培养细胞的染色实验——苏木精伊红染色法
培养细胞可用各种方法染色,有一般和特殊之分;一般染色为观察细胞一般形态之用,特殊染色为用于观察细胞的特殊成分和结构的染色方法。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。实验材料苏木精试剂、试剂盒甘油冰醋酸伊红铵矾仪器、耗材载玻片盖玻片实验步骤1. 37 ℃温BSS漂洗3 次,每次20 秒~1 分钟;中性福尔马林固定30 分钟;2. 先用蒸馏水漂洗1 次;再用蒸馏水稀释的苏木精液(1/20)染10 分钟;3. 自来水洗、置入1 %NaHCO3液中漂洗至蓝紫色;4. 伊红水溶液中染30 秒~1 分钟;5. 蒸馏水洗,迅速通过丙酮2 次,每次3~5 分钟;6. 通过2:1 丙酮/二甲苯3 次,每次1~2 分钟;7. 通过1:2 丙酮/二甲苯3 次,每次1~2 分钟;8. 纯二甲苯5~10 分钟;9. 把盖片置载物玻片上,用树胶封存,再......阅读全文
流式细胞仪检测细胞凋亡实验Annexin-V/PI双染色法
实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A
流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Heochst-33342/PI双染色法
实验方法原理流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”,因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高,Hoechst 33342在凋亡细
流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Annexin-V/PI双染色法
流式细胞仪检测细胞凋亡可应用于:(1)鉴定细胞凋亡形态;(2)准确的进行凋亡细胞的计数;(3)进行特异的定性分析和定量分析。实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种
原代贴壁细胞吉姆萨染色法
原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备:1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油;2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合,研磨至无颗粒;3. 将剩余的甘油倒入研钵,于56℃保温2h;4. 加入33ml纯甲醇混匀,即为吉姆萨母液,将其保存于棕色试剂瓶内;5. 取9份pH6.80—7.38的Sorense
原代贴壁细胞吉姆萨染色法
原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备:1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油;2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合,研磨至无颗粒;3. 将剩余的甘油倒入研钵,于56℃保温2h;4. 加入33ml纯甲醇混匀,即为吉姆萨母液,将其保存于棕色试剂瓶内;5. 取9份pH6.80—7.38的Soreen缓
各种组织特殊染色法—纤维素染色法
纤维素又称纤维蛋白,在正常的情况下,它是血液内的纤维蛋白原分子聚合而形成的一种特殊蛋白质。正常的组织是见不到纤维素的。但是,当组织受损,血管内皮受到了较为严重的损害,血管通透性随之升高,则可导致大量纤维蛋白的漏出。纤维素性炎症就是以纤维素渗出为主[6]的一种抗损害的症状。在HE感染时于镜下可见到大量
体外培养细胞的染色体标本制备实验
实验材料 细胞实验步骤 1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,
体外培养细胞的染色体标本制备实验
实验材料细胞实验步骤1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,离心
细胞骨架观察实验——鬼笔环肽显示微丝蛋白染色法
实验材料细胞试剂、试剂盒PBS三硝基甲苯甘油仪器、耗材显微镜实验步骤1. 盖片培养细胞(70 %~80 %汇合),PBS洗3 次;2. 2 %的甲醛/PBS 液(甲醛按37 %)固定3 分钟;3. 0.5 %的三硝基甲苯/PBS处理3 次,每次10 分钟;4. PBS漂洗3 次;5. 用罗
瑞氏染色法的染色原理
染色原理物理吸附与化学亲和作用嗜酸性物质→伊红+ Hb、嗜酸性颗粒嗜碱性物质→亚甲蓝+ 细胞核蛋白、L及B胞质
细菌染色标本的抗酸染色法
抗酸染色也可将细菌分为两大类:即抗酸性细菌和非抗酸性细菌。因为临床上绝大多数病原菌为非抗酸性细菌,所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检查项目,只针对性用于结核病、麻风病等的细菌检查。疑似结核分枝杆菌感染的标本,经抗酸染色后以油镜检查,即可作出初步鉴定。将有肺结核症状病人的痰标本,制成涂片后,作萋
细菌的简单染色和革兰氏染色
(一)实验目的:学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法。(二)实验原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔
细菌的简单染色和革兰氏染色
(一)实验目的:学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法。 (二)实验原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或
细菌的简单染色和革兰氏染色
(一)实验目的:学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法。(二)实验原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔
临床化学检查方法介绍精子形态检查介绍
精子形态检查介绍: 精子形态检查是将液化后的精液涂片后染色,在显微镜下观察精子的形态特征,计算正常形态精子的百分比。精子形态检查正常值: 正常形态精于数量大于30%。精子形态检查临床意义: 异常结果:正常形态精子数少于30%,称为畸形精子症,见于精索静脉曲张、生殖系统感染、激素水平异常和药物影
微生物的染色与形态结构观察实验——荚膜染色法
实验方法原理荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质,其主要成分是多糖类,不易被染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄,易变形,因此,制片时一般不用热固定。实验材料圆褐固氮菌试剂、试剂盒荚膜染色液纯甲实验步骤1. 在载玻片一端滴一滴无菌水,取少许培养了
微生物的染色与形态结构观察实验——鞭毛染色法
实验方法原理鞭毛是细菌的运动“器官”,一般细菌的鞭毛都非常纤细,其直径为0.01~0.02 μm,在普通光学显微镜的分辨力限度以外,故需要用特殊的鞭毛染色法,才能看到。鞭毛染色是借媒染剂和染色剂的沉淀作用,使染料堆积在鞭毛上,以加粗鞭毛的直径,同时使鞭毛着色,在普通光学显微镜下能够看到。实验材料苏云
微生物的染色与形态结构观察实验——革兰氏染色法
实验方法原理革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法(Gramstain)不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对于
姐妹染色单体分化染色法
1. 实验原理 姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处理技术。1973年Latt在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromode Oxyurdine,BrdU),用Hoechst 3
瑞氏染色法:染色原理
既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色或蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态
瑞氏染色法染色原理
瑞氏染色法染色原理: 为了观察细胞内部结构,识别各种细胞及其异常变化,血涂片必须进行染色。瑞氏染色法是血细胞分析最经典和最常用的染色法。瑞氏染料: 是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料。染色原理: 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程,此过程既有物理的吸附作用,又有化学的
血细胞化学染色的染色法—中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)的介绍
(1)血细胞化学染色的染色法—中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)的原理:中性粒细胞碱性磷酸酶在pH 9.6左右环境中,能水解磷酸萘酚钠底物释放出萘酚,后者与重氮染料偶联,可形成不溶性的有色沉淀(红色颗粒),定位于细胞酶活性所在处。 (2)血细胞化学染色的染色法—中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP
专家呼吁利用生物标志物提高宫颈癌分级准确性
日前,在“2014年中国妇产科学术会议”上,北京大学人民医院妇科赵昀博士呼吁,发挥生物标志物p16在宫颈病变诊治中的作用,实现对宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的早期准确分级,以期真正降低宫颈癌发病率和死亡率。 CIN是宫颈癌的癌前病变,按严重程度可分为CIN1、CIN2和CIN3三级。目前宫颈
细菌的简单染色(Simple-stain)与革兰氏染色(Gram-stain)
一、目的要求1、学习细菌染色的原理和方法;2、掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法。二、基本原理用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如
关于病理切片的染色和封片的介绍
病理切片常用的染色方法是苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin)染色法,简称H.E染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色,如细胞核中的染色质等;伊红是一种酸性染料,可使组织中的嗜酸性物质染成红色,如多数
流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤注意事项
一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜 的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根
流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤注意事项
一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据
一例化生性骨化组织完全切除后病发乳腺原发性骨肉瘤...
一例化生性骨化组织完全切除后病发乳腺原发性骨肉瘤病例分析病史患者,63岁,女性。乳腺癌常规筛查发现右侧乳房肿块。乳腺X线筛查显示右侧乳房内侧存在35mm非常密集的,钙化的,小叶状肿块。超声扫描显示存在11.1×20.1 mm不规则组织(图1)。图1 a乳房超声图像显示存在不规则组织,11.1×20.
HE染色的方法步骤及注意事项
一、实验步骤:(1)样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS 洗涤3次。(2)样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。(3)染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。(4
影响革兰染色法实验结果的因素分析
1 操作因素 1.1 涂片太厚 在涂片时细菌挑的太多,没法分开,在脱色时就不能将第一步染上的结晶紫的颜色脱去,可能会使革兰阴性菌也出现紫色,误认为革兰阳性菌。 1.2 脱色时间 阳性菌透性小,不易被脱色,阴性菌透性大,易脱色;但这是在固定的时间条件下的结果,如果延长脱色时间,也会使脱色剂渗