丝分裂细胞。人体的1ml外周血内一般含有约1×106~3×106个小淋
蛋白质样品的制备要注意哪些事项
1. 避免冷冻干燥 尽管有一些蛋白是经冷冻干燥处理后长出了晶体,但是大多数情况下并非如此。所以要尽可能避免冷冻干燥。如果蛋白已经这样了,准备点晶体之前,要用水或者缓冲液透析,除掉非挥发性的试剂和其他化学物质。 2. 避免硫酸铵沉淀 避免硫酸铵沉淀法作为纯化的最后一步或使用硫酸铵沉淀法来浓缩
蛋白质样品的制备实验报告怎么写
蛋白质样品的制备实验报告应包括以下内容:1. 实验目的:明确本次实验的目的,例如提取蛋白质样品,纯化目标蛋白等。2. 实验原理:简要介绍所用方法的原理,例如SDS-PAGE,western blot等。3. 实验步骤:详细描述实验过程中所采用的步骤和操作方法,例如细胞裂解,离心,电泳等。4. 实验结
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
1.SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2.匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3.转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
生物制品的制备来源和目标产物
生物制品系指以微生物、寄生虫、动物毒素、生物组织作为起始材料,采用生物学工艺或分离纯化技术制备,并以生物学技术和分析技术控制中间产物和成品质量制成的生物活性制剂,包括菌苗,疫苗,毒素,类毒素,免疫血清,血液制品,免疫球蛋白,抗原,变态反应原,细胞因子,激素,酶,发酵产品,单克隆抗体,DNA重组产品,
样品的制备
6 分析步骤6.1样品的制备测定前,应保证实验室样品至少在室温(20℃~25℃)下保持48h,以便使影响不溶度指数的因素,在各个样品中趋于一致。然后反复振荡和反转样品容器,混合实验室样品。如果容器太满,则将全部样品移入清洁、干燥、密闭、不透明的大容器中,如上所述彻底混合。对于速溶乳粉,应小心地混合,
蛋白质技术——双向电泳
实验概要蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1000个E.coli蛋白,并表明蛋白质谱不是稳定的,而是随环境而变化. 双向电泳原理简明,第一向进行等电聚焦,蛋白质沿pH梯度分离,至各自的等电点;随后,再沿垂直的方向进行分子
血清的分离制备方法和步骤
相信楼主分离血清是用于检测,而不是用于治疗。我告诉你一个简单实用的方法。我这个方法使用的器械主要就是一次性注射器。采血量看你需要的血清量来定,一般据我观察,释出的血清约为全血量的三分之一到二分之一这样。也就是你采5ml血可能得2.5ml左右的血清。当然了,必须说清楚的是能不能释出血清,因方法和猪个体
血清的分离制备方法和步骤
相信楼主分离血清是用于检测,而不是用于治疗。我告诉你一个简单实用的方法。我这个方法使用的器械主要就是一次性注射器。采血量看你需要的血清量来定,一般据我观察,释出的血清约为全血量的三分之一到二分之一这样。也就是你采5ml血可能得2.5ml左右的血清。当然了,必须说清楚的是能不能释出血清,因方法和猪个体
血清的分离制备方法和步骤
分离血清是用于检测,而不是用于治疗。我告诉你一个简单实用的方法。我这个方法使用的器械主要就是一次性注射器。采血量看你需要的血清量来定,一般据我观察,释出的血清约为全血量的三分之一到二分之一这样。也就是你采5ml血可能得2.5ml左右的血清。当然了,必须说清楚的是能不能释出血清,因方法和猪个体的不同,
组织芯片的的构建原理和步骤
1.选取待研究的组织。现在人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究,包括肝脏,前列腺,心脏,乳房等等,据相关数据显示,在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分,微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。2.经检测后标记出待研究的区域。组织微阵列的检测仪主要是
妊娠产物及其他固体组织来源样本的培养及制备实验
实验材料组织样本试剂、试剂盒含标准抗生素的 HBSS 溶液仪器、耗材完全培养基培养皿解剖器械塑料组织培养瓶实验步骤基本方案1.用无菌解剖器械将组织标本放入含有5 mlHBSS及5倍浓度抗生素的35 mm 培养皿中。室温下放置>30 min。2.将组织标本转移至一个新的含有约 2 ml 完全培养基/F
FFPE组织样品的DNA和RNA纯化
福尔马林固定后石蜡包埋的组织简称为FFPE样品。将组织在 4–10% 的福尔马林中迅速固定。 固定时间限制在 14–24 小时 (越长的固定时间将越容易导致DNA的片段化,对下游实验不利)。将固定组织彻底脱水 (彻底脱去福尔马林残余,因为其阻碍蛋白酶K的作用)。 纯化DNA时,使用新鲜从石蜡块上切下