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免疫印迹与免疫检测实验——发光底物显迹

实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris缓冲液发光底物显迹液PBS磷酸盐仪器、耗材保鲜膜摇床实验步骤1. 用50 ml 底物缓冲液洗膜两次以平衡膜,每次15 min。 2. 对于使用硝酸纤维素膜或PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应:膜置于Nitro-Block溶液中5 min,然后以50 ml 底物缓冲液洗5 min。 3. 将膜移入显迹液中,浸泡30 s 或5 min。4. 取出膜,滴干水份,将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上,向后折叠用保鲜膜将膜紧密包裹起来。 5. 在暗房中,将膜正面朝下放在感光胶片上,曝光时间取决于样品,放射自显影几秒或过夜。 6. 如果需要,可用50 ml TBS溶液洗膜15 min,再进行发色显迹。展......阅读全文

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯