免疫印迹与免疫检测实验——发光底物显迹
实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris缓冲液发光底物显迹液PBS磷酸盐仪器、耗材保鲜膜摇床实验步骤1. 用50 ml 底物缓冲液洗膜两次以平衡膜，每次15 min。 2. 对于使用硝酸纤维素膜或PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应：膜置于Nitro-Block溶液中5 min，然后以50 ml 底物缓冲液洗5 min。 3. 将膜移入显迹液中，浸泡30 s 或5 min。4. 取出膜，滴干水份，将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上，向后折叠用保鲜膜将膜紧密包裹起来。 5. 在暗房中，将膜正面朝下放在感光胶片上，曝光时间取决于样品，放射自显影几秒或过夜。 6. 如果需要，可用50 ml TBS溶液洗膜15 min，再进行发色显迹。展......阅读全文
底物化学发光的用途
非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,其敏感性达1-5pg。用x光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光,便于反复曝光操作,免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。
底物化学发光操作注意
1. 试剂每个批号均独立优化,请不要混用或稀释试剂以免降低敏感性;2. 加入一抗后膜不能再干燥;3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要;4. 使用前配置化学发光试剂,配置足够覆盖膜片即可,弃去使用过的混合试剂;5. 使用干净取样头取用每种试剂;6. 第一张片子建议曝光1分钟,观察结果后判断最佳曝光时间可
什么是底物化学发光？
根过氧化酶使试剂中的发光物(luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经sds-page分离,并转移到固相膜上(如nc、pvdf)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。
免疫学实验性传播疾病免疫检测介绍
性传播疾病免疫检测介绍： 性传播疾病(STD英文全称)为世界范围内广泛流行的疾病，是一组由性接触或类似性行为及间接接触传播的一组传染性疾病，对人类危害性极大，对家庭和社会构成了严重威胁，已引起了全世界的普遍关注。因此性传播疾病免疫检测成为重要的检测。 性传播疾病免疫检测正常值：
免疫学实验病毒感染免疫检测介绍
病毒感染免疫检测介绍： 病毒感染在临床上常见，但由于病毒的严格细胞内寄生性，病程经过增殖迅速，变化快，繁杂的病毒分离鉴定和传统的血清学检查等难以作为实验室常规检查方法，不能满足临床诊断的需求。近年来出现的快速诊断及分子生物学技术，为临床病毒学检查开创了新方法，提供了方便。 病毒感染免
免疫印迹法实验的操作步骤
一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。三转移：（半干式转移）1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平
免疫印迹法实验的试剂准备
1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。 2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。 3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定
表达蛋白检测实验_免疫印迹法
实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全
表达蛋白检测实验_免疫印迹法
实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全
免疫印迹实验的原理和方法
免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术,在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,然后利用抗原-抗体的特异性反应,从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blotting还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-
SPA－各种免疫检测试剂制备实验
实验方法原理 SPA 纯品系由含 A 蛋白的 Cowan I 株金黄色葡萄球菌中纯化获得。其制备过程除细菌培养外，主要有提取和纯化这两个工艺组成。提取方法多种，其中溶葡萄球菌素与亲和色谱组合方法最有效。现介绍如下。实验材料 菌苔试剂、试剂盒 Tris · HCl碳酸氢铵溶葡萄球菌素饱和硫酸铵仪器、耗
免疫检测方法
免疫检测方法大全2017 免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对
免疫检测方法
免疫检测方法大全2017 免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（一）
一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，
免疫学实验寄生虫感染免疫检测介绍
寄生虫感染免疫检测介绍： 寄生虫感染免疫检测，一方面可以表现为对再感染的抵抗力，另一方面也可发生对宿主有害的变态反应(allergy)，又称超敏反应(hypersensitivity reaction)。变态反应是处于免疫状态的机体，当再次接触相应抗原或变应原时出现的异常反应，常导致宿主组
底物化学发光使用方法
1. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要,在与HRP交联物温育后,膜片更需仔细洗涤,所有步骤均在室温下完成。2. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合a液和
发光底物吖啶酯和鲁米诺哪个更好
吖啶酯类的直接化学发光剂不需酶的催化作用，只需改变溶液的pH等条件就能发光。吖啶酯的化学发光量子产率比鲁米诺高，而且吖啶酯标记条件温和，标记率高，标记后不影响分离。吖啶酯和鲁米诺两者价格也相差很大。
Southern－印迹实验——印迹法
Southern印迹法是将DNA片段从电泳凝胶中转移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此该膜半永久性地重现出凝胶电泳的带型。实验方法原理本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的，稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。实验材料DNA试剂、试剂盒HClNaClTrisNaOH
灵敏度更高－化学发光免疫检测将成医学检测主要手段
抽血化验是再常见不过的事了。12月18日，记者从重医附三院举行的化学发光免疫新技术临床应用学术论坛上获悉，作为精准医疗的组成部分，化学发光免疫检测将逐步替代传统的酶联免疫技术，成为医学检测主要手段。 什么是化学发光免疫检测？重医附三院检验科副主任邓昆说，化学发光免疫检测是将发光物质或酶标记在抗
Western－免疫印迹实验原理和操作步骤
[实验原理]Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
免疫化学发光并非万能，单分子免疫检测未来可期（二）
在过去的近二十年里，数字PCR技术快速发展可以认为是分子诊断领域最令人振奋的技术进步。数字PCR技术（DigitalPCR）最早由Vogelstein于1999年提出，通过在96/384孔板中极限稀释DNA模板进行验证（图2）。2003年Dressmam等发明了BEAMing技术，将磁珠、模板、引物
免疫化学发光并非万能，单分子免疫检测未来可期（一）
前言 化学发光技术已经成为当前免疫诊断市场中最重要的检测技术。自上世纪70年代诞生以来，尽管随着检测设备全自动化水平以及检测元件精密度、试剂生产保存工艺的发展，化学发光技术的检测灵敏度有了显著的提升，然而究其本质而言，无论是酶促发光、直接发光或是电化学发光，化学发光技术在检测原理上在过去
免疫化学发光并非万能，单分子免疫检测未来可期（三）
前言 化学发光技术已经成为当前免疫诊断市场中最重要的检测技术。自上世纪70年代诞生以来，尽管随着检测设备全自动化水平以及检测元件精密度、试剂生产保存工艺的发展，化学发光技术的检测灵敏度有了显著的提升，然而究其本质而言，无论是酶促发光、直接发光或是电化学发光，化学发光技术在检测原理上在过去
免疫化学发光并非万能，单分子免疫检测未来可期（四）
SiMoA系统实际上沿用了数字PCR中的单分子信号放大的方法，通过酶联免疫进行抗原分子酶联标记，再通过酶催化荧光底物的方法替代数字PCR技术中PCR来实现信号放大。根据目前Quanterix官方公布的数据，SiMoA系统是当前全球范围内检测灵敏度最高的免疫检测系统，其cTnI检测下限达到了0.05p
侧流分析在Western－Blot免疫检测中的应用
Immobilon® GO将侧流分析应用到Western Blot免疫检测，提高了检测的可重复性，也更节省人力和时间。 最近有个谜题一直萦绕我心，那就是我和师兄的谜之时间表： 我的一天 跑胶、转膜、标记封闭(1h)一抗(1h)洗膜(文献刚看到一半，要起身操作)(10-15min)二抗(1h)(到饭
BCIP－NBT碱性磷酸酶显色试剂盒的简介和使用方法
英文名称: BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development 规格:50ml 类别分类: 免疫印迹 储存条件: 4℃,避光,12个月 主要用途: 免疫印迹检测中的发色底物显迹,尤其适用于碱性磷酸酶系统。 注意事项: 用NBT氧化后,
－GE最新化学发光检测试剂－ECL－Start新春上市－200mL仅售699元
25年前， GE公司推出了最早用于Western印记实验的化学发光检测试剂——Amersham ECL，并逐渐完善产品线发展为可以满足不同Western Blotting实验需求的大家族。 2015年新春伊始，GE又推出化学发光检测试剂新成员
免疫检测的实验室质量控制
从1949年美国College of American Pathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。 到70年代，实
Western免疫印迹
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Western－免疫印迹
实验概要Western免疫印迹（Western Blotting）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯