蛋白质含量的测定实验——考马斯亮蓝法
实验方法原理考马斯亮蓝G250 在酸性溶液时呈茶棕色, 最大吸收峰在465 nm。当与蛋白质结合后变成深蓝色, 最大吸收峰转至595 nm, 在1~100 μg/ ml 蛋白质浓度范围内成正比。实验材料蛋白质试剂、试剂盒考马斯亮蓝G250乙醇碳酸钠氢氧化钠硫酸铜酒石酸钠钨酸钠钼酸钠蒸馏水磷酸浓盐酸硫酸锂液体溴酚酞仪器、耗材722S 型分光光度计电子天平离心机容量瓶试管吸管实验步骤1. 样品的制备用台秤称取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾钵碾成匀浆, 加水30 ml , 继续碾10 min , 倒入离心管中, 另加5 ml水将剩余物洗进离心管, 平衡后于1000 r/ min 离心15 min , 取上清10 ml 定容到100 ml , 待测。2. 标准曲线的制作与样品测定按下表操作,A . FOLIN 酚法 B . 考马斯亮蓝法(标: 标准蛋白质溶液, F :......阅读全文
各级分蔗糖酶活性测定及纯化率计算实验_考马斯亮蓝法
用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度,本实验中,蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min,每产生1毫克葡萄糖所需酶量。本实验旨在测定各级分的蛋白质含量及蔗糖酶活性。实验方法原理用测定生成还原糖( 葡萄糖和果糖) 的量来测定蔗糖水解的速度, 本实验中, 蔗糖酶的活力单位指在一定
考马斯亮兰法(Bradford法)测定蛋白浓度实验原理
双缩脲法(Biuret法)和Folin―酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到
考马斯亮蓝法测蛋白浓度,具体步骤
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后
考马斯亮蓝染色试剂盒
考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法) 简介: 本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝 R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转
考马斯亮兰法(Bradford法)测定蛋白浓度
(一)实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin―酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点
考马斯亮兰法(Bradford法)测定蛋白浓度
实验概要双缩脲法(Biuret法)和Folin―酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而
考马斯亮蓝染色的相关-内容介绍
蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是
考马斯亮蓝的主要用途
考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue)一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
用考马斯亮蓝法测定植物体内可溶性蛋白质的含量
实验概要植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类,测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时,常以比活(酶活力单位/mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此,测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。
用考马斯亮蓝R-250染色
用考马斯亮蓝R-250染色1.凝胶的固定液中轻微摇荡至少1小时。2.凝胶在染色液中摇荡过夜或至少1小时。3.胶在脱色液中摇荡过夜或至少1小时以消除背景。4.凝胶放于保存液中至少4小时以进一步脱色。在最初的1小时内换两次溶液,以后每一小时换一次溶液。5.封好的胶置于保存液中,4℃下最少可保存5年。
常用生物染色剂:考马斯亮蓝
考马斯亮蓝有G250和R250两种,在颜色索引(Colour Index)中给出了不同的编号(42655和42660)。亮蓝G和亮蓝R在冷水中分别为微溶和不溶,在热水和乙醇中分别为可溶和微溶。两种染料均能对固定的蛋白进行有效地染色,使用浓度为溶于甲醇:冰醋酸:水(50:10:40)的0.05%溶
考马斯亮兰法的实验操作方法
标准方法(1)取16支试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分为两组按表中顺序,分别加入样品、水和试剂,即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入:0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml,然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮
考马斯亮兰法的实验试剂与器材
试剂:(1)标准蛋白质溶液,用 g—球蛋白或牛血清白蛋白(BSA),配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。(2)考马斯亮兰G—250染料试剂:称100mg考马斯亮兰G—250,溶于50ml 95%的乙醇后,再加入120ml 85%的磷酸,用水稀释至1升。器材:(1)可见光分光光度
蛋白质标准曲线的制作(马斯亮蓝法)
一、实验目的和内容目的: 学习考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度的原理和方法内容:制作测定蛋白质浓度的标准曲线。制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。考马斯亮蓝法测定蛋
可溶性蛋白质考马斯亮蓝G250法测定的原理
考马斯亮蓝G-250(GooMAssIe BrIllIAnT Blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nM,后者在595nM。在一定蛋白质浓度范围内(1~100μg)
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理、步骤及注意事项
蛋白质浓度测定的方法有很多,考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的一种方式,它利用比色法和色素法混合方法、操作简便,下文介绍了考马斯亮蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。 实验原理考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的
细胞骨架观察实验—考马斯亮蓝染色法
实验方法原理荧光免疫染色法显示细胞骨架具有清晰优点,但操作过程较复杂;考马斯亮蓝染色法简便易行,清晰度稍差,但如分化处理适当能提高清晰度。实验材料细胞试剂、试剂盒磷酸二氢钠磷酸氢二钠戊二醛甲醇冰醋酸蒸溜水考马斯亮蓝仪器、耗材培养瓶实验步骤1. 固定液准备0.1 M 磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H
考马斯[亮]蓝染色剂的应用特点
中文名称考马斯[亮]蓝英文名称coomassie [brilliant] blue定 义广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
考马斯[亮]蓝染色剂的作用特点
中文名称考马斯[亮]蓝英文名称coomassie [brilliant] blue定 义广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
考马斯亮蓝G250溶液的配制
染色液配制: 1 mol/ L 盐酸溶液(A) ,1 g/ L CBB G250 溶液(B) ; 应用时用1 ml A 液和15 ml B 液混合加水至1 L , 搅拌混匀。注意,关键所在是应用的时候再混合,不要配好等着染色。就不会出现你说的那种现象了。
一文了解细胞骨架的考马斯亮蓝法观察
狭义的细胞骨架(cytoskeleton)概念是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系(微管(microtubule, MT)、微丝(microfilament, MF )及中间纤维(intermediate filament, IF )组成的体系)。它所组成的结构体系称为“细胞骨架系统”,与细胞内的遗
考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)
考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)简介:本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检
蛋白胶染色,您还在用考马斯亮蓝?
无需加热,2分钟显色,10分钟完成染色,无需脱色即可观察!聚合美蛋白染色试剂“染立显”超敏超速无毒不加热蛋白染胶液(货号:MF767),不含甲醇乙酸,安全无毒,灵敏度高,可用于SDS-PAGE胶(变性)及Native胶(非变性),也可以用于Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的染色。 蛋白
考马斯亮蓝溶液为什么不能长期保存
教给你一种新配法染色液配制: 1 mol/ L 盐酸溶液(A) ,1 g/ L CBB G250 溶液(B) ; 应用时用1 ml A 液和15 ml B 液混合加水至1 L , 搅拌混匀。应用的时候再混合,不要配好等着染色。就可以延长保存时间了。
考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)
考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法) 简介: 本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝 R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转
考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么
不可以的 会变质的 那就是隔段时间测样品蛋白含量的时候,必须重新作标曲了再测了?qwk123(站内联系TA):D;):(杨丹8918(站内联系TA):tiger13:王会征(站内联系TA)没问题啊,我放半年多了照样使用啊。silicare(站内联系TA)你是说考马斯亮蓝,还是加了蛋白之后的考马斯亮蓝
考马斯亮蓝G250法测定的仪器与试剂介绍
一、考马斯亮蓝G-250法测定的仪器与用具:721分光光度计;10Ml量筒1个;研钵;烧杯;量瓶;移液管:1Ml 3支,0?1Ml 3支;10Ml具塞刻度试管14支。 二、考马斯亮蓝G-250法测定的试剂: 1、标准蛋白质溶液:用牛血清白蛋白配成含蛋白质100μg/Ml的标准蛋白溶液; 2
考马斯亮蓝G250法测定真蛋白的方法介绍
考马斯亮蓝法是由考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质通过范德华引力结合,使蛋白质染色,通过比色测定蛋白质含量的方法。该方法精密度高,RSD为1.70%,结果准确, 相对误差较小,回收率98.2%~100.3%。考马斯亮蓝G-250 与蛋白质结合的反应十分迅速且稳定,这一方法具有灵敏度高、干扰物质少、测定
关于考马斯亮蓝R250的基本介绍
考马斯亮蓝R-250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合的一种物质,用于SDS电泳微量蛋白质染色。 考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)。C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳
考马斯亮蓝的结构和化学性质
Coomassie brilliant blue G-250分子结构如图《Coomassie brilliant blue G-250》。考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。游离状态的考马斯亮蓝G250 在酸性溶液中呈蓝偏绿色,与蛋白质结合后呈蓝色,蛋白质含量与颜色的深浅成正比,经595nm 测