双向电泳操作步骤——组织来源的蛋白质样品的溶解和制备
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS尿素仪器、耗材离心管转子实验步骤1. 称重后将样品加入Dounch匀浆器。每100 mg 组织加入1.5~2.0 ml SDS/或尿素/溶解缓冲液，用B号研棒冲击50次，然后以A号研棒冲击50次。2. 放置几分钟后，取一小份样品于200 ul 离心管100 000 g 离心2 h 以上或在200 000 g 以上离心1 h。保留上清（蛋白样品）。加样于第1向凝胶上。 注意事项在离心前，样品在SDS/溶解缓冲液中煮沸5 min，千万不要在尿素/溶解缓冲液中加热样品。在第1向电泳前离心样品。......阅读全文
试述蛋白质样品制备技术的原则
1.避免冷冻干燥尽管有一些蛋白是经冷冻干燥处理后长出了晶体，但是大多数情况下并非如此。所以要尽可能避免冷冻干燥。如果蛋白已经这样了，准备点晶体之前，要用水或者缓冲液透析，除掉非挥发性的试剂和其他化学物质。2.避免硫酸铵沉淀避免硫酸铵沉淀法作为纯化的最后一步或使用硫酸铵沉淀法来浓缩蛋白。因为硫酸铵很难
蛋白质印迹法的样品制备
1、单层贴壁细胞总蛋白的提取： （1）倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 （2）每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两
SDSPAGE－蛋白质样品的制备
试剂、试剂盒SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMEDTris-甘氨酸电泳缓冲液溴酚蓝考马斯亮蓝 R-250 染色液考马斯亮蓝脱色液仪器、耗材离心机冷室水浴锅电泳装置微量移液器水平摇床滤纸实验步骤实
利用高通量组织研磨仪提取植物DNA样品详细操作步骤
DNA一直是生物学中重要研究对象，通过它的遗传特性也能为农业育种提供巨大帮助，今天小编就针对植物DNA的提取为大家做下介绍，其中着重讲一讲样品的研磨步骤： 一、样品研磨 1) 取1g的样品放入2ml样品管中； 2) 加入1-2粒5mm研磨珠； 3) 加入1ml的CTAB 抽提液
正确采集和制备气体样品方法与完美步骤－l
空气样品的采集是十分重要的，它决定了检测结果的真实性、准确性和可靠性。城市环境的空气质量监测、民用建筑的室内空气质量监测、工作场所空气中有害物质控制等领域都涉及空气样品的采集。但大气中各被检组分有各自不同的特色，加上空气的可流动性、各检测点周边环境的复杂性以及众多影响因素的不确定性，给空气质量检
扫描电镜植物样品制备的详细步骤
切取大小约 5mm × 5mm ,长 3mm ～4mm 的茎组织块。 用 3 % 戊二醛固定 2 h ,漂洗后 ,经 35 % 、 50 % 、 60 % 、 70 % 、 95 % 、 100 % 、 100 %各 l h 的乙醇系列脱水 , 过 渡到纯二甲苯 , 在室温浸腊 ( 溶点
扫描电镜植物样品制备的详细步骤
切取大小约 5mm × 5mm ,长 3mm ～4mm 的茎组织块。 用 3 % 戊二醛固定 2 h ,漂洗后 ,经 35 % 、 50 % 、 60 % 、 70 % 、 95 % 、 100 % 、 100 %各 l h 的乙醇系列脱水 , 过 渡到纯二甲苯 , 在室温浸腊 ( 溶点
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
实验方法原理 肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。实验材料 鼠肝试剂、试剂盒 二硫苏糖醇（DTT)抽提溶液苯甲基硫酰
土壤样品的制备和保存
从野外取回的土样，经登记编号后，都需经过一个制备过程——风干、磨细、过混匀、装瓶，以备各项测定之用。样品制备目的是：①剔除土壤以外的侵入体（如植物残茬、昆虫、石块等）和新生体（如铁锰结核和石灰结核等），以除去非土壤的组成部分；②适当磨细，充分混匀，使分析时所称取的少量样品具有较高的代表性，以减少称样
动物样品的采集和制备
动物的尿液、血液、唾液、胃液、乳液、粪便、毛发、指甲、骨骼和组织等均可作为检验样品。1、尿液动物体内绝大部分毒物及其代谢产物主要由肾经膀胱、尿道随尿液排出。尿液收集方便，因此，尿检在医学临床检验中应用广泛。尿液中的排泄物一般早晨浓度较高，可一次收集，也可以收集8h或24h的尿样，测定结果为收集时间内
小鼠心脏组织蛋白样品的蛋白质组学分析
实验概要本实验提供了一个心脏组织2-DE蛋白样品制备及检测的流程，为蛋白质双向电泳实验做好准备。实验步骤1. 心脏组织2-DE蛋白样品的制备 1) 将冷冻的小鼠心脏组织在液氮条件下研磨成粉末； 2) 然后加入5 x体积蛋白裂解液(7 M Urea, 2 M Thiourea, 40 mM
组织和细胞RNA的制备
一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助
Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（1）
一．原理Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。其基本步骤包括：1. 完整mRNA的分离2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离3. 将RNA 转移到固相支持物上，在转移的过程中，要保持RNA 在凝胶中的相
兔肝RNA的制备及测定实验原理和操作步骤
实验原理细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA 时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高，适合
Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（2）
(4) 将1 ~ 2 μl RNA 上样缓冲液加到乙二醛化的RNA 样品中，然后马上把RNA样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将RNA 相对分子质量标准参照物加到最外面的孔中。(5) 以5V/cm 的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约8 cm。(6) 将凝胶放在保鲜膜上，在紫外灯下
感受态菌的制备原理、仪器试剂和操作步骤
1．目的学会CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞。2．原理细菌在0℃ CaCl2低渗溶液中胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA的状态。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，50ml 微量离心管，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式冷冻离心机，制冰机，恒温摇床，分光光度计
生物样品研磨仪操作步骤
宝予德Easy Extract生物样品研磨仪是一种开放、快速、、高通量的生物样品预处理破碎系统。可快速同时处理24个样本，通过配套不同的试剂可将各种不同来源(包括土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等)的样本进行细胞破碎处理，快速释放出原始DNA、RNA和蛋白质，
碘量法测定溶解氧的操作步骤
操作步骤(1)溶解氧的固定用吸管插入溶解氧瓶的液面下,加入1 ml硫酸锰溶液、2 ml碱性碘化钾溶液,盖好瓶塞,颠倒混合数次,静置。待棕色沉淀物降至瓶内一半时,颠倒混合一次,待沉淀物下降到瓶底。一般在取样现场固定。(2)析出碘轻轻打开瓶塞,立即用吸管插入液面下加入2.0 ml硫酸。小心盖好瓶塞,颠倒
蛋白质的双向电泳实验
等电聚焦法 实验方法原理 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离;
蛋白质的双向电泳实验
实验方法原理 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点
如果样品溶解度太低如何上制备HPLC？
（1） 了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等, 以达到较好的溶解度。（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂（如丙酮等）以助溶。 （3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择甲醇，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤取 20 mg 异硫氰酸荧光素，加 20 ml 无水乙醇，使 FITC 充分溶解，即为染色液的原液，保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下：1. FITC 贮存液的稀释：用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓度的工作液，备用。2. 被染色细胞首先用 70% 酒精破
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤 取 20 mg 异硫氰酸荧光素，加 20 ml 无水乙醇，使 FITC 充分溶解，即为染色液的原液，保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下：1. FITC 贮存液的稀释：用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤 取 20 mg 异硫氰酸荧光素，加 20 ml 无水乙醇，使 FITC 充分溶解，即为染色液的原液，保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下：1. FITC 贮存液的稀释：用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 μg/ml 浓度的工作液，备用。2. 被染色细胞首先用 70% 酒精
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤 取 20 mg 异硫氰酸荧光素，加 20 ml 无水乙醇，使 FITC 充分溶解，即为染色液的原液，保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下：1. FITC 贮存液的稀释：用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓
蛋白质印迹的操作步骤
(1)蛋白质样品的制备 :有两种方法(直接加样缓冲液来裂解细胞,制备细胞蛋白质提取液)。(2)十二烷基酸钠-聚丙烯电泳(SDS-PAGE分离原理:根据蛋白质的分子差异)电泳:在直流电场作用下,带电的粒子向着与自身电荷相反的方向移动的现象。电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。(3)蛋白质的电转移 采用
卡那霉素的功能作用和制备来源
卡那霉素，是一种蛋白质生物合成抑制剂，通过与30S核糖体结合从而致使mRNA密码误读。若细菌中产生一种破坏卡那霉素的酶，则可变为抗性株。卡那霉素抗性的质粒经常被作为选择基因或标记基因用于分子克隆中。它可以用于口服和静脉注射，对多种病菌感染有效，从卡那霉素链霉菌（Streptomyces kanamy
双向电泳(twodimensional－electrophoresis)操作步骤及相关溶液
实验相关试剂配制1.Bradford 工作液95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250,溶解完后再加磷85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml.过滤后置于棕色瓶考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存（Bradford不稳定，一周内有效）2.裂解液尿素 8M硫脲 2MC
电镜组织化学技术样品制备
良好的样品制备是电镜酶细胞化学技术成功的关键。酶电镜组织化学 样品制备要求既要保存酶的活性，同时又要保存细胞的超微结构。并能防止酶反应产物扩散。每种酶对固定液的要求和显示方法虽不尽相同。但电镜酶组织化学的基本程序相似，下面简要介绍其基本要求： 1．取材 组织标本的取材是样品制备的第一步，
蛋白质谱样品制备指南（一）
研究过蛋白的人都能深刻体会其复杂性和多功能性，为解决蛋白研究的困境，应运而生了一系列技术、方法、仪器等。质谱技术就是其中一个典型代表，常被用于几个蛋白研究的重要方向：蛋白基础功能探究（结构、相互作用核酸/蛋白/蛋白组、修饰功能等），蛋白鉴定（定位、机理等），蛋白定量等。 很多初入门者一般谈“谱”色变