脐带和脐血来源干细胞的培养实验_酶消化法
实验材料脐带试剂、试剂盒Wharton胶PBSA胶原酶仪器、耗材培养瓶实验步骤(a)脐带取材后,可在PBSA中保存1〜24h。(b)除去血管,将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块。(c)将剪碎的组织块转移到50mL离心管,用无血清DMEM洗,室温250g离心5min。(d)倒掉上清液,将离心后的沉淀物拍散,浸泡在0.1%胶原酶(大约是沉淀物体积的3倍)中,37℃消化16〜18h。(e)加人适当体积的PBSA(消化液体积的2倍),室温250g离心5min。(f)倒掉上清液,加2.5%胰蛋白酶(大约是沉淀物体积的2倍)37℃处理30min,轻轻搅动。(g)加人适当体积的FBS(消化酶体积的10%)中止胰蛋白酶作用。(h)用培养基洗。(i)用培养基重悬分离得到的细胞,按大约1×103细胞/cm密度将细胞接种到培养瓶中。展开......阅读全文
脐带间充质干细胞原代分离
实验概要本实验方法介绍了脐带间充质干细胞原代分离的操作步骤。主要试剂所用试剂盒:猪脐带间充质干细胞分离和培养试剂盒 货号:PUMS-000-001人脐带间充质干细胞分离和培养试剂盒 货号:HUMS-000-001规格:5次
干细胞的来源介绍
获得胚胎干细胞的方法,可利用人工受精的体外受精过程残留的受精卵,也可利用体细胞转移法。体细胞转移法是将体细胞细胞核以显微注射或电击的方法注入去核的卵细胞中,再将之继续培养到囊胚期。取得成体干细胞可透过脐带,骨髓或周边血液中抽取。脐带血干细胞婴儿出生后遗留在胎盘和脐带中的血是干细胞的重要来源。自198
干细胞的来源介绍
获得胚胎干细胞的方法,可利用人工受精的体外受精过程残留的受精卵,也可利用体细胞转移法。体细胞转移法是将体细胞细胞核以显微注射或电击的方法注入去核的卵细胞中,再将之继续培养到囊胚期。取得成体干细胞可透过脐带,骨髓或周边血液中抽取。脐带血干细胞婴儿出生后遗留在胎盘和脐带中的血是干细胞的重要来源。自198
上皮细胞类培养实验_内皮细胞培养实验
实验方法原理内皮细胞易于从血管分离进行培养成单层细胞,对研究内皮细胞再生生、肿瘤促血管生长因子(TAF)等有很大应用价值。人内皮细胞培养可应用人脐带脐静脉、动物大动脉等,用灌流消化法获取细胞最为简便。实验材料脐带试剂、试剂盒胶原酶消化液PBS仪器、耗材注射器离心管培养基实验步骤1. 取产后的新鲜脐
大鼠星型胶质细胞培养实验——酶消化法
大鼠星型胶质细胞培养可以:(1)用于神经系统发育、分化及再生等基础研究;(2)脑缺血预处理上调神经保护蛋白的机制研究;(3)脑损伤和脑疼痛的研究;(4)新蛋白的功能研究。实验方法原理大鼠星形胶质细胞原代培养后,作胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定,应用缺氧D-Hanks'液及缺
人滑膜细胞原代培养实验_酶消化法
人滑膜细胞原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)用于相应细胞生理、形态学研究;(3)用于相关疾病研究。实验方法原理将人滑膜从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置α-MEM生长培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料滑膜组织试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清生理盐水
人滑膜细胞原代培养实验_酶消化法
人滑膜细胞原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)用于相应细胞生理、形态学研究;(3)用于相关疾病研究。实验方法原理将人滑膜从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置α-MEM生长培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料滑膜组织试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清生理盐水
小鼠肝细胞原代培养实验——胰酶消化法
小鼠肝细胞原代培养可用于:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS
自存脐带血治白血病:尚存三大局限
自我国开展储存脐带血服务以来,“自存脐带血”是否有用,一直都有争议。 近日,媒体一则报道,再次将“自存脐带血”推上公众舆论的风口浪尖。一时间,“自存脐带血”是“救命良方”,还是“商业忽悠”,众口不一。 储存脐带血到底能否救治白血病等血液病?目前在实际应用中还存在哪些局限性?日前,记者采
从脐血来源多能祖细胞(CBMNCs)分离培养CD34+细胞实验1
从CB-MNCs中分离CD34+细胞实验材料CB-MNCs试剂、试剂盒灭菌培养基过柱缓冲液FcR阻断剂CD34微球仪器、耗材柱子(MS+ RS+或LS+ VS+)磁珠细胞分离仪尼龙过滤网 30μm实验步骤(a)准备过柱缓冲液,用抽真空装置去除气体。(b)每108个CB-MNCs用终体积300μL缓冲
从脐血来源多能祖细胞(CBMNCs)分离培养CD34+细胞实验3
实验材料CD34+细胞试剂、试剂盒灭菌MSCs培养基丝裂霉素C100μg mL共培养的培养基细胞因子(干细胞因子IL-6Flt-3配体促血小板生成素)仪器、耗材6孔培养板实验步骤(a)将脐带血来源的间充质干细胞(blood-derived mesenchymal stem cells, CB-MSC
从脐血来源多能祖细胞(CBMNCs)分离培养CD34+细胞实验2
体外扩增CD34+细胞实验材料CD34+细胞试剂、试剂盒灭菌培养基;完全IMDM细胞因子(Flt-3配体干细胞因子促血小板生成素IL-6)仪器、耗材培养瓶实验步骤(a)用添加细胞因子的培养基重悬细胞(50 ng/mL Flt-3配体,50 ng/mL干细胞因子,20 ng/mL促血小板生成素和10
脐带血干细胞移植的存在问题
脐带血干细胞移植尚待解决的问题是一个脐带血的造血干细胞含量较少,尚不足以为多数成年病人提供满意的干细胞数量,同时大规模的脐带血库有待建立,国外已经和正在建立,而国内起步较晚。
脐带血干细胞应用的疾病介绍
血液系统疾病恶性肿瘤免疫系统疾病代谢性疾病急性骨髓纤维化急性混合型白血病腺苷脱氨酶缺乏症(SCID)先天性红血球卟啉症骨髓化生急性淋巴细胞白血病(ALL)裸淋巴细胞综合征(SCID)戈谢病淀粉样变急性髓细胞白血病(AML)Chediak-Higashi综合征(SCID)亨特综合征(MPS-Ⅱ)重症再
脐带血干细胞存储的方法介绍
保存脐带血以备将来使用的干细胞库称为脐带血造血干细胞库(CORD BLOOD BANK),简称脐血库,国际上也称之为称生命银行(LIFE BANK)。包括公共库和家庭库(自体库)。为了方便存储和临床应用,脐带血经过分离制备的过程尽可能的去除红细胞及血浆,其有核细胞成分被富集起来。富集的细胞里即含有多
内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法的简介
1、产后新鲜脐带,无菌剪取 10—15 厘米长一段,如不能立即培养,可于 12 小 时内保存于 4℃。 2、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧, 以防液体返流。 3、用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中徐徐注入浓度为 0.1%的粗制胶原酶,充满血管,消
新技术StemEx促使脐带血干细胞在治疗白血病上出现新突破
近日,由洛约拉大学(Loyola University)医务中心肿瘤学家领导的一项研究发现,实验室里培养脐带血干细胞移植能够显著改善白血病患者和淋巴瘤患者的生存能力。这一结论是其在一年一度的美国血液学年会上宣布的。 对于血癌患者来说,可通过放射性来进行治疗,但是大剂量的辐射治疗存在同时
大鼠星型胶质细胞培养实验——胰酶消化法
实验材料SD大鼠试剂、试剂盒苯巴比妥解剖液胰蛋白酶DnaseDM培养液仪器、耗材离心管培养箱手术器材实验步骤一、 取14.5d SD大鼠一只。二、 苯巴比妥0.5 ml 腹腔注射,待麻醉后置于手术台上,酒精棉球消毒皮肤,开腹取出子宫(约12-14个),放入解剖液中,剖开子宫,取出胚胎,放入解剖液中,
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验_酶消化法
大鼠乳鼠成骨细胞培养培养用于:(1)获得大鼠乳鼠成骨细胞;(2)骨修复的细胞学机制研究。实验方法原理取材于出生2~3 d 小鼠颅骨,以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养,采用胶原酶消化法分离成骨细胞,并进行细胞接种与传代。采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞是一种可靠、简便、快速的细胞原代分离培养
大鼠肝星状细胞原代培养实验_胰酶消化法
大鼠肝星状细胞原代培养可以:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD大鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠小牛血清DMEM酶消化液
神经胶质细胞培养实验_胰蛋白酶消化法
实验材料大鼠试剂、试剂盒CMF-Hanks液胰蛋白酶DMEM F12仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤一、原代培养1. 选用生后1周的新生大白鼠,用碘酒,酒精棉球消毒,断头取其大脑皮层组织。 2. 解剖显微镜下,剥离脑膜,切除大脑髓质部分。 3. 将大脑皮质在无Ca2+、Mg2+Hanks液(CM
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)可用于:(1)作为体外实验模型细胞;(2)研究血管内皮细胞的生物学特性及其与各种疾病的关系。实验方法原理本实验采用新鲜的健康产妇新生儿脐带,采用胶原酶Ⅰ型用消化分离得到脐静脉内皮原代细胞。胶原酶是最理想的血管内皮细胞分离酶,对细胞间质有较强的消化作用,能使上皮细胞与胶原
消化道脂肪酶来源和特点
在相当长的一段时间里人们一直认为消化道中脂类的消化起始于肠道,胃被认为是一个临时性的贮存器官,只起到将脂类与其他营养物质混合和搅拌作用,脂类在肠道内由胰脂肪酶水解,而甘油三酯在胃的酶解过程是可以忽略的。但最近的研究却推翻了这种认识,研究发现十二指肠前脂肪酶(来源和作用于口腔至胃的脂肪酶称作十二指肠前
消化道脂肪酶来源和特点
在相当长的一段时间里人们一直认为消化道中脂类的消化起始于肠道,胃被认为是一个临时性的贮存器官,只起到将脂类与其他营养物质混合和搅拌作用,脂类在肠道内由胰脂肪酶水解,而甘油三酯在胃的酶解过程是可以忽略的。但最近的研究却推翻了这种认识,研究发现十二指肠前脂肪酶(来源和作用于口腔至胃的脂肪酶称作十二指肠前
初代细胞培养实验——消化培养法
初代培养或原代培养,可以用于:(1)从供体获取组织后的首次培养;(2)组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大的变化,具有二倍体遗传性状,在供体来源充分、生物条件稳定的情况下(年龄、性别),在一定程度上能反映体内状态。实验方法原理合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细
血管内皮细胞培养
研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便,其法如下:1、产后新鲜脐带,无菌剪取10—15厘米长一段,如不能立即培养,可于12小时内保存于4℃。2、用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧,以防液体返流。3、用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0.
脐血来源多能祖细胞(CBMNCs)的冻存与复苏实验
实验方法原理 实验材料 CB-MNCs试剂、试剂盒 FBS二甲基亚砜(DMSO)仪器、耗材 冻存管慢速冷冻盒(如Mr.Frosty程序降温盒)或控速降温仪耐液氮储存盒实验步骤 (a)准备冻存液:90%FBS+10%DMSO;放冰上或4℃冰箱冷却,至少30min。(b)CB-MNCs细胞计数。(c)用
脐血来源多能祖细胞(CBMNCs)的冻存与复苏实验
CB-MNCs冻存CB-MNCs的复苏实验方法原理实验材料CB-MNCs 试剂、试剂盒FBS
脐血来源多能祖细胞(CBMNCs)的冻存与复苏实验
CB-MNCs冻存 CB-MNCs的复苏 实验方法原理 实验材料 CB-MNCs
血管内皮细胞原代培养(人脐带静脉灌流消化法)
内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞,对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子(tumor angiogenesis factor,TAF)等有很大价值。研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便,其法如下:1、产后新鲜脐带,无菌剪取10—15厘米长一段,如不能立即培养,可于12小时内保存于