肿瘤细胞体外传代培养及保种
肿瘤细胞体外传代培养及保种可应用于:(1)研究癌变机理;(2)抗癌药检测;(3)癌分子生物学研究。实验方法原理肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,是比较容易培养的细胞。癌细胞形态不规则,细胞界限清晰,对营养要求不高,在体外培养可无限制传代而不凋亡。体外培养的细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列细胞生物学特性鉴定。肿瘤细胞可置于低温下保存。-80℃下可保存细胞半年至一年, 液氮可保存细胞5—10 年, 甚至更长的时间。实验材料肿瘤细胞试剂、试剂盒液氮EDTA保种液仪器、耗材恒温水浴锅低温离心机方瓶CO2培养箱-70度冰箱弯管显微镜离心管滤膜实验步骤一、细胞复苏与培养 将液氮或-80℃保存的肿瘤细胞于37℃ 水浴, 快速溶化, 用8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液, 于1500 转/分, 离心3 分钟。弃上清, 再吸取8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀, 再1500 转/分, 离心3 分钟, 弃上清, 细胞沉淀用1.0......阅读全文
肿瘤细胞体外传代培养及保种
实验材料 肿瘤细胞试剂、试剂盒 液氮EDTA保种液仪器、耗材 恒温水浴锅低温离心机方瓶CO2培养箱-70度冰箱弯管显微镜离心管滤膜实验步骤 一、细胞复苏与培养 将液氮或-80℃保存的肿瘤细胞于37℃ 水浴, 快速溶化, 用8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液, 于1500 转/分, 离心3
肿瘤细胞体外传代培养及保种
肿瘤细胞体外传代培养及保种可应用于:(1)研究癌变机理;(2)抗癌药检测;(3)癌分子生物学研究。实验方法原理肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,是比较容易培养的细胞。癌细胞形态不规则,细胞界限清晰,对营养要求不高,在体外培养可无限制传代而不凋亡。体外培养的细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列细胞生物
免疫组化专题:肿瘤细胞体外传代培养及保种
一. 细胞复苏与培养将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴,快速溶化,用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液,于 1500 转/ 分,离心 3 分钟。 弃上清,再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀,再 1500 转/ 分,离心 3 分钟,弃上清,细胞沉淀用 1.0ml
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏
一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏
一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏
一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基本原
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏2
一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基本原则是
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏1
一、实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏2
(4)复苏: 1.取出冷冻管,立即放入37℃水浴箱中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,移入无菌操作台内。 2.打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。 3.1000rpm离心10分钟,弃去上清液。 4.加适当培养液后将细胞转移至培养瓶中,37℃培养,第二天观察生长情况。 三、实验结果
体外培养肿瘤细胞生物学检测
一旦培养的肿瘤细胞生长成形态上单一的细胞群体或细胞系(或株)后,不论用于实验研究还是建立细胞系,都需要做一系列的细胞生物学测定,主要的目的在于求得证明:所培养的细胞系的确来源于原体内具有恶性的细胞,而非正常细胞或其它细胞。均具有瘤种特异性。阐明一般生物学性状。测定项目数量无明确规定,根据需要而定,以
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验
实验方法原理 抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 小牛血清DMEMDOX仪器、耗材 CO2培养箱无菌钢圈实验步骤 一、培养条件用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2,37℃培养。二、实验步骤1. 将CHO细胞培
体外细胞原代培养和传代培养实验步骤(2)注意事项
三、实验结果计算1.一只小鼠可获得(1~2.5)×108个脾细胞。2.细胞接种后一般几小时内就能贴壁,并开始生长,如接种的细胞密度适宜,5天到一周即可形成单层。3.一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2~4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。四、注意事项1.取材要求新鲜,无菌
细胞传代培养
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。二、材料和试剂1、细胞:贴壁细胞株2、试剂
细胞传代培养
实验概要 细胞生长至高密度时,即须分殖至新的培养瓶中,一般稀释比例为1:3 至1:6,依细胞种类而异。实验材料 无菌磷酸生理缓冲液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca /Mg free, D-PBS,GibcoBRL 21600-010)
体外细胞原代培养和传代培养实验步骤(1)冻存和复苏
一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验_细胞培养技术
实验方法原理体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性,最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。实验材料小鼠试剂、试剂盒小牛血清DMEMDOX仪器、耗材CO2培养箱无菌钢圈实验步骤一、培养条件用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2,37℃培养。二、实验步骤1. 将CHO细胞培养在
细胞传代培养实验
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境,培养箱要求稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)
细胞传代培养技巧
一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂
细胞的传代培养
一. 传代前准备:1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。3.正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。5.准备好将要使用的消毒后的空
原代细胞传代培养
细胞培养过程中,传代是非常重要的环节,若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害,原代细胞因其培养难度高且传代次数有限,细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。美国ScienCell公司根据其丰富的原代细胞培养经验,总结出一套细胞消化的方法,有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家:1. 当细胞达到80-9
细胞的传代培养实验
细胞的传代培养实验可以用于:(1)扩增细胞数量;(2)扩大细胞培养。内容来源:中国医科大学实验指导手册。实验方法原理体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭
细胞传代培养(消化法)
细胞传代培养(消化法)一. 传代前准备: 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。3.正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。5.准备
细胞的传代培养实验
实验方法原理 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2
细胞传代培养的方法
一. 传代前准备:1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。3.正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。5.准备好将要使用的消毒后的空
细胞的传代培养实验
实验方法原理 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2
家蚕细胞的传代培养
实验概要熟练掌握贴壁细胞传代的培养方法。观察传代细胞贴壁、生长和繁殖过程中细胞形态的变化。实验原理离体培养的细胞群体增殖达到一定密度时,细胞的生长和分裂速度就会减慢甚至停止,如不及时分离传代培养,细胞将逐渐衰老死亡。传代培养是指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比例转移,接种到另一培养瓶的培养。贴壁培养
体外异种授精实验检查作用及检查过程
体外异种授精实验检查作用 体外异种授精实验估计精子的受精能力,对判断男子生育力极具价值。即使常规精液分析完全正常,但有时仍不能完全代表精子的授精能力。体外异种授精实验可更准确地估计精子的受精能力,对判断男子生育力极具价值。 体外异种授精实验检查过程 1人精子穿透仓鼠卵子的异种授精实验,2以
循环肿瘤细胞及检测
循环肿瘤细胞是从机体实体肿瘤上脱落,然后进入血液循环的的一种特异性细胞。通过检测循环肿瘤细胞的数量可轻而易举的评估疾病的进程和治疗效果。Cell Search系统能自动检测和计数循环肿瘤细胞,它成为了新一类的诊断工具的标准。系统的特异性、灵敏度和可重复性确保了它能在首次治疗周期对循环肿瘤细胞进行系列
其它源细胞原代细胞与传代培养
其它源细胞原代培养:1、取约500mg脂肪组织(自外科手术患者的皮下获取),再将脂肪组织一次挤压进入准备好的15m离心管中,每个离心管中的组织不超过5ml。2、吸取缓冲液PBS7ml加入到上述装有组织的离心管中,用吸管吹打10~20次,然后静置1min左右,用吸管将组织下层的液体吸出。如此反复直到所
细胞传代培养的步骤介绍
1、附着型胞(adherentcell) (1)吸掉旧培养液。(2)用D-PBS洗涤细胞一至二次。 (3)加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用数分钟,于倒立显微镜下观察,当细胞将要分离而呈现圆粒状时,吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移