溶血空斑形成试验
实验方法原理溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合,在补体参与下,使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解,形成肉眼可见的溶血空斑。根据所操作的方法不同可分为直接溶血空斑试验,间接溶血空斑试验,琼脂固相法,小室液相法,单细胞层法等等。实验材料血清试剂、试剂盒PBSSRBCRPMI1640仪器、耗材平皿烧瓶水浴箱华氏管注射器筛网青霉素瓶离心管加样器实验步骤1. 底层琼脂平皿的制备将1.4 %琼脂加热融化后倾注于平皿内,每个平皿6 ml,凝固后置湿盒37 ℃备用。2. 0.7 %琼脂加热融化后加入华氏管内,每管2 ml,47~49 ℃水浴保温备用。 3. 免疫小鼠脾细胞悬液制备用4×103个绵羊红细胞(SRBC)盐水悬液腹腔免疫小鼠,对照为等量生理盐水。4 天后,小鼠拉脱颈椎处死,取出脾脏,用RPMI164。洗一次后置平皿中不锈钢筛网上,......阅读全文
抗体产生细胞的检测:溶血空斑实验
实验材料 健康小鼠试剂、试剂盒 绵羊红细胞悬液Hanks液凡士林油仪器、耗材 注射器平皿漏斗纱布研钵实验步骤 1. 免疫动物取25%绵羊红细胞悬液1毫升,无菌操作注入小鼠腹腔中。2. 脾细胞液的制备(1)小鼠免疫4天后,颈椎脱位处死,取脾脏,去除脂肪组织,放平皿内,用冷Hanks液洗1~2次。(
关于溶血空斑实验的操作方法介绍
常用的为SPA-SRBC溶血空斑试验。SPA能与人及多数哺乳动物IgG的Fc段呈非特异性结合,利用这一特征,首先将SPA包被SRBC,然后进行溶血空斑测定,可提高敏感度和应用范围。 在该测试系统中,加入抗人Ig抗体,可与受检细胞产生的免疫球蛋白结合形成复合物,复合物上的Fc段可与连接在SRBC
空斑的概念
空斑( lacuna)在将产生大肠杆菌素的细菌和对该种大肠杆菌素敏感的指示菌与软琼脂混合涂在琼脂面上培养时,即可见到单个细胞产生的大肠杆菌素对指示菌起生长抑制作用的小形抑制斑,这就是空斑。初看似如细菌噬菌体形成的噬菌斑,但它没有感染性,为了与噬菌斑相区别,H.Ozeki(1959)将之命名为空斑。
关于免疫脾空斑试验的基本信息介绍
免疫脾空斑试验是测定机体体液免疫(即产生抗体细胞的数量和功能)的一种方法。 通常是以绵羊红细胞免疫小鼠,一定时间后,取脾脏制成匀浆(含有已致敏的抗体形成细胞),与绵羊红细胞混合于软琼脂中制成平板,孵育后,加入补体,再保温一定时间,即可出现肉眼可见的溶血空斑。通过计数每一平板的空斑数,计算出每百
分析瘀斑的形成原因
(1)血管外因素。血管周围组织若因变性、萎缩和松弛,致支撑力量薄弱,则易发生出血形成紫癜。血管外因素多见于老年性或恶病质性紫癜,毛细血管与小血管稍受轻微外力撞压即可引起破裂出血而致紫癜。 (2)血管因素。是指因毛细血管壁的损害,使血液从血管内渗出到血管外形成的紫癜。血管因素所引起的紫癜占全部紫
B细胞功能检测介绍
一、体内试验 B细胞受抗原或促有丝分裂原刺激后,可行分裂增殖并分化成熟为抗体生成细胞,且分泌相应的Ig。B细胞功能减低或缺陷,可表现为体内Ig和血型抗体量下降或缺如,患者对外源性抗原的应答能力减弱或缺如,仅产生极低或不能产生特异性抗体,故临床定量测定受检者血清中各种Ig量和相应血型抗体,可判断B细胞
B细胞功能的检测
一、体内试验 B细胞受抗原或促有丝分裂原刺激后,可行分裂增殖并分化成熟为抗体生成细胞,且分泌相应的Ig。B细胞功能减低或缺陷,可表现为体内Ig和血型抗体量下降或缺如,患者对外源性抗原的应答能力减弱或缺如,仅产生极低或不能产生特异性抗体,故临床定量测定受检者血清中各种Ig量和相应血型抗体,可判断B
B细胞功能检测
(一)B细胞增殖试验 原理与T细胞增殖试验相同,但刺激物不同,小鼠B细胞可用细菌脂多糖(LPS)作为刺激物,人则用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体等刺激。(二)溶血空斑试验 原理:将SRBC免疫的小鼠脾脏(或家兔淋巴结)制成单个细胞悬液,与SRBC在琼脂糖凝胶内混合后倾注于小平皿或玻片上。
关于抗原–抗体反应的类型—补体参与的抗原–抗体反应的介绍
补体一旦被抗原抗体复合物结合后,即不再游离,故可利用这个特性进行免疫反应的研究。补体的溶血、溶菌作用有赖于抗体的存在。当红细胞抗原与相应的红细胞抗体(又称溶血素)作用,有补体参与时,可发生溶血,这称为免疫溶血;体外抗体形成细胞检查法又称溶血空斑试验。如图5所示:在产生抗体的淋巴细胞周围,出现一个
生物学中成斑的形成原因
中文名称成斑英文名称patching定 义当配体与细胞表面特定膜蛋白结合时,膜蛋白发生成簇聚集的现象。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞通信与信号转导(二级学科)
冷溶血试验
实验方法原理 阵发性寒冷性血红蛋白尿症(PCH)是一种自身免疫性溶血综合征患者体内产生一种冷反应性抗体(D-L抗体),这种抗体是一种IgG,在37℃下与红细胞不能牢固结合,当温度低至20℃以下时,如有补体存在D-L抗体便能结合于红细胞表面,当温度再增高至37℃时,由于一系列补体参与反应使红细胞膜上形
热溶血试验
实验方法原理 本试验是利用患者的红细胞在自身的血清(含补体)中于37℃孵育后,由于葡萄糖分解产酸使血清醇化,从而导致溶血发生.实验步骤 以无菌干燥注射器取静脉血2ml,取下针头,缓缓地沿管壁注入消毒小试管中,避免产生气泡,加入少许消毒石蜡覆盖,置37℃孵育箱保温24小时,取出离心沉淀.观察上清液颜色
蔗糖溶血试验
蔗糖溶血试验,是指将红细胞置于低离子浓度的蔗糖溶液中,在37℃条件下,可促进补体和红细胞结合,观察红细胞是否破坏发生溶血。本试验常与酸溶试验一起使用,作为阵法性睡眠性血红蛋白尿症的简易过筛试验。
冷溶血试验
实验方法原理阵发性寒冷性血红蛋白尿症(PCH)是一种自身免疫性溶血综合征患者体内产生一种冷反应性抗体(D-L抗体),这种抗体是一种IgG,在37℃下与红细胞不能牢固结合,当温度低至20℃以下时,如有补体存在D-L抗体便能结合于红细胞表面,当温度再增高至37℃时,由于一系列补体参与反应使红细胞膜上形成
热溶血试验
实验方法原理本试验是利用患者的红细胞在自身的血清(含补体)中于37℃孵育后,由于葡萄糖分解产酸使血清醇化,从而导致溶血发生.实验步骤以无菌干燥注射器取静脉血2ml,取下针头,缓缓地沿管壁注入消毒小试管中,避免产生气泡,加入少许消毒石蜡覆盖,置37℃孵育箱保温24小时,取出离心沉淀.观察上清液颜色,如
胆汁溶血试验
实验方法原理胆盐、去氧胆酸钠和牛磺胆酸钠有选择性地溶解肺炎链球菌,其他链球菌则能耐受这些实际,其机制尚不完全清楚。实验步骤试验方法:1、平板法:去10%去氧胆酸钠溶液一接种环,放在待检菌落上,35℃30min,观察结果。2、试管法:于0.9ml 18-24h培育的培养液内加入10%去氧胆酸钠溶液0.
酸溶血试验
实验方法原理 PNH患者的红细胞由于本身有缺陷,对补体敏感性增高,在酸化的正常血清中,(PH6.0-6.8)经37℃孵育,易破坏溶血.此法较敏感,假阳性少。实验材料 末梢血试剂、试剂盒 HClNaCI溶液仪器、耗材 离心管实验步骤 一、 实验试剂:1. O.2mol/L HCI2. 8.5g/L
蔗糖溶血试验
蔗糖溶血试验介绍: 蔗糖溶血试验,是指将红细胞置于低离子浓度的蔗糖溶液中,在37℃条件下,可促进补体和红细胞结合,观察红细胞是否破坏发生溶血。本试验常与酸溶试验一起使用,作为阵法性睡眠性血红蛋白尿症的简易过筛试验。蔗糖溶血试验正常值: 定性:阴性; 定量:溶血率低于5%。蔗糖溶血试验临
胆汁溶血试验
实验方法原理胆盐、去氧胆酸钠和牛磺胆酸钠有选择性地溶解肺炎链球菌,其他链球菌则能耐受这些实际,其机制尚不完全清楚。实验步骤试验方法:1、平板法:去10%去氧胆酸钠溶液一接种环,放在待检菌落上,35℃30min,观察结果。2、试管法:于0.9ml 18-24h培育的培养液内加入10%去氧胆酸钠溶液0.
冷热溶血试验
【测定原理】阵发性寒冷性血红蛋白尿(paroxysmal cold hemoglobinuria,PCH)患者血清中有一种特殊的冷反应(Donath‐Landsteiner,D‐L)抗体(主要是IgG),当温度低于20℃时(尤其是0~4℃),冷抗体结合于自身或健康人的红细胞上,发生凝集,并吸
酸溶血试验
实验方法原理PNH患者的红细胞由于本身有缺陷,对补体敏感性增高,在酸化的正常血清中,(PH6.0-6.8)经37℃孵育,易破坏溶血.此法较敏感,假阳性少。实验材料末梢血试剂、试剂盒HClNaCI溶液仪器、耗材离心管实验步骤一、 实验试剂:1. O.2mol/L HCI2. 8.5g/L
杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍
由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代,因此形成的子代病毒不含有包含体,为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此,可在光学显微镜下,利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。 1
溶血实验在研究中应用的可能性
1 溶血空斑实验溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法,即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液,与一定量的SRBC结合,于37℃作用下,免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素,在补体的参与下,使抗体形成细胞周围的SRBC溶解,从而在每一个抗体形成细胞周围
溶血实验在研究中应用的可能性
1 溶血空斑实验溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法,即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液,与一定量的SRBC结合,于37℃作用下,免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素,在补体的参与下,使抗体形成细胞周围的SRBC溶解,从而在每一个抗体形成细胞周围
溶血实验在研究中应用的可能性
1 溶血空斑实验溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法,即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液,与一定量的SRBC结合,于37℃作用下,免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素,在补体的参与下,使抗体形成细胞周围的SRBC溶解,从而在每一个抗体形成细胞周围
酸溶血试验(Ham试验)
酸溶血试验也称为Ham试验,是用于诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的一项常用试验。阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者的红细胞膜对补体敏感,当加入到用稀盐酸酸化的血清中(含有补体及备解素),经孵育后可有溶血现象发生,此为阳性结果。正常人则不发生溶血现象,为阴性。该实验用于诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿
什么是皮肤斑贴试验
斑贴试验是测定机体变态反应的一种辅助诊断方法。根据受试物性质配制适当浓度的浸液、溶液、软膏或直接用原物作试剂,将试液浸湿4层1cm2大小的纱布,或将受试物置于纱布上,置前臂屈侧,其上用稍大透明玻璃纸覆盖,四周用橡皮膏固定,经48小时取下,可诱发局部皮肤出现反应,于 48小时、72小时分别根据局部
斑贴试验的适应范围
进行斑贴试验的指征有:①持续性或间断性面部、眼睑、耳部和会阴部湿疹。②慢性手足湿疹。③静脉曲张所致湿疹。④皮肤湿疹样改变,对预期治疗的疗效不好。⑤皮肤湿疹样改变,怀疑或有待排除接触性过敏原。
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验_蚀斑试验法
实验方法原理空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验,是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合,当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时,会造成细胞被溶解而形成空斑,每个空斑系由一个病毒颗粒所造成,计算空斑数目再乘以稀释倍数,即可得知原来的病毒感染单位
体液免疫的B细胞的基本内容
原发性免疫缺陷和继发性免疫缺陷均可导致体液免疫功能下降。原发性体液免疫功能缺陷可能由于B细胞分化障碍,细胞内合成Ig功能紊乱或由于抑制性细胞功能过强。继发性体液免疫功能降低可能由于蛋白质大量丢失,蛋白质吸收障碍、营养不良、免疫抑制治疗的副作用,病毒感染(艾滋病)等。在诊断原发性体液免疫功能缺损中