NK细胞活性测定:LDH法
实验方法原理活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。实验材料YAC-1细胞试剂、试剂盒Hank's液RPMI1640完全培养液乳酸锂乳酸钠硝基氯化四氮唑吩嗪二甲酯硫酸盐Tris-HCl缓冲液NP-40TritonNAD试剂盒仪器、耗材酶标仪镊子筛网纱布离心机培养板实验步骤1、LDH基质液的配制乳酸锂5×10-2mol/L硝基氯化四氮唑(INT) 6.6×10-4mol/L吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS) 2.8×10-4mol/L氧化型辅酶Ⅰ(NAD) 1.3×10-3mol/L将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液中(pH8.2)2、靶细胞的传......阅读全文
PNAS:III型干扰素助力NK细胞发挥最佳活性
近日, 来自澳大利亚的科学家在国际学术期刊PNAS发表了一项最新研究进展,他们利用敲除小鼠模型发现III型干扰素对NK细胞发挥效应功能具有重要调节作用。 自然杀伤细胞是正常情况下存在于循环系统中的固有淋巴细胞,具有对抗肿瘤起始转移,促进炎症过程中免疫系统功能执行的作用。到目前为止,虽然关于I型
药物对动物体内NK细胞活性的影响实验
实验方法原理 肺癌是最常见的严重严胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一, 机体免疫功能低下,与肺癌的发生发展密切相关。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 RPMI1640 培养基中止液Hank. s曲拉通X-100仪器、耗材 酶联免疫监测仪96 孔24 孔平底培养板离心沉淀机实验步骤 1. 动物分组及用药(1)
细胞活性检测化学发光细胞活性测定
ATP发光法ATP是细胞的能量直接来源,ATP发光法是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素(Luciferin)与荧光素酶(Luciferase),以细胞内含的ATP为能量来源,发生氧化反应产生生物冷光,因此可通过监测冷光光度,来对应ATP含量并判断细胞增殖状
细胞活性测定方法介绍与使用探讨(MTT法、XTT法、CCK8法...
细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。其中MTT法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但MTT法形成的Formazan为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Form
NK细胞的来源
NK细胞确切的来源还不十分清楚,一般变人直接从骨髓中衍生,其安育成熟信赖于骨髓的微环境。小鼠和人的体外实验表明,胸腺细胞在体外IL-2等细胞因子存在条件下培养也可诱导出NK细胞。小鼠脾脏在体内IL-3诱导下可促进NK细胞的分化。NK细胞主要分布于外周血中,占PBMC5-10%,淋巴结和骨髓中也
趋化活性测定法测定细胞因子活性
具有趋化活性的细胞因子,也称趋化因子,诸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等,能诱导中性粒细胞、单核-巨噬细胞或淋巴细胞等定向迁移。其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。趋化性是诱导细胞由趋化因子低浓度处向趋化因子高浓度处做定向移动的特性,可采用琼脂糖和Boyden盲端微
趋化活性测定法测定细胞因子活性
具有趋化活性的细胞因子,也称趋化因子,诸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等,能诱导中性粒细胞、单核-巨噬细胞或淋巴细胞等定向迁移。其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。趋化性是诱导细胞由趋化因子低浓度处向趋化因子高浓度处做定向移动的特性,可采用琼脂糖和Boyden盲端微
自然杀伤细胞的活性测定
【中文名称】自然杀伤细胞活性测定【概述】自然杀伤细胞(NK)介导天然免疫应答,它不依赖抗体和补体,即能直接杀伤靶细胞,如肿瘤细胞或受病毒感染的细胞等;此外,尚有免疫调节功能,也参与移植排斥反应和某些自身免疫病的发生发展。【参考值】51Cr释放法:自然释放率
细胞活性检测代谢增殖测定
MTT检测法活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使额外添加的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan),并沉积在细胞中,死细胞则无此现象。接着用二甲基亚砜(DMSO)溶解沉积在细胞中的甲瓒后,可利用酶标仪490nm波长测光吸收值,依据吸光值(OD值)计算出活细胞数量。在一定细胞数范围内,吸
MTT法细胞活性检测实验步骤
MTT是一种粉末状化学试剂,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。MTT主要有两个用途:
癌症中的NK细胞
NK细胞在防御实体瘤及其扩散方面发挥着核心作用。研究表明,外周血中的NK活性与总体癌症风险的降低有关,肿瘤浸润性NK细胞是多种恶性肿瘤的阳性预后标志物。尽管NK细胞对于浸润肿瘤组织和消除实体瘤的能力较差,但NK细胞可能位于间质外围,募集树突状细胞,这些细胞随后迁移到次级淋巴器官,在那里它们加速反应性
NK细胞有什么作用?
NK细胞是天然免疫系统中一类十分重要的淋巴细胞,由于其杀伤作用是自发的,无需有抗体存在或预先加以致敏,因此将其命名为自然杀伤细胞。它通过其细胞毒活性和产生淋巴因子,在机体抗感染、抗肿瘤、免疫调节和造血调控等方面发挥重要的免疫功能。 NK细胞和杀伤T细胞在清除病原生物感染靶细胞方面有着相似的功能
NK细胞计数的简介
自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)具有本身的形态、表型及功能特征。NK细胞的确切来源还不十分清楚,一般认为直接从骨髓中衍生,其发育成熟依赖于骨髓的微环境。它分布广泛,在外周血及脾脏中较多,淋巴结和骨髓次之。NK细胞绝大部分为大颗粒淋巴细胞,免疫表型为 CD3+、CD4+
自然杀伤细胞NK细胞的细胞功能
自然杀伤活性由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制,不依赖抗体,因此称为自然杀伤活性。NK细胞胞浆丰富,含有较大的嗜天青颗粒,颗粒的含量与NK细胞的杀伤活性呈正相关。NK细胞作用于靶细胞后杀伤作用出现早,在体外1小时、体内4小时即可见到杀伤效应。NK细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞(包括部分细胞系)、病毒
自然杀伤细胞NK细胞的细胞表型
与T细胞、B细胞相比,NK细胞表面标志的特异性是相对的。人NK细胞mIg-,部分NK细胞CD2、CD3和CD8阳性,表达IL-2受体β链 (P75,CD122),CD11b/CD18阳性。常用检测NK细胞的标记有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。一种稳定表达在
关于NK细胞的细胞表型介绍
与T细胞、B细胞相比,NK细胞表面标志的特异性是相对的。人NK细胞mIg-,部分NK细胞CD2、CD3和CD8阳性,表达IL-2受体β链 (P75,CD122),CD11b/CD18阳性。常用检测NK细胞的标记有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。 一种稳
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA检测法
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 LDH 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 LDH与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠LDH,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Strep
自然杀伤细胞活性测定方法介绍
【概述】自然杀伤细胞(NK)介导天然免疫应答,它不依赖抗体和补体,即能直接杀伤靶细胞,如肿瘤细胞或受病毒感染的细胞等;此外,尚有免疫调节功能,也参与移植排斥反应和某些自身免疫病的发生发展。【参考值】51Cr释放法:自然释放率
自然杀伤细胞NK的表型
与T细胞、B细胞相比,NK细胞表面标志的特异性是相对的。人NK细胞mIg-,部分NK细胞CD2、CD3和CD8阳性,表达IL-2受体β链(P75,CD122),CD11b/CD18阳性。目前常用检测NK细胞的标记有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1(见表7
自然杀伤细胞NK的活化
NK细胞可通过多种途径被活化,包括膜表面的CD2、CD3分子和多种细胞因子。 1.通过CD3分子的ζ链 NK细胞不表达TCR/CD3复合物,但部分NK细胞表达CD3ζ链,当用CD16抗体刺激NK细胞活化时,ζ链发生酪氨酸磷酸化,引起胞浆内Ca2+浓度升高,IP3水平增加,促进细胞因子合成和A
自然杀伤细胞NK的功能
(一)自然杀伤活性 由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制,不依赖抗体,因此称为自然杀伤活性。NK细胞浆丰富,含有较大的嗜天青颗粒,颗粒的含量与NK细胞的杀伤活性呈正相关。NK细胞作用于靶细胞后杀伤作用出现早,在体外1小时、体内4小时即可见到杀伤效应。NK细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞(包括部分细
NK细胞的抑制和激活
NK细胞没有主开关,它们的激活是激活性和抑制性受体相互作用以及免疫检查点的结果(图2)。因此,激活受体直接与转化细胞上过表达的配体相互作用,使NK细胞具有识别和杀伤肿瘤细胞的能力,而不考虑其HLA-I的表达。为了防止NK细胞介导的攻击,健康的宿主细胞表达高水平的MHC-1。事实上,在成熟的NK细胞中
关于NK细胞的来源介绍
NK细胞确切的来源还不十分清楚,一般认为直接从骨髓中衍生,其发育成熟依赖于骨髓的微环境。小鼠和人的体外实验表明,胸腺细胞在体外IL-2等细胞因子存在条件下培养也可诱导出NK细胞。小鼠脾脏在体内IL-3诱导下可促进NK细胞的分化。NK细胞主要分布于外周血中,占PBMC 5~10%,淋巴结和骨髓中也
NK细胞培养与优化
因NK细胞是一种比较难培养的细胞。培养过程会涉及很多问题,如:细胞接种密度如何?NK细胞有哪些特性?NK细胞具有哪些形态特征?...... 使用的NK细胞培养套装为无饲养层细胞体外扩增技术,以外周血单个核细胞(PBMC)为起始种子细胞,结合多种细胞因子的诱导和刺激,实现NK细胞体外特
NK与NKT细胞的异同
NK与NKT细胞的区别:1、细胞类别:NK是机体重要的免疫细胞;NKT(natural killer T)细胞是一群细胞表面既有T细胞受体TCR,又有NK细胞受体的特殊T细胞亚群。2、细胞作用:NK不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关,而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生,识别靶细
外周血自然杀伤细胞(NK)细胞的检测
外周血自然杀伤细胞(NK)细胞的检测 实验步骤
自然杀伤细胞NK细胞的活化途径
通过CD3分子的ζ链NK细胞不表达TCR/CD3复合物,但部分NK细胞表达CD3ζ链,当用CD16抗体刺激NK细胞活化时,ζ链发生酪氨酸磷酸化,引起胞浆内Ca2+ 浓度升高,IP3水平增加,促进细胞因子合成和ADCC作用。通过CD2分子CD2与CD58相互作用或用CD2 McAb刺激可活化NK细胞,
外周血自然杀伤细胞(NK)细胞的检测
实验步骤 展开
自然杀伤细胞NK细胞的来源介绍
NK细胞确切的来源还不十分清楚,一般认为直接从骨髓中衍生,其发育成熟依赖于骨髓的微环境。小鼠和人的体外实验表明,胸腺细胞在体外IL-2等细胞因子存在条件下培养也可诱导出NK细胞。小鼠脾脏在体内IL-3诱导下可促进NK细胞的分化。NK细胞主要分布于外周血中,占PBMC 5~10%,淋巴结和骨髓中也有N