WIKI资讯

从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白

实验材料脑组织试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤一、通过盐柚提从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白1. 得到沉降下来的经紫杉醇稳定了的微管。或者可以通过加紫杉醇到 20 μmol/L 来稳定用组装/解聚方法制备的微管。2. 于 37℃ 在微管中加 NaCl 使终浓度为 0.35 mol/L。3. 37℃ 在溶液下面铺几毫升含 10% 蔗糖和 10 μmol/L 紫杉醇的 PME 缓冲液，立即在 25℃ 以 45000 g 离心 30 分钟。4. 含 20 μmol/L 紫杉醇的 PME 缓冲液重悬微管，然后分装成小份（50 μl）在液氮中冷冻并贮存于 -80℃ 以备后用。5. 通过透析或凝胶渗透层析给微管相关蛋白脱盐，然后如步骤 4 贮存。二、用磷酸纤维素进行离子交换层析来纯化微管蛋白并去掉微管相关蛋白准备磷酸纤维素柱1. 磷酸纤维素悬浮在 0.5 mol/L KOH 或 NaOH 中，比例是每克磷酸纤维素用 ......阅读全文