考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理、步骤及注意事项

蛋白质浓度测定的方法有很多,考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的一种方式,它利用比色法和色素法混合方法、操作简便,下文介绍了考马斯亮蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。 实验原理考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰(lmax)的位置,由465 nm变为 595 nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。考马斯亮蓝染色法的突出优点是:(1)灵敏度高,据估计比Lowry......阅读全文

考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理、步骤及注意事项

蛋白质浓度测定的方法有很多,考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的一种方式,它利用比色法和色素法混合方法、操作简便,下文介绍了考马斯亮蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。 实验原理考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的

考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理

实验原理       考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

考马斯亮蓝法测定蛋白质的公式

公式是根据测量结果自己算出来的:考马斯亮蓝比色法是由Bradford等人建立 的1种测定微量蛋白质的方法L5],考马斯亮蓝所含疏 水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成的蓝色蛋白质一染料复合物,在595 nm处有最大吸光度,复合物1 h内保持稳定。在一定的蛋

考马斯亮蓝法测蛋白浓度,具体步骤

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后

影响考马斯亮蓝法测定蛋白质的因素

1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多.(2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白

影响考马斯亮蓝法测定蛋白质的因素有哪些

1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多.(2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白

可溶性蛋白质考马斯亮蓝G250法测定的原理

  考马斯亮蓝G-250(GooMAssIe BrIllIAnT Blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nM,后者在595nM。在一定蛋白质浓度范围内(1~100μg)

考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量的原理是什么

在酸性条件下,考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合,导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm,同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合,测量在595 nm处的吸收值,在建立由一系列稀释的BSA建立

考马斯亮蓝测定蛋白质含量的原理是什么

你是指蛋白质还是氨基酸啊考马斯亮蓝是一种测定蛋白质含量的有效方法,但是这种显色反应要做标准曲线才可以知道确切含量而且你的是什么蛋白?氨基酸序列是什么?按照你的说法是大分子与大分子的聚合,这反应有选择性吗,如果是生成线性的,那肯定可以检测,因为只有端基参与了反应.

蛋白质染色实验——考马斯亮蓝染色

蛋白质染色可用于(1)蛋白质的观测(2)蛋白质含量的测定。实验方法原理1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便且快捷,而银染法具有相当高的灵敏度,能用于检出更少量的蛋白质。2. 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白

蛋白质定量实验_考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法

实验方法原理蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基,其化学结构中的共轭双键,具有吸收紫外光的特性,吸收高峰在280 nm处,蛋白质溶液的吸光度(A280)与蛋白质含量成正比关系,可作为样品中蛋白质定量测定。该方法简便、灵敏、快速,且样品用量少且可回收,低浓度的盐类也不干扰测定,但测定

考马斯亮蓝的染色特性

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种

考马斯亮蓝溶液的配制

教给你一种新配法染色液配制:1mol/l盐酸溶液(a),1g/lcbbg250溶液(b);应用时用1mla液和15mlb液混合加水至1l,搅拌混匀。注意,关键所在是应用的时候再混合,不要配好等着染色。就不会出现你说的那种现象了。

快速考马斯亮蓝染色实验

实验材料单向凝胶电泳分离后的蛋白样品仪器、耗材微波炉微波炉专用塑料容器实验步骤一、凝胶染色1.电泳结束后,将凝胶置于盛有试剂 A 的微波炉专用塑料容器中,试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如,一块典型的 mini 胶(8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。2

蛋白质含量测定实验——考马斯亮蓝法

实验方法原理考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250

蛋白质定量检测方法——考马斯亮蓝法

考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为

传统的考马斯亮蓝染色实验

实验材料经单向凝胶电泳或双向凝胶电泳分离后的蛋白样品试剂、试剂盒乙酸考马斯亮蓝染料脱色液仪器、耗材塑料容器实验步骤1.电泳结束后,将凝胶置于盛有 CBR-250 的塑料容器中,容器中 CBR-250 的量要足够覆盖整块凝胶。例如,一块典型的 mini 胶(8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm

关于考马斯亮蓝的性质介绍

  考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue)一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。  考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。  游离状态的考马斯亮蓝G250 在酸性溶液中呈红棕色 [1],与蛋白质结合后呈蓝色,蛋白质含量与颜色的深浅成正比,经595nm 测

蛋白质含量的测定实验——考马斯亮蓝法

实验方法原理考马斯亮蓝G250 在酸性溶液时呈茶棕色, 最大吸收峰在465 nm。当与蛋白质结合后变成深蓝色, 最大吸收峰转至595 nm, 在1~100 μg/ ml 蛋白质浓度范围内成正比。实验材料蛋白质试剂、试剂盒考马斯亮蓝G250乙醇碳酸钠氢氧化钠硫酸铜酒石酸钠钨酸钠钼酸钠蒸馏水磷酸浓盐酸硫

考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量实验

实验方法原理考马斯亮蓝G-250存在两种不同的颜色形式,红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合,在一定蛋白质浓度范围内,蛋白质和染料结合符合比尔定律(Beer?蒺s law)。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式变为蓝色形式,最大光吸收由465nm变成595nm,通过测定595nm处光吸收的增加量可知

考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量实验

实验方法原理 考马斯亮蓝G-250存在两种不同的颜色形式,红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合,在一定蛋白质浓度范围内,蛋白质和染料结合符合比尔定律(Beer?蒺s law)。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式变为蓝色形式,最大光吸收由465nm变成595nm,通过测定595nm处光吸收的

考马斯亮蓝法测蛋白质含量是多少

考马斯亮蓝法测蛋白质含量是0~1 000μg/mL。考马斯亮蓝一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。测定含量:该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100、SDS、N

考马斯亮蓝染色试剂盒

  考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)   简介:   本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝   R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转

蛋白质含量的测定——考马斯亮蓝(Coomassie-Brilliant-Blue)...

实验原理考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料

考马斯亮蓝染色的相关-内容介绍

  蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是

考马斯亮蓝的主要用途

考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue)一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。

关于考马斯亮蓝测定含量的介绍

  1、考马斯亮蓝测定含量的简介:该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。  2、考马斯亮蓝测定含量的浓染液:将100mg考马斯亮蓝G-

蛋白质定量/蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法)

实验概要运用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。实验原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0~100μg/ml),蛋白质-色素结合物在595

标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量

一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Folin-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮

考马斯亮蓝G250法测定的仪器与试剂介绍

  一、考马斯亮蓝G-250法测定的仪器与用具:721分光光度计;10Ml量筒1个;研钵;烧杯;量瓶;移液管:1Ml 3支,0?1Ml 3支;10Ml具塞刻度试管14支。  二、考马斯亮蓝G-250法测定的试剂:  1、标准蛋白质溶液:用牛血清白蛋白配成含蛋白质100μg/Ml的标准蛋白溶液;  2