密度梯度细胞分离法
实验方法原理制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。实验材料细胞样品试剂、试剂盒D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤通过下述方法之一制备密度梯度液:(a)分层铺放法:(i)调整 Percoll 密度至 1.10 g/CC,渗透压为 290 mOsm/kg 。(ii)将 Penroll 与不同比例的常规培养基混合达到所需的密度范围(例如,1.020~1.100 g/ml ), 一般为 10 或 20 个级差。(iii)在 25 ml 离心管中,用吸管、注射器和蠕动泵,每个密度取 1 ml 或 2 ml,从最高密度起,逐层地将一种密度液铺放在另一层上,建立起一种阶梯性密度梯度。也可以从低密度铺起,用注射器或蠕动泵,将髙一级密度的溶液注射到上一级的下面。后一种方法也许更可取。......阅读全文
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。 实验材料 细胞样品
密度梯度细胞分离法
实验方法原理制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。实验材料细胞样品试剂、试剂盒D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤通过下述方法之一制备密
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。实验材料 D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材 生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤 通过下述方法之一制备密度梯度液:(
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。 实验材料 细胞样品
密度梯度分离法分离单个核细胞(MNCs)
试剂和材料:1. 合适的培养基或冷冻液;2. PBSA;3. Ficoll-Hypague;4. 巴氏吸管;5. 50ml离心管;实验方法:1. 将脐血样品用PBSA按1:1比例稀释;2. 将15ml Ficoll-Hypague吸入50ml离心管;3. 将30mlPBSA稀释的脐血样品缓慢地加到F
免疫细胞的分离
免疫细胞的分离: (1)外周血单个核细胞的分离 外周血中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同,介于1.075-1.090之间,因而可利用一种比重介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心,使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。常用的
外周血中嗜碱性粒细胞(BASO)分离方法
Percoll密度梯度离心分离法:1、Pcrcoll混悬液的配制:Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 调节至PH7.42、制备Percoll密度梯度管密度 Percoll/HBSS(ml/ml)1.0
T细胞尼龙毛柱分离法的操作使用
在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所
植物细胞渗透势的测定(质壁分离法)
植物细胞是一个渗透体系,当其处于高渗溶液时,细胞失水,原生质体积缩小,发生质壁分离现象。反之,如将已经发生质壁分离的细胞转至低渗溶液中,细胞会重新吸水,质壁分离复原。利用植物活细胞的质壁分离可以测定植物细胞的渗透势。植物细胞的渗透势主要取决于胞液的溶质浓度,因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长
植物细胞渗透势的测定(质壁分离法)
实验概要植物细胞的渗透势主要取决于液泡的溶质浓度,因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长及抗逆性等有密切关系。已知在干旱、盐渍等条件下,一些植物常在细胞内主动积累溶质,以降低其渗透势,增加吸水能力,而在一定程度上维持细胞膨压,保障细胞的生长和气孔的开放,这种现象叫做渗透调节作用。渗透调节能力的大
细胞分离纯化—Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞
实验方法原理常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077±0.001 的 聚 蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,水性高,平均分子量为400000,当密度为1.2 g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。
采用密度梯度离心法分离脐血干细胞
利用 3 种质量浓度的聚蔗糖泛影葡胺分离液分离脐血单个核细胞,用细胞计数法、活细胞染色法及流式细胞计数仪分析单个核细胞的表面标志,以探讨密度梯度离心法分离人脐血干细胞分离介质的zui佳浓度,建立临床级干细胞分离应用方案,使用的离心机设备为冷冻离心机 脐血由于其来源容易,所含细胞种类和数
密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理
密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是:常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是1.077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,_W水性高,平均分子量为400,000,当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理
采用密度梯度离心法分离脐血干细胞
利用 3 种质量浓度的聚蔗糖泛影葡胺分离液分离脐血单个核细胞,用细胞计数法、活细胞染色法及流式细胞计数仪分析单个核细胞的表面标志,以探讨密度梯度离心法分离人脐血干细胞分离介质的zui佳浓度,建立临床级干细胞分离应用方案,使用的离心机设备为冷冻离心机 脐血由于其来源容易,所含细胞种类和数量比较
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等.取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑 (1) 细胞纯度; (2) 细胞获得量; (3) 细胞活力; (4) 使用方法的简易程度和本室条件等.测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取
密度梯度的概念
只针对流体而言,由于流体的密度差异会引发液体或气体的流动。在空气动力学中有一个名词叫水平气压梯度力,即单位水平距离内的气压差。液体因为密度梯度力的存在,在水平方向上总是由高密度区流向低密度区。
流式细胞术分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞
一、试剂及配制1. RPMI-1640培养基:应选购不含酚红的,使用时加入5%的小牛血清。2. FITC-抗CD3单克隆抗体:FITC为异硫氰酸荧光素,CD3为T细胞表面特有的蛋白质分子(分化抗原)。二、操作方法1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离单个核细胞,用RPMI-1640培养基配成1×
对提升阴性分离法的靶细胞纯度的建议
·良好的回收和纯度基于高质量的MNC制备,其中颗粒细胞和血小板的数量要低。·在混匀步骤使用HulaMixer™样品混合器(目录编号15920D)以确保有足够的抗体与靶细胞相结合。·在抗体结合步骤之后对细胞进行良好的洗涤,以去除未结合的抗体。·2X rosetting方案能够提升细胞纯度,而不增加分离
质壁分离法测定植物细胞的渗透势
【原理】 将植物 组织放入一系列不同浓度的蔗糖溶液中,经过一段时间,植物细胞与蔗糖溶液间将达到渗透平衡状态。如果在某一溶液中细胞脱水达到平衡时刚好处于临界质壁分离状态,则细胞的压力势ψ p下降为零。此时细胞液的渗透势ψ s等于外液的渗透势ψ s0,即ψ s=ψ s0,此溶液称为该组织的等渗
利用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
实验概要本实验用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化了外周血单个核细胞。实验原理常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,犌W水性高,平均分子量
用于PBMC-单核细胞的密度梯度离心分离
PBMC 单核细胞的密度梯度离心分离血液主要由血清和血细胞组成,主要包括红细胞,白细胞和血小板等。白细胞还可以细分为淋巴细胞和单核细胞等。由于这些细胞具有简单的细胞核,统称为外周血单核细胞 (PBMC)。PBMC 单核细胞可通过 Ficoll 密度梯度离心的方法,从血液中进行分离。在 Ficoll
分离法之升华
升华固态物质不经液态直接转变成气态的现象,可作为一种应用固-气平衡进行分离的方法。可分为常压升华、真空升华和低温升华。
薄层色谱分离法
(一)薄层色谱法的特点 设备简单,操作方便。只须一块玻璃板和一个层析缸。分析原理与经典柱上色谱相同、但是在敞开的薄层上可以检查混合物的成分是否分开可观察。快速,展开的时间短。比纸上色谱快速。一般纸上色谱需要几小时至几十小时薄层色谱一般只需十几分钟或几十分钟。使用无机吸附剂,薄层色谱可以采用腐
薄层色谱分离法
(一)薄层色谱法的特点 设备简单,操作方便。只须一块玻璃板和一个层析缸。分析原理与经典柱上色谱相同、但是在敞开的薄层上可以检查混合物的成分是否分开可观察。快速,展开的时间短。比纸上色谱快速。一般纸上色谱需要几小时至几十小时薄层色谱一般只需十几分钟或几十分钟。使用无机吸附剂,薄层色谱
分离法之蒸馏
蒸馏利用液体混合物中各组分挥发性的不同,将它们分离的方法和过程,它可以将液体混合物中各组分部分地或全部地分离。除了简单的蒸馏技术外,还有分馏、减压蒸馏、共沸蒸馏、水汽蒸馏、萃取蒸馏、等温蒸馏和亚沸点蒸馏等。
如何制备密度梯度管
密度梯度法是测定聚合物密度的方法之一。聚合物的密度是聚合物的重要参数。对于无规则外性的聚合物材料,密度梯度法是测定其密度的最简单有效方法。而对于结晶性聚合物,其晶区的密度与非晶区的密度是不同的,一般晶区的密度大于非晶区的密度;对于一给定的聚合物,其在100%完全结晶的情况下密度最高,而100%非晶的
兔膀胱平滑肌细胞培养实验——酶分离法
兔膀胱平滑肌细胞培养可以:(1)分离得到高纯度兔膀胱平滑肌细胞;(2)进行细胞学鉴定研究;(3)用于细胞学其他研究。实验方法原理运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长
不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞
(一) 原理 Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(
原代肺泡上皮细胞的体外分离培养
1、完全无血液残留肺脏组织:2、消化肺组织:常用细胞消化酶:胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。经支气管将酶灌注到完整的肺中消化,或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。3、分离纯化细胞:原代肺泡上皮细胞的分离纯化主要方法:(1)密度梯度离心法:密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同